Detecteren van cryo-immunologische respons veroorzaakt door vroege borstkanker Echogeleide cryoablatie (ICE-studie)

We zullen vrouwen inschrijven met een door biopsie bewezen diagnose van borstkanker in een vroeg stadium (T1 N0), die niet in aanmerking komen voor neo-adjuvante therapie, gepland voor een borstoperatie (mastectomie of nodulectomie), die geïnformeerde toestemming hebben gegeven voor de studie.

We zullen 30 vrouwen rekruteren die cryoablatie zullen ondergaan. Hun resultaten zullen worden vergeleken met die van een controlegroep van 30 vrouwen, die hetzelfde therapeutische pad zullen volgen voor de behandeling van borstkanker zonder cryoablatie uit te voeren.

Het primaire doel van onze studie is de karakterisering van de door immunogene celdood (ICD) geïnduceerde, de ontstekingsreactie en de modulatie van circulerende T-immuuncellen geïnduceerd door tumorcryoablatiebehandeling in het serum van borstkankerpatiënten.

De circulerende ICD-biomarkers HMGB1, calreticuline en HSP70/90 zullen worden geanalyseerd, evenals het profiel van Th1- en Th2-type cytokines (IFN-γ, IL-12 (p40/p70), IL-15, IL-17, IL-2, IL-7, IP-10, IL-13, IL-5, IL-4), pro-inflammatoire cytokines (IL-1α, IL-1β, IL-6, TNF-α, IL-1RA, IL-2R, IL-8, CRP, IL-17, IFN-α), immunosuppressieve cytokines (TGF-β1, IL-10, PGE2), chemokinen (CCL5/RANTES, CCL3/MIP-1α, CCL4/MIP-1β, CCL2/MCP -1, CXCL9/MIG, CCL11/Eotaxin). Subsets van immuuncellen zullen worden gekarakteriseerd door middel van flowcytometrie: naast de conventionele subsets van immuuncellen (NK, Monocyte, Granulocyte, T- en B-cellen), zullen specifieke subsets van T-cellen (Treg, naïef, geheugen, centrale effector) worden gekarakteriseerd en ook de expressie van immuunmarkers geassocieerd met activering (CD137) of onderdrukking/uitputting (PD1, CTLA4, TIM3, LAG3).

Secundaire eindpunten zijn:

1. Effectiviteit en veiligheid van cryoablatiebehandeling

   We zullen de volledige respons op cryoablatie volgens Recist-criteria beoordelen met echografie van de borst en MRI van de borst. Incidentie en ernst van complicaties gerelateerd aan cryoablatie zullen worden gecontroleerd om een ​​veiligheidsprofiel vast te stellen voor het wegnemen van borstkanker met marges van 10 mm rond de primaire tumor.

2. Cryoablatiebehandelingscapaciteit om immunogene tumorceldood te induceren.

   De aanwezigheid en de mate van tumornecrose / apoptose op met hematoxyline-eosine gekleurde secties van chirurgische monsters zal worden geëvalueerd. Immunohistochemische tests zullen worden gebruikt om de activering van apoptotische mechanismen en immunogene celdoodactivering te verifiëren.

3. Tumormicrovesicles komen vrij na cryoablatiebehandeling. Tijdens celdood transporteren microvesicles (MV's) die vrijkomen door de cel een complexe moleculaire lading die kan dienen als bron van antigeenrepertoire en activerende signalen voor antigeen presenterende cellen (APC's). Tumor-afgeleide MV's die vrijkomen in het serum van de patiënten zullen worden geïsoleerd door middel van ultracentrifugatiestappen zoals eerder beschreven. De geïsoleerde MV's zullen worden getest op de expressie van Calreticulin en HMGB1.

Alle geregistreerde patiënten ondergaan een reeks controles zoals hieronder weergegeven (ICE-STUDY STEPS):

inschrijvingscontrole (STEP 0), borst-MRI pre-cryoablatiebehandeling (STEP 1) en post-cryoablatiebehandeling (STEP 4), borstkanker US-geleide cryoablatie

(STAP 2), bloedtest om de immuunrespons te beoordelen (STAP 1, STAP 3, STAP 4, CHIRURGIE en STAP 5) en immunohistopathologische analyse van chirurgische monsters.

Inschrijvingscontrole (STAP 0) wordt uitgevoerd door een radioloog en een oncoloog, waar de medische geschiedenis van de patiënt wordt verzameld en een borstonderzoek van de getroffen plaats wordt uitgevoerd. De patiënt ondergaat ook borstonderzoek om de haalbaarheid van de cryoablatiebehandeling te evalueren (afstand >1 cm tussen de tumor en de huid, de tepel of de borstwand). Als de patiënt geschikt wordt geacht voor het onderzoek, zal het protocol in detail worden geïllustreerd en zal geïnformeerde toestemming worden verkregen.

Borst-MRI zal pre-cryoablatie (STAP 1) en post-cryoablatie (STAP 4) worden uitgevoerd om het succespercentage van Visual-ICE-ablatie te beoordelen. Hiervoor zullen ook algoritmen van kunstmatige intelligentie worden gebruikt. De doeltreffendheid van de cryoablatiebehandeling zal ook worden geëvalueerd met echografie (STAP 4).

STAP 2 bestaat uit een US-geleide cryoablatiebehandeling van de borstlaesie.

Binnen 21 dagen na inschrijving ondergaat de patiënt een borstoperatie en bloedonderzoek.

Tijdens de Laatste STAP ondergaat de patiënt een klinisch borstonderzoek, een bloedtest om de immuunrespons te beoordelen en een vragenlijst over de tevredenheid van de patiënt.

ICE-STUDIE STAPPEN:

STAP 0: inschrijvingscontrole

• Beeldvorming: VS

• Onderzoek:

  1. toestemming
  2. borstbiopsie met histologisch resultaat
  3. klinische geschiedenis
  4. laboratorium resultaten
  5. klinisch borstonderzoek
  6. farmacologische therapie

STAP 1: Binnen 10 dagen vanaf STAP 0

• Beeldvorming: MRI (pre-cryoablatiebehandeling)

• Onderzoek:

  1. bloedtest voor immuunrespons

  2. bijwerkingen

     STAP 2: CRYOABLATIE (minstens 24 uur na MRI)

• Onderzoek:

  1. cryoablatiecomplicaties en bijwerkingen

     STAP 3: Bloedonderzoek voor immuunrespons (48/72 uur na cryoablatie)

STAP 4: Na 7 dagen na cryoablatie en vóór de operatie

• Beeldvorming: MRI en/of US (behandeling na cryoablatie)

• Onderzoek:

  1. vragenlijst patiënttevredenheid.
  2. Bijwerkingen
  3. farmacologische therapie
  4. klinisch borstonderzoek
  5. bloedtest voor immuunrespons

CHIRURGIE: Binnen 21 dagen vanaf STAP 0

• Onderzoek:

  1. chirurgie
  2. complicaties
  3. specimen histologische evaluatie

  4. bloedtest voor immuunrespons

     STAP 5 - DEFINITIEF: Ten minste 10 dagen na de operatie

• Onderzoek:

  1. vragenlijst patiënttevredenheid
  2. bijwerkingen
  3. farmacologische therapie
  4. klinisch borstonderzoek
  5. bloedtest voor immuunrespons

Alle cryoablatiesessies worden uitgevoerd onder begeleiding van de VS door een door de Board gecertificeerde interventionele radioloog. Biopsie, percutane cryoablatie zal worden uitgevoerd met behulp van een op argon gebaseerde cryoablatie-eenheid (BTG Cryoablatiesysteem).

Zowel preoperatieve echografie als MRI-beelden zullen worden vergeleken om de juiste positionering van de sonde voor tumorablatie te bepalen. Alle procedures zullen worden uitgevoerd onder plaatselijke verdoving door injectie van 2-5 ml lidocaïne 2% proximaal van de tumorlaesie en langs de loop van de cryoprobes. Een of meer cryoprobes worden in de beoogde tumor ingebracht met behulp van Amerikaanse begeleiding, via een kleine incisie in de huid van 1-2 mm. Om door cryo-geïnduceerde huidbeschadiging te voorkomen en de ablatie van borstweefsel op ten minste 1 cm voorbij alle duidelijke tumormarges te vergemakkelijken, worden warmtezakken op de borsthuid geplaatst.

Vanwege de relatief lage warmtebelasting van borstparenchym in vergelijking met inwendige organen, werd geschat dat 1 cm zichtbaar ijs voorbij alle tumorranden nodig zou zijn om cytotoxische temperaturen (bijv. -40°C) in de borsttumor te genereren.

Elke cryoablatiebehandelingssessie bestaat uit twee cycli van 8 minuten, gevolgd door een actieve ontdooifase van 4 minuten en een passieve ontdooifase van 4 minuten. Dit laatste wordt als nuttig beschouwd om de celdood te maximaliseren. Amerikaanse begeleiding zal ook worden gebruikt om de vorming van een homogeen hypoechoisch gebied te verifiëren, dankzij de ijsbal die de tumor rondom omvatte, en om vroege complicaties op te sporen. De sondes worden verwijderd na de tweede fase van ontdooien, zonder hechting van de huid. Na de ingreep kunnen de patiënten binnen 2 uur na de ablatie worden ontslagen, zonder recept.

De klinische uitkomst zal worden geëvalueerd met de US aan het einde van de cryoablatieprocedure en 7 dagen na klinisch onderzoek en MRI. De afwezigheid van dergelijke tekenen of symptomen zal worden geïnterpreteerd als een optimaal klinisch resultaat.

Immunogene CELDOOD en inflammatoire circulerende biomarkers zullen op verschillende tijdstippen worden geanalyseerd (5 tijdstippen:

voor, 48 uur en 7 dagen na cryoablatie; voor en na 10 dagen na de operatie). Plasma zal worden geïsoleerd door met EDTA behandeld bloed (10 ml/monster) door centrifugeren (4000 rpm/5'/4°C) en in porties verdeeld en bewaard bij -80°C.

De gekarakteriseerde ICD-biomarkers zijn: calreticuline, HMGB1, HSP70/90 (door ELISA en/of chemoluminescentie-immuunsandwichtesten).

Circulerende ontstekingsmediatoren zullen ook worden geanalyseerd door het xMAP Multiplex-platform, inclusief de volgende moleculen:

Th1- en Th2-type cytokines (IFN-γ, IL-12 (p40/p70), IL-15, IL-17, IL-2, IL-7, IP-10, IL-13, IL-5, IL-4 ), ontstekingsbevorderend

cytokines (IL-1α, IL-1β, IL-6, TNF-α, IL-1RA, IL-2R, IL-8, CRP, IL-17, IFN-α), immunosuppressieve cytokines (TGF-β1, IL- 10, PGE2), chemokines (CCL5/RANTES, CCL3/MIP-1α, CCL4/MIP-1β, CCL2/MCP-1, CXCL9/MIG, CCL11/Eotaxin)] zullen worden geanalyseerd.

De monsters van elke patiënt zullen tegelijkertijd voor elke biomarker worden geanalyseerd om vertekening tussen experimenten te voorkomen.

Microvesikels zullen worden geïsoleerd door middel van ultracentrifugatiestappen in micromethodeschaal (2 ml plasma) en de analyse van calreticuline en HMGB1 zal worden uitgevoerd door flowcytometrie/ELISA (3 Tijdpunt: vóór, 48 uur en aan het einde van de procedure) Immuunsysteem fenotypering zal uitgevoerd worden door middel van multiparametrische flowcytometrie, die de subsets van immuuncellen karakteriseert (NK-, T-, B-cellen, granulocyten, monocyten). T-cel-subsets zullen specifiek worden gekarakteriseerd voor Treg (CD25/foxp3), naïeve/geheugeneffectorgeheugen-T-cel (CCR7/CD45RA) en voor activerend of uitgeput fenotype (CD137, ICOS, PD1, CTLA4, TIM3, LAG3).