Projeto A3sc - Um Atlas de Vias Aéreas em Nível de Célula Única (AAAsc)

A crescente incidência de doenças respiratórias crônicas é um problema de saúde pública que afeta centenas de milhares de pessoas em todo o mundo, incluindo crianças. Diretamente expostas aos aerocontaminantes atmosféricos (poluição, alérgenos), as vias respiratórias representam um ecossistema complexo que envolve diferentes células que desenvolvem interações complexas com o tecido conjuntivo circundante, mas também com seu rico ambiente imunológico e com a microbiota. Embora um continuum fisiopatológico seja postulado entre as vias aéreas nasais e brônquicas em certas doenças, como doenças alérgicas, identificamos amplos gradientes na expressão gênica entre amostras nasais e brônquicas. É por isso que a variabilidade celular ao longo da árvore respiratória precisa ser estudada em detalhes.

O sequenciamento de RNAs especificamente presentes em uma determinada célula, e sua comparação com células vizinhas, nos permite documentar contribuições celulares precisas e relações intercelulares. Nosso projeto estabelecerá protocolos para estabilizar swabs de vias aéreas por escovação e/ou biópsia, em condições que permitirão a análise de perfis de expressão gênica em nível de célula única (sequenciamento de RNA de célula única).

O desenvolvimento do protocolo de estabilização e análise "single cell" será realizado primeiro em culturas primárias de epitélio respiratório e depois estendido a espécimes respiratórios retirados de voluntários saudáveis. Através da amostragem em vários níveis da árvore respiratória, as variações na expressão ao longo do eixo traqueobrônquico serão totalmente documentadas. Finalmente, a interação entre o compartimento epitelial e o compartimento imunológico será estudada através da análise da expressão gênica em uma única célula em diferentes contextos fisiopatológicos.