Análise por citometria de fluxo da expressão da mieloperoxidase de neutrófilos do sangue periférico para descartar síndromes mielodisplásicas: protocolo para um estudo de precisão diagnóstica (MPO-MDS-Valid)

O objetivo principal do estudo MPO-MDS-Valid é estimar a precisão discriminativa (ou seja, área sob a estimativa do ponto da curva ROC juntamente com intervalo de confiança de 95% [CI]) do RCV intraindividual para a expressão da mieloperoxidase de neutrófilos no sangue periférico para o diagnóstico de SMD em pacientes consecutivos.

Os objetivos secundários são:

1. Estimar o valor preditivo negativo do RCV intraindividual para a expressão da mieloperoxidase neutrofílica no sangue periférico (com um limiar pré-especificado de 30,0%) para descartar SMD em pacientes consecutivos.
2. Estimar a prevalência de diagnósticos alternativos estabelecidos por citomorfologia da medula óssea entre pacientes verdadeiros negativos (ou seja, pacientes com valor de VCR intraindividual inferior a 30,0% e para quem o MDS foi descartado pelo método de referência).

Desenho do estudo: O projeto de estudo MPO-MDS-Valid é um estudo multicêntrico de precisão diagnóstica de um teste índice em comparação com um padrão de referência em pacientes consecutivos não selecionados. Um conselho de revisão institucional (Comité de Protection des Personnes Nord Ouest III) revisou e aprovou o protocolo do estudo e o formulário de informações, antes do início do estudo. Nenhuma intervenção específica é atribuída aos participantes. Todos os testes de diagnóstico, procedimentos e prescrição de medicamentos são realizados a critério dos médicos assistentes. O resultado do teste índice não terá impacto no tratamento do paciente.

Triagem: Todos os pacientes consecutivos encaminhados por suspeita de SMD para o laboratório de imuno-hematologia nos locais de estudo serão rastreados para elegibilidade. Um médico de laboratório revisará os critérios de inclusão e exclusão, usando registros médicos e laboratoriais computadorizados.

Recrutamento: Os participantes serão incluídos no estudo assim que todas as atividades de triagem forem realizadas e somente se o paciente atender a todos os critérios de inclusão e nenhum de exclusão. O consentimento para análise por citometria de fluxo de amostra de sangue periférico e coleta de dados por meio de revisão de prontuário será solicitado em regime de "não oposição" (opt-out): após a entrega de informações escritas apropriadas, os dados serão coletados, exceto em caso de oposição do paciente. Todos os pacientes incluídos no estudo receberão um número de identificação de paciente exclusivo. Este número será usado para identificar o paciente durante todo o estudo.

Teste de índice: A análise por citometria de fluxo da expressão da mieloperoxidase de neutrófilos no sangue periférico será cega para o padrão de referência. A expressão da mieloperoxidase na população de neutrófilos do sangue periférico dentro de um sujeito individual será expressa como RCV. O RCV intraindividual é calculado como o desvio padrão robusto dividido pela mediana. O desvio padrão robusto é uma função do desvio de pontos de dados individuais para a mediana da população de estudo. O RCV intra-individual é expresso como porcentagem e reflete a variabilidade na expressão da mieloperoxidase na população de neutrófilos do sangue periférico dentro de um sujeito individual.

Padrão de referência: Em cada local de estudo, a avaliação citomorfológica do aspirado de medula óssea será realizada por hematopatologistas experientes cegos para o teste índice.

A avaliação morfológica pode ser complementada pelo escore citométrico de fluxo da medula óssea, cariótipo e perfil molecular, quando relevante. Os critérios de referência para SMD são 1) a presença de ≥10% de células displásicas em qualquer linhagem hematopoiética no aspirado de medula óssea e 2) a exclusão de leucemia mielóide aguda (definida pela presença de ≥20% de blastos de medula óssea). Consistente com a classificação da OMS, a subcategorização de SMD será baseada no grau de displasia (unilinhagem versus multilinhagem), porcentagens de blastos, presença de sideroblastos em anel e análise citogenética (del(5q)).

Os critérios de referência para o diagnóstico de leucemia mielomonocítica crônica (LMMC) são 1) a presença de monocitose persistente no sangue periférico ≥1 x109/L e 2) monócitos representando mais de 10% da contagem diferencial de glóbulos brancos. A citopenia idiopática de significado incerto (ICUS) será definida por citopenia persistente leve inexplicável por 4 a 6 meses e falha em estabelecer o diagnóstico de SMD de acordo com os critérios de referência.

Pacientes com suspeita confirmada de SMD: Os participantes para os quais o diagnóstico de SMD (ou CMML) é confirmado pelo padrão de referência serão categorizados como pacientes com suspeita confirmada de SMD.

Pacientes com suspeita não confirmada de SMD: Os participantes para os quais o diagnóstico de SMD (ou CMML) é descartado pelo padrão de referência serão categorizados como pacientes com suspeita não confirmada de SMD. Este último subgrupo incluirá pacientes com ICUS, conforme definido de acordo com as diretrizes publicadas.