Analisi citometrica a flusso dell'espressione della mieloperossidasi neutrofila nel sangue periferico per escludere le sindromi mielodisplastiche: protocollo per uno studio di accuratezza diagnostica (MPO-MDS-Valid)

L'obiettivo principale dello studio MPO-MDS-Valid è stimare l'accuratezza discriminativa (ovvero l'area sotto la stima del punto della curva ROC insieme all'intervallo di confidenza al 95% [CI]) dell'RCV intra-individuale per l'espressione della mieloperossidasi dei neutrofili nel sangue periferico per la diagnosi di MDS in pazienti consecutivi.

Gli obiettivi secondari sono:

1. Stimare il valore predittivo negativo dell'RCV intra-individuale per l'espressione della mieloperossidasi dei neutrofili nel sangue periferico (con una soglia prespecificata del 30,0%) per escludere MDS in pazienti consecutivi.
2. Per stimare la prevalenza di diagnosi alternative stabilite dalla citomorfologia del midollo osseo tra i pazienti veri negativi (cioè pazienti con valore di RCV intra-individuale inferiore al 30,0% e per i quali la MDS è stata esclusa dal metodo di riferimento).

Disegno dello studio: il progetto di studio MPO-MDS-Valid è uno studio multicentrico sull'accuratezza diagnostica di un test indice rispetto a uno standard di riferimento in pazienti consecutivi non selezionati. Un comitato di revisione istituzionale (Comité de Protection des Personnes Nord Ouest III) ha esaminato e approvato il protocollo dello studio e il modulo informativo, prima dell'inizio dello studio. Nessun intervento specifico è assegnato ai partecipanti. Tutti i test diagnostici, le procedure e l'ordinazione dei farmaci vengono eseguiti a discrezione dei medici curanti. Il risultato del test indice non avrà alcun impatto sulla gestione del paziente.

Screening: tutti i pazienti consecutivi indirizzati per sospetto di MDS al laboratorio di immunoematologia presso i siti dello studio saranno sottoposti a screening per l'idoneità. Un medico di laboratorio esaminerà i criteri di inclusione ed esclusione, utilizzando cartelle cliniche e di laboratorio computerizzate.

Reclutamento: i partecipanti saranno inclusi nello studio una volta condotte tutte le attività di screening e solo se il paziente soddisfa tutti i criteri di inclusione e nessuno di esclusione. Il consenso per l'analisi in citofluorimetria del campione di sangue periferico e la raccolta dei dati tramite revisione della cartella sarà richiesto in regime di "non opposizione" (opt-out): previa consegna di idonea informativa scritta, i dati saranno raccolti salvo opposizione dal paziente. A tutti i pazienti inclusi nello studio verrà assegnato un numero di identificazione univoco del paziente. Questo numero verrà utilizzato per identificare il paziente durante lo studio.

Test dell'indice: l'analisi citofluorimetrica dell'espressione della mieloperossidasi dei neutrofili nel sangue periferico sarà in cieco rispetto allo standard di riferimento. L'espressione della mieloperossidasi nella popolazione di neutrofili del sangue periferico all'interno di un singolo soggetto sarà espressa come RCV. L'RCV intra-individuale è calcolato come deviazione standard robusta divisa per la mediana. La deviazione standard robusta è una funzione della deviazione dei singoli punti dati rispetto alla mediana della popolazione dello studio. L'RCV intra-individuale è espresso come percentuale e riflette la variabilità nell'espressione della mieloperossidasi nella popolazione di neutrofili del sangue periferico all'interno di un singolo soggetto.

Standard di riferimento: in ogni centro dello studio, la valutazione citomorfologica dell'aspirato di midollo osseo sarà eseguita da ematopatologi esperti, all'oscuro del test indice.

La valutazione morfologica può essere integrata dal punteggio citometrico del flusso del midollo osseo, dal cariotipo e dal profilo molecolare, ove pertinente. I criteri di riferimento per MDS sono 1) la presenza di ≥10% di cellule displastiche in qualsiasi lignaggio ematopoietico su aspirato di midollo osseo e 2) l'esclusione della leucemia mieloide acuta (definita dalla presenza di ≥20% di blasti di midollo osseo). Coerentemente con la classificazione dell'OMS, la sottocategorizzazione delle MDS si baserà sul grado di displasia (unilinea contro multilinea), percentuali di blasti, presenza di sideroblasti ad anello e analisi citogenetica (del(5q)).

I criteri di riferimento per la diagnosi di leucemia mielomonocitica cronica (CMML) sono 1) la presenza di monocitosi persistente nel sangue periferico ≥1 x109/L e 2) monociti che rappresentano oltre il 10% della conta differenziale dei globuli bianchi. La citopenia idiopatica di significato incerto (ICUS) sarà definita da citopenia lieve persistente inspiegabile da 4 a 6 mesi e dall'incapacità di stabilire la diagnosi di MDS secondo i criteri di riferimento.

Pazienti con sospetto confermato di MDS: i partecipanti per i quali la diagnosi di MDS (o CMML) è confermata dallo standard di riferimento saranno classificati come pazienti con sospetto confermato di MDS.

Pazienti con sospetto non confermato di MDS: i partecipanti per i quali la diagnosi di MDS (o CMML) è esclusa dallo standard di riferimento saranno classificati come pazienti con sospetto non confermato di MDS. Quest'ultimo sottogruppo comprenderà i pazienti con ICUS, come definito in accordo con le linee guida pubblicate.