Predyspozycja genetyczna — przewlekła nefrotoksyczność spowodowana CI — biorcy przeszczepu wątroby — potencjalna korelacja — biomarkery moczu

Projekt badania:

To badanie będzie przekrojowym badaniem biorców przeszczepu wątroby, którzy otrzymali przeszczep wątroby i mają co najmniej 6-miesięczną obserwację. Badanie to zostanie przeprowadzone w Northwestern Memorial Hospital, Northwestern Medical Faculty Foundation i Northwestern University.

Pacjenci po przeszczepieniu wątroby i co najmniej 6 miesięcy obserwacji, otrzymujący podtrzymującą immunosupresję (na którą składają się inhibitory kalcyneuryny (CI), cyklosporyna (CsA) lub takrolimus (Tac)) przez cały okres obserwacji po przeszczepie zostaną uwzględnione w analizie.

Dla każdego pacjenta zostaną zebrane następujące informacje:

• Data przeszczepu, wiek, płeć, rasa, przyczyny niewydolności wątroby, przebyty wywiad chorobowy, w tym częstość występowania nadciśnienia tętniczego, cukrzycy, powikłań pooperacyjnych, infekcji pooperacyjnych, liczba epizodów ostrego odrzucania wątroby, zgon, minimalne stężenia CsA i Tac w różnych punktach czasowych po przeszczepie i poziomach sCr przed przeszczepem wątroby, po 1, 6, 12, 24 miesiącach i co roku po przeszczepie.
• GFR (współczynnik filtracji kłębuszkowej) z równaniem MDRD przed przeszczepem wątroby, po 1, 6, 12, 24 miesiącach i co roku po przeszczepie.
• W próbie wykluczenia wszystkich pacjentów z wcześniej występującą CRF przed przeszczepieniem wątroby, tylko pacjenci ze sCr<1,0 mg/dl przed przeszczepem wątroby zostaną uwzględnione w naszej analizie.

Genotypowanie:

• DNA zostanie wyekstrahowane przy użyciu krwi kożuchowej od biorców przeszczepów wątroby.
• Określenie genotypów ACE zostanie przeprowadzone przy użyciu starterów specyficznych dla sekwencji reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR-SSP) i polimorfizmu długości fragmentów restrykcyjnych reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR-RFLP).
• Na podstawie obliczenia GRF za pomocą równania MDRD pacjenci po przeszczepie wątroby zostaną podzieleni na trzy grupy w oparciu o stopień zaawansowania przewlekłej choroby nerek NKF:

Grupa I->normalny GFR (>90ml/min/1,73m2). Stopień I CKD Grupa II->GFR między 30-59ml/min/1,73m2. Stopień III CKD Grupa III->GFR między 15-29ml/min/1,72m2. PChN stopnia IV

• Mocz (80 ml) zostanie pobrany od wszystkich pacjentów w 3 grupach i przeanalizowany pod kątem biomarkerów zwłóknienia śródmiąższowego i uszkodzenia kanalików proksymalnych. Specyficzne biomarkery, które zostaną przetestowane, to: TGF-beta1 w moczu, cząsteczka uszkodzenia nerek-1 i angiotensynogen. Biomarkery moczu zostaną znormalizowane do poziomu kreatyniny i przeanalizowane za pomocą testu ELISA.
• Krew (20 ml) zostanie pobrana podczas jednej wizyty.
• Od wszystkich badanych wymagane będzie dodatkowe pobranie krwi (18 cm3). Krew ta zostanie wykorzystana do badania tolerancji przeszczepów narządów u pacjentów, którzy obecnie stosują leki immunosupresyjne.

Plan statystyczny – Badania statystyczne do wykonania:

Po przeprowadzeniu genotypowania pacjentów po przeszczepie wątroby i pobraniu próbek moczu porównamy rozwój CKD po przeszczepie wątroby pod kątem powiązań z biomarkerami moczu i polimorfizmami genu ACE. Dwa testy t zostaną wykorzystane do porównania różnic w zmiennych ciągłych między pacjentami z wątrobą o różnym stopniu CKD; testy chi-kwadrat zostaną użyte do porównania różnic w zmiennych dyskretnych. Przeprowadzona zostanie również wielowymiarowa analiza regresji logistycznej w celu zidentyfikowania kombinacji zmiennych klinicznych i polimorfizmów genów, które są istotnie związane z rozwojem dysfunkcji nerek po przeszczepie wątroby.

Badanie to pozwoli nam poznać i ocenić potencjalne predyspozycje genetyczne do rozwoju dysfunkcji nerek po ekspozycji na CI. Jeśli nasza hipoteza jest słuszna, badanie składowej genotypów RAS może pomóc w identyfikacji pacjentów zagrożonych nefrotoksycznością CI i pomóc w wstępnej selekcji kandydatów do przeszczepu wątroby, u których należy unikać stosowania CI jako pierwotnej immunosupresji.

Ponadto dane uzyskane z tego badania mogą służyć jako mocna podstawa dla prospektywnego projektu założonego przez NIH, aby przyjrzeć się roli czynników blokujących układ renina-angiotensyna w zapobieganiu przewlekłej nefrotoksyczności wywołanej przez CI.