Perda Muscular em Paciente em Hemodiálise

Hipótese Medir a 3-metil-histidina urinária é uma ferramenta simples para avaliar a proteólise na prática clínica. Porém não é totalmente específico da proteólise muscular, pois pode refletir um catabolismo intestinal. Além disso, sua dosagem não pode ser usada em pacientes com insuficiência renal, especialmente em caso de anúria. Além de obter a biópsia muscular ou medir a cinética geral das proteínas, ainda não existe uma ferramenta de diagnóstico simples e reprodutível para medir a proteólise muscular. Com o presente estudo, os pesquisadores esperam identificar no sangue dos pacientes um perfil transcriptômico particular relacionado à ativação da proteólise muscular, incluindo transcrições aumentadas de citocinas pró-inflamatórias.

Modelos de DRC em roedores foram usados ​​para identificar o principal sistema proteolítico e a via de sinalização implicada na perda de massa muscular causada pela uremia. Esses achados precisam ser confirmados em estudos com humanos. Além disso, outros atores da atrofia muscular podem ser identificados em humanos. Notavelmente, até agora, poucos estudos foram realizados para determinar quais E2 estão envolvidos na atrofia muscular e, para conhecimento dos investigadores, ninguém na DRC. Finalmente, os dados sobre substratos de proteassoma muscular são limitados, uma vez que apenas a actina foi claramente identificada em humanos pela equipe. Os investigadores esperam uma ativação do sistema proteassoma com um aumento na expressão das enzimas E2s, E3s incluindo MURF1 e MAFbx e subunidade proteassoma em pacientes tratados com hemodiálise. Os investigadores também puderam observar uma ativação do sistema de caspases que, acredita-se, funciona em conjunto com o no-break.

Materiais e métodos 2.1. População Os experimentos serão realizados com amostras de sangue e biópsias musculares humanas obtidas durante cirurgia ortopédica programada (controle negativo), câncer (controle positivo) e pacientes em hemodiálise. Este programa de investigação translacional já foi aceite (DGS 2008-A00479-46) e a inclusão de doentes já iniciada. Serão incluídos no máximo 15 pacientes por grupo. Os critérios de inclusão e exclusão foram estabelecidos de acordo com os objetivos (ausência de qualquer patologia para controles, etc.) e a legislação (consentimento por escrito, etc.). Trinta e dois pacientes já foram incluídos até agora, e as biópsias são armazenadas em nitrogênio líquido. As amostras de sangue são coletadas imediatamente antes da cirurgia usando tubos de RNA Paxgene e armazenadas de acordo com as instruções do fabricante até a análise.

2.2. Amostra de sangue O RNA total será extraído do sangue usando o kit Paxgene RNA Extraction e analisado por RNAseq 2.3. Biópsias musculares 2.3.1. Análise transcriptômica O RNA total será extraído de biópsias musculares humanas usando kits comerciais. Os investigadores verificarão primeiro se os marcadores musculares conhecidos são regulados positivamente em biópsias de pacientes com câncer (controles positivos) e abordam seus níveis em biópsias musculares de pacientes em hemodiálise. Iremos assim realizar qRT-PCR UBE2B, UBE2D2, MaFbx, MuRF1, Ozz, ASB2, E4B, Nedd4, Mdm2 e subunidades de proteassoma 26S.

2.3.2. Análise proteômica A análise proteômica será realizada usando análise de espectrometria shot gun