Analiza metodą cytometrii przepływowej ekspresji mieloperoksydazy neutrofili we krwi obwodowej w celu wykluczenia zespołów mielodysplastycznych: protokół badania dokładności diagnostycznej (MPO-MDS-Valid)

Głównym celem badania MPO-MDS-Valid jest oszacowanie dokładności dyskryminacyjnej (tj. oszacowania obszaru pod krzywą ROC wraz z 95% przedziałem ufności [CI]) wewnątrzosobniczej RCV dla ekspresji mieloperoksydazy neutrofili we krwi obwodowej do rozpoznania MDS u ​​kolejnych pacjentów.

Cele drugorzędne to:

1. Oszacowanie ujemnej wartości predykcyjnej wewnątrzosobniczej RCV dla ekspresji mieloperoksydazy neutrofilowej we krwi obwodowej (z ustalonym progiem 30,0%) dla wykluczenia MDS u ​​kolejnych pacjentów.
2. Aby oszacować częstość występowania alternatywnych rozpoznań ustalonych na podstawie cytomorfologii szpiku kostnego wśród pacjentów prawdziwie ujemnych (tj. pacjentów z osobniczą wartością RCV niższą niż 30,0% i u których metodą referencyjną wykluczono MDS).

Projekt badania: Projekt badania MPO-MDS-Valid to wieloośrodkowe badanie dokładności diagnostycznej testu wskaźnikowego przez porównanie ze standardem referencyjnym u niewyselekcjonowanych kolejnych pacjentów. Instytucjonalna komisja rewizyjna (Comité de Protection des Personnes Nord Ouest III) dokonała przeglądu i zatwierdziła protokół badania i formularz informacyjny przed rozpoczęciem badania. Uczestnikom nie jest przypisana żadna konkretna interwencja. Wszystkie badania diagnostyczne, procedury i zamawianie leków są wykonywane według uznania lekarzy prowadzących. Wynik testu wskaźnikowego nie będzie miał wpływu na postępowanie z pacjentem.

Badania przesiewowe: Wszyscy kolejni pacjenci skierowani z podejrzeniem MDS do laboratorium immunohematologicznego w ośrodkach badawczych zostaną poddani badaniu przesiewowemu pod kątem kwalifikowalności. Lekarz laboratoryjny dokona przeglądu kryteriów włączenia i wyłączenia, korzystając z skomputeryzowanej dokumentacji medycznej i laboratoryjnej.

Rekrutacja: Uczestnicy zostaną włączeni do badania po przeprowadzeniu wszystkich czynności przesiewowych i tylko wtedy, gdy pacjent spełni wszystkie kryteria włączenia i żadne kryteria wykluczenia. Wyrażenie zgody na analizę próbki krwi obwodowej metodą cytometrii przepływowej i zebranie danych poprzez przegląd karty będzie wymagać zasady „brak sprzeciwu” (opt-out): po dostarczeniu odpowiedniej pisemnej informacji dane zostaną zebrane, z wyjątkiem przypadków sprzeciwu od pacjenta. Wszyscy pacjenci włączeni do badania otrzymają unikalny numer identyfikacyjny pacjenta. Numer ten będzie używany do identyfikacji pacjenta przez cały czas trwania badania.

Test wskaźnikowy: Analiza metodą cytometrii przepływowej ekspresji mieloperoksydazy neutrofili we krwi obwodowej będzie ślepa na wzorzec referencyjny. Ekspresja mieloperoksydazy w populacji neutrofilów krwi obwodowej u danego osobnika będzie wyrażana jako RCV. Wewnątrzosobnicze RCV oblicza się jako solidne odchylenie standardowe podzielone przez medianę. Odporne odchylenie standardowe jest funkcją odchylenia poszczególnych punktów danych od mediany badanej populacji. Wewnątrzosobnicze RCV jest wyrażone w procentach i odzwierciedla zmienność ekspresji mieloperoksydazy w populacji neutrofilów krwi obwodowej u danego osobnika.

Standard referencyjny: W każdym ośrodku badawczym doświadczeni hematopatolodzy, którzy nie znają testu wskaźnikowego, przeprowadzą cytomorfologiczną ocenę aspiratu szpiku kostnego.

W stosownych przypadkach ocenę morfologiczną można uzupełnić o wynik cytometrii przepływowej szpiku kostnego, kariotyp i profilowanie molekularne. Kryteria referencyjne dla MDS to 1) obecność ≥10% komórek dysplastycznych w dowolnej linii krwiotwórczej w aspiracie szpiku kostnego oraz 2) wykluczenie ostrej białaczki szpikowej (określanej jako obecność ≥20% blastów szpiku kostnego). Zgodnie z klasyfikacją WHO, podkategoryzacja MDS będzie opierać się na stopniu dysplazji (jednoliniowość w porównaniu z wieloliniowością), procentach blastów, obecności syderoblastów pierścieniowych i analizie cytogenetycznej (del(5q)).

Kryteriami referencyjnymi rozpoznania przewlekłej białaczki mielomonocytowej (CMML) są: 1) obecność przetrwałej monocytozy krwi obwodowej ≥1 x109/l oraz 2) ilość monocytów stanowiąca ponad 10% różnicowej liczby krwinek białych. Idiopatyczna cytopenia o niepewnym znaczeniu (ICUS) zostanie zdefiniowana jako niewyjaśniona łagodna, utrzymująca się cytopenia przez 4 do 6 miesięcy i niemożność ustalenia rozpoznania MDS zgodnie z kryteriami referencyjnymi.

Pacjenci z potwierdzonym podejrzeniem MDS: Uczestnicy, u których standard referencyjny potwierdzi rozpoznanie MDS (lub CMML), zostaną sklasyfikowani jako pacjenci z potwierdzonym podejrzeniem MDS.

Pacjenci z niepotwierdzonym podejrzeniem MDS: Uczestnicy, u których standard odniesienia wyklucza rozpoznanie MDS (lub CMML), zostaną sklasyfikowani jako pacjenci z niepotwierdzonym podejrzeniem MDS. Ta ostatnia podgrupa będzie obejmowała pacjentów z ICUS, jak zdefiniowano zgodnie z opublikowanymi wytycznymi.