Diagnóstico de precisão de patologia intestinal funcional e orgânica com base em perfis celulares e moleculares

EXPERIMENTAL: Perfil de diagnóstico de precisão

O estudo envolverá indivíduos com diagnósticos endoscopicamente, laboratoriais e clinicamente confirmados de patologia intestinal orgânica e funcional ou nenhum dos acima (voluntários saudáveis). Todos os diagnósticos são definidos de acordo com os critérios validados apresentados nas diretrizes clínicas para o diagnóstico e tratamento da patologia intestinal funcional (Síndrome do Cólon Irritável), 2020, Doença de Crohn (aprovada pelo Ministério da Saúde da Federação Russa, 2020), Ulcerativa Colite (aprovado pelo Ministério da Saúde da Federação Russa, 2020), de acordo com os critérios internacionais das Diretrizes ECCO-ESGAR, 2018, 2019. Após a triagem inicial e inclusão no estudo, as amostras de biópsia intestinal são coletadas de acordo com a técnica de exame endoscópico aplicada durante o exame endoscópico. Essas amostras de biópsia serão posteriormente utilizadas para diagnósticos moleculares e imunológicos.

Teste de diagnostico: diagnóstico celular e molecular de acordo com os resultados dos testes funcionais

Procedimento: Os estudos de manometria anorretal (ARM) são realizados na posição lateral esquerda com os quadris e os joelhos do sujeito flexionados. O sensor manométrico registra a pressão circunferencial. A base do balão retal anexado ao cateter ARM está localizada 3-5 cm acima da borda superior do canal anal, para evitar que o balão colida com o canal anal durante a insuflação. O sensor de registro mais distal é externo à borda anal. Se sentir qualquer dor ou desconforto, a sonda é imediatamente retirada.

Procedimento: Teste sensorial retal (RST) O teste também é realizado na posição lateral esquerda com quadris e joelhos flexionados. Os estudos são conduzidos com um balão integrado na sonda manométrica ou com um sistema separado. A capacidade do balão não é inferior a 400 ml e todos os componentes são livres de látex. A insuflação é sempre realizada com ar. Para distensão em rampa, a taxa deve estar entre 1 e 5 mL/s, e para distensão fásica, a taxa de insuflação deve ser fixada em 10 mL/s (C1).

Alterações do perfil metabólico em pacientes com doenças intestinais orgânicas e funcionais

Avaliação do metaboloma (análise por cromatografia gasosa com extracção em fase de vapor). Parâmetros metabólicos (ácido tetradecanóico, ácido hidracinâmico, ácido hexadecanóico, ácido hexanóico, indol, ácido pentanóico) serão medidos nas fezes por cromatografia gasosa com método de extração em fase de vapor. Os métodos de extração de metabólitos são realizados de acordo com o protocolo padrão de isolamento de metabólitos. Os metabólitos acima mencionados serão medidos em intensidade da corrente iônica do metabólito analisado, normalizada para a corrente iônica total de acordo com os métodos padronizados.

Alterações no perfil genético em pacientes com doenças intestinais funcionais e orgânicas

Avaliação do perfil genético (avaliação de polimorfismo de risco). Avaliação dos polimorfismos de risco: NOD2 (rs2066844, rs2066845, rs17221417), ATG16L1 (rs2241880), IL23R (rs2201841) será realizada na fração leucocitária de amostras de sangue de acordo com os métodos padronizados. O risco relativo resultante será avaliado de acordo com os dados sobre os riscos relativos para cada um dos polimorfismos acima mencionados.

Alterações no perfil imunológico (local) em pacientes com doenças intestinais funcionais e orgânicas

Avaliação do perfil local de citocinas pelo painel de triagem de citocinas humanas Bio-plex Pro (27 citocinas, concentrações medidas em pg/ml). O perfil local de citocinas será avaliado em liofilizado de biópsia intestinal. Todas as concentrações de citocinas serão medidas em pg/ml.

Alterações no perfil imunológico (sistêmico) em pacientes com doenças intestinais funcionais e orgânicas

Avaliação do perfil de citocinas sistêmicas pelo painel de triagem de citocinas humanas Bio-plex Pro (27 citocinas, concentrações medidas em pg/ml). O perfil de citocinas sistêmicas será avaliado por análise sérica. Todas as concentrações de citocinas serão medidas em pg/ml.

Alterações no parâmetro funcional - RST em pacientes com doenças intestinais funcionais e orgânicas

Avaliação instrumental do RST durante o exame funcional. Este é o procedimento que avalia a sensibilidade retal à distensão utilizando o balão preso à ponta do cateter. O procedimento é realizado de acordo com o protocolo de manometria IAPWG padronizado (2020). A medição será realizada em mls.

A medição quantitativa do volume do balão é registrada para cada um dos três limiares sensoriais relatados pelo paciente: volume da primeira sensação constante (FCSV), volume do desejo de defecar (DDV) e volume máximo tolerado (MTV).

Alterações no parâmetro funcional - MRA em pacientes com doenças intestinais funcionais e orgânicas

Avaliação instrumental da MRA durante o exame funcional. O procedimento é realizado de acordo com o protocolo de manometria IAPWG padronizado (2020). A medição será realizada em mmHg.