Zanik mięśni u pacjenta poddawanego hemodializie

Hipoteza Pomiar 3-metylohistydyny w moczu jest prostym narzędziem do oceny proteolizy w praktyce klinicznej. Jednak nie jest to całkowicie specyficzne dla proteolizy mięśniowej, ponieważ może odzwierciedlać katabolizm jelitowy. Ponadto jego dawkowanie nie może być stosowane u pacjentów z zaburzeniami czynności nerek, zwłaszcza w przypadku bezmoczu. Poza wykonaniem biopsji mięśnia czy pomiarem ogólnej kinetyki białek nie istnieje jeszcze proste i powtarzalne narzędzie diagnostyczne do pomiaru proteolizy mięśnia. W ramach niniejszego badania badacze spodziewają się zidentyfikować we krwi pacjentów określony profil transkryptomiczny związany z aktywacją proteolizy mięśni, w tym zwiększone transkrypty cytokin prozapalnych.

Modele CKD gryzoni wykorzystano do zidentyfikowania głównego układu proteolitycznego i szlaku sygnałowego związanego z zanikiem mięśni spowodowanym mocznicą. Odkrycie to musi zostać potwierdzone w badaniach na ludziach. Ponadto u ludzi można zidentyfikować inne czynniki powodujące zanik mięśni. Warto zauważyć, że do tej pory przeprowadzono niewiele badań w celu określenia, które E2 są zaangażowane w zanik mięśni, a według wiedzy badaczy nikt w CKD. Wreszcie, dane na temat substratów proteasomów mięśniowych są ograniczone, ponieważ zespół wyraźnie zidentyfikował u ludzi tylko aktynę. Badacze spodziewają się aktywacji układu proteasomu wraz ze wzrostem ekspresji enzymów E2s, E3s, w tym MURF1 i MAFbx oraz podjednostki proteasomu u pacjentów poddawanych hemodializie. Badacze mogli również zaobserwować aktywację systemu kaspazy, który, jak się uważa, współpracuje z zasilaczem UPS.

Materiały i metody 2.1. Populacja Eksperymenty zostaną przeprowadzone z wykorzystaniem próbek krwi i biopsji mięśni ludzkich uzyskanych podczas zaprogramowanych operacji ortopedycznych (kontrola negatywna), onkologicznych (kontrola pozytywna) oraz pacjentów hemodializowanych. Ten translacyjny program badawczy został już zaakceptowany (DGS 2008-A00479-46) i włączenie pacjentów już się rozpoczęło. Grupa obejmie maksymalnie 15 pacjentów. Kryteria włączenia i wyłączenia zostały ustalone zgodnie z celami (brak jakichkolwiek patologii w kontrolach itp.) oraz przepisami prawa (pisemna zgoda itp.). Do tej pory uwzględniono już trzydziestu dwóch pacjentów, a biopsje są przechowywane w ciekłym azocie. Próbki krwi pobiera się tuż przed operacją do probówek Paxgene RNA i przechowuje zgodnie z instrukcjami producenta do czasu analizy.

2.2. Próbka krwi Całkowity RNA zostanie wyekstrahowany z krwi za pomocą zestawu do ekstrakcji Paxgene RNA i zanalizowany za pomocą RNAseq 2.3. Biopsje mięśni 2.3.1. Analiza transkryptomiczna Całkowity RNA zostanie wyekstrahowany z biopsji ludzkich mięśni przy użyciu komercyjnych zestawów. Badacze najpierw sprawdzą, czy znane markery mięśniowe są regulowane w górę w biopsjach pacjentów z rakiem (kontrola pozytywna) i zbadają ich poziomy w biopsjach mięśni pacjentów hemodializowanych. Wykonamy więc qRT-PCR podjednostki proteasomu UBE2B, UBE2D2, MaFbx, MuRF1, Ozz, ASB2, E4B, Nedd4, Mdm2 i 26S.

2.3.2. Analiza proteomiczna Analiza proteomiczna zostanie przeprowadzona za pomocą analizy spektrometrii śrutowej