Antiagregační účinky standardizovaného rajčatového extraktu u hypertenzních subjektů

Návrh studie Studie se zúčastnilo 82 vysoce rizikových pacientů s hypertenzí (44 mužů a 38 žen), ve věku 28–74 let, provedená v období od července 2015 do února 2017 na katedře hypertenze na Univerzitě lékařských věd v Poznani. Sedmnáct pacientů během studie hlásilo rezignaci. Povolení č. 377/15 k provedení studie zveřejnila Etická komise na Poznaňské univerzitě lékařských věd. Všichni pacienti dali informovaný souhlas s účastí ve studii. Pacienti s primární hypertenzí a vysokým kardiovaskulárním rizikem byli náhodně rozděleni do jedné ze dvou skupin. Skupina 1 (ASA) zahrnovala 33 pacientů, kteří dostávali kyselinu acetylsalicylovou v dávce 75 mg ráno. Skupina 2 (STE) zahrnovala 32 pacientů užívajících standardizovaný rajčatový extrakt (STE) (ZAAX, Sequia, Polsko) v dávce 213 mg perorálně ráno.

Pacienti měli dvě návštěvy během 4 týdnů podle schématu:

Návštěva 1: Během první návštěvy byli pacienti kvalifikováni pro studii. Pacienti s dříve diagnostikovanou hypertenzí byli odesláni z ambulance na nemocniční oddělení. Po přijetí byli izolováni pacienti s vysokým kardiovaskulárním rizikem a byl získán písemný souhlas.

Na základě stadia hypertenze, přítomnosti rizikových faktorů a subklinického orgánového poškození, koexistence diabetu, kardiovaskulárních komplikací a chronického onemocnění ledvin bylo odhadnuto kardiovaskulární riziko. Každý pacient s jedním nebo dvěma rizikovými faktory a krevním tlakem (TK) > 180/110 mmHg nebo třemi a více rizikovými faktory a TK >160/100 mmHg nebo s přítomností orgánového poškození a TK >140/90 mmHg byl klasifikována jako vysoce riziková skupina. Během studie nedošlo k žádným změnám v souběžné léčbě (snížení lipidů, antihypertenziva a antidiabetika).

Byly shromážděny četné laboratorní testy a zobrazovací metody, jako jsou hladiny aldosteronu a ARO, před a po naklonění, kreatinin, urea, GFR, sodík, draslík, pro BNP, TSH, FT3, FT4 a 24hodinový odběr elektrolytů. K vyloučení sekundárních příčin hypertenze byla provedena ultrazvuková vyšetření břicha, počítačová tomografie břicha a dopplerovský ultrazvuk renálních tepen. Třikrát byla provedena klinická měření TK, dále ambulantní monitorování krevního tlaku (ABPM) a echokardiografie. Byly odebrány vzorky plné krve a pomocí analyzátoru VerifyNow od Accumetrics byla stanovena základní linie agregace krevních destiček. Ve skupině 1 byly testovány dva vzorky plné krve pro test VerifyNow Aspirin. Ve skupině 2 byly testovány čtyři vzorky plné krve pro testy VerifyNow Aspirin a P2Y12.

Návštěva 2: Po 4 týdnech užívání STE nebo ASA pacienti navštívili nemocnici na druhou návštěvu. Všechna vyšetření z návštěvy 1, včetně testů inhibice agregace krevních destiček, byla opakována. Vzorky plné krve byly odebírány 1-4 hodiny po požití ranní dávky ASA nebo STE z periferní žíly pomocí jehly 21 gauge nebo větší do částečně naplněné 3,2% citrátové vakuové odběrové zkumavky.

Charakteristika standardizovaného rajčatového extraktu STE je ve vodě rozpustný rajčatový koncentrát bez lykopenu a tuků, který obsahuje 37 biologicky aktivních sloučenin známé struktury. Tyto bioaktivní sloučeniny obsahují nukleosidy (adenosin, cytidin, guanosin, inosin, AMP, GMP), polyfenoly včetně flavonoidů (rutin, kvercetin, kemferol, luteolin, naryngenin) a fenolové kyseliny (chlorogenová, káva, p-kumar, ferulová).

V roce 2009 Evropský úřad pro bezpečnost potravin (EFSA) schválil ve vodě rozpustný rajčatový koncentrát (WSTC) jako doplněk stravy, který pomáhá udržovat normální agregaci krevních destiček. EFSA doporučil použití STE u zdravých jedinců ve věku 35 až 70 let. Účinná denní dávka byla 3 g bioaktivních látek obsažených v sirupu nebo 65-150 mg v práškové formě.

Tento extrakt ovlivňuje inhibici agregace zprostředkované ADP, tromboxanu, kolagenu, von Willebrandova faktoru, trombinu a zánětlivých mediátorů. Navíc blokuje receptor P2Y12 pro ADP a omezuje intracelulární granulární uvolňování tromboxanu, ADP, selektinu P a faktoru 4 (PF4, destičkový faktor 4). Navíc zabraňuje aktivaci integrinu αIIbβIII a inhibuje aktivaci receptoru (GP) IIb/IIIa. Inhibicí receptoru P2Y12 pro ADP zvyšuje aktivitu cAMP, což vede ke snížení koncentrace intracelulárních iontů vápníku. Inhibice procesu vázání kolagenu pomocí GP VI a von Willebrandova faktoru s receptorem GP Ib a snížení aktivity Cp a Cy2 fosfolipázy jsou také zahrnuty do antiagregačních účinků STE. Tyto jevy ovlivňují tvar trombocytů a jsou reverzibilní při zachování úrovně aktivity destiček, která umožňuje agregaci v případě cévního poranění. ZAAX mohou užívat lidé s přecitlivělostí na salicyláty a jiná nesteroidní antirevmatika, s bronchiálním astmatem, s aktivní peptickou ulcerací.

Studie prokázaly, že STE inhibuje aktivaci endoteliálních zánětlivých procesů, což zabraňuje rozvoji aterosklerózy. STE snižuje produkci zánětlivých cytokinů (TNF-α, IL-1β a IL-12) a zvyšuje syntézu interleukinu 10, který má protizánětlivé vlastnosti.

Testovací postup VerifyNow® Protokol studie zahrnoval měření reaktivity krevních destiček pomocí testovacího postupu VerifyNow (Accumetrics Inc., USA). Tato metoda detekuje aktivitu krevních destiček měřením agregace krevních destiček ve vzorku krve vystaveném specifickému agonistovi. To vede k inhibici funkce krevních destiček v reakci na protidestičkovou terapii. Systém VerifyNow je zařízení na plnou krev, které provádí kvalitativní měření indukované agregace krevních destiček na základě zvýšení propustnosti světla. Ve studii byly použity dva typy testovacích sad VerifyNow: VerifyNow Aspirin Test a VerifyNow P2Y12. Výsledky testu na aspirin jsou uváděny jako jednotky reakce na aspirin (ARU), které jsou vypočteny jako funkce rychlosti agregace. Hodnoty ARU nižší než 550 indikují efektivní výsledek ASA, zatímco hodnoty > 550 ARU indikují žádný účinek léku. Test VerifyNow P2Y12 měří funkci krevních destiček na základě schopnosti aktivovaných krevních destiček vázat fibrinogen a poskytuje informace o zhoršení agregace krevních destiček v reaktivních jednotkách receptoru P2Y12 (PRU). Má se za to, že za optimální protidestičkovou aktivitu odpovídá rozmezí 95 - 208 PRU. Vysoké hodnoty PRU po podání léku ukazují na chybějící očekávaný protidestičkový účinek.

Měření krevního tlaku U všech pacientů bylo během každé návštěvy třikrát provedeno měření krevního tlaku v klidu, v poloze na zádech, za standardních podmínek a pomocí tlakoměru v horní části paže (Omron 705IT). Ambulantní 24hodinová měření krevního tlaku (ABPM) byla prováděna pomocí A&D, 24hodinového ambulantního monitoru periferního krevního tlaku. Frekvence měření byla každých 15 minut mezi 7:00 a 22:00 a každých 30 minut mezi 22:00 a 7:00.

Statistická analýza Statistické analýzy byly provedeny pomocí programu Statistica, verze 12.5. (StatSoft, USA). Protože testovaná data nesplňovala předpoklad Gaussova rozdělení (vyhodnoceno Shapiro-Wilkovou metodou), byly použity neparametrické metody. Wilcoxonův test se znaménkem byl použit pro hodnocení rozdílů mezi počátečními hodnotami a hodnotami získanými po léčbě, pro faktory; složení tělesné hmotnosti, krevní tlak a agregace krevních destiček. K vyhodnocení rozdílů a korelací mezi dvěma nezávislými skupinami byl použit Mann-Whitney U test a Spearmanův koeficient pořadové korelace (Rs). Údaje prezentované v grafech a tabulkách zahrnovaly mediánové a mezikvartilové rozsahy. A p