Měkká periimplantátová tkáň kolem různých opěrných materiálů

Zubní implantáty jsou ukotveny v čelistní kosti přímou vazbou mezi kostí a implantátem. Úspěch a přežití implantátu však nezávisí pouze na osseointegraci. Měkká tkáň, která obklopuje transmukózní část dentálního implantátu, odděluje periimplantátovou kost od dutiny ústní. Tento límec měkkých tkání se nazývá "periimplantátová sliznice". Připojení měkkých tkání k povrchu implantátu slouží jako biologické těsnění, které zabraňuje rozvoji zánětlivých periimplantátových onemocnění (tj. periimplantátová mukozitida a periimplantitida) Těsnění měkkých tkání kolem implantátů tedy zajišťuje zdravý stav a stabilní osseointegraci, a tedy i dlouhodobé přežití implantátu. Zatímco těsnění měkkých tkání kolem zubů se vyvíjí během prořezávání zubu, periimplantátová sliznice se tvoří po chirurgické ráně vytvořené pro zavedení implantátu. Fáze hojení rány může nastat po uzavření mukoperiostální chlopně kolem krčkové části implantátu umístěného v tzv. jednostupňovém zákroku nebo po druhém chirurgickém zákroku pro připojení pilíře k již nainstalovanému zubnímu implantátu (dvoustupňový zákrok ).

Zdá se, že adheze měkkých tkání je ovlivněna vlastnostmi (materiál pilíře a mikrotopografie) komponent implantátu, které jsou umístěny v kontaktu s měkkými tkáněmi. Bylo zjištěno, že abutmentový materiál ovlivňuje krvácení při sondování (BoP) také v periimplantátových měkkých tkáních.

Vzhledem k tomu, že k hojení ran dochází v přítomnosti biomateriálu (tj. cizího tělesa) v kritické oblasti, je třeba vzít v úvahu pozitivní nebo negativní interference hojení ran s tímto biomateriálem a přizpůsobení měkké tkáně tomuto biomateriálu. Mezi kritéria výběru materiálu abutmentu patří biokompatibilita, adheze měkkých tkání, retence plaku, mechanické chování a estetika. Titan zůstává nejspolehlivějším materiálem vzhledem ke své mechanické odolnosti, biokompatibilitě, úpravě povrchu zvyšující adhezi buněk a retenci plaku. V případě zvýšených estetických požadavků, zejména u tenkých biotypů, však abutmenty se zirkonem a keramickým hliníkem poskytují lepší výsledky se srovnatelnými technickými a biologickými výsledky jako titanové abutmenty.

Polyetheretherketon (PEEK) je pevný termoplastický materiál vyrobený z polyetheretherketonové pryskyřice. Vzhledem ke své vysoké mechanické pevnosti a odolnosti, dobrým elektrickým vlastnostem a vynikající odolnosti vůči hydrolýze se PEEK široce používá v leteckém, automobilovém, chemickém, elektronickém, ropném a potravinářském a nápojovém průmyslu. Nedávno byl vyvinut PEEK v lékařské kvalitě. PEEK lékařské kvality má stejné fyzikální vlastnosti jako PEEK; PEEK-OPTIMA™ je však také biokompatibilní, má vysokou chemickou odolnost a odolává několika různým metodám sterilizace. Je pozoruhodné zmínit, že PEEK má modul pružnosti podobný modulu kosti, který zabraňuje okrajovému úbytku kostní hmoty v případě okluzního přetížení. Vzhledem k výše uvedeným vlastnostem byl jako opěrný materiál použit PEEK.

Morfologie opěry si také zaslouží pozornost. Určitou fyziologickou recesi měkkých tkání lze pozorovat v čase kolem náhrad implantátů, když je vedle měkké tkáně zvolen divergentní profil emergence (nejběžnější). Nedávno bylo ukázáno, jak je možné pozorovat určitou migraci gingiválního koronátu pomocí zúžených abutmentů emergence profilu. Ve skutečnosti použitím těchto zkosených abutmentů nebo designu implantátu se zkoseným tvarem na úrovni krčkového implantátu (transmukózní úroveň) bylo možné v průběhu času dosáhnout nejen migrace měkkých tkání, ale také migrace tvrdých tkání.

Hojení periimplantátové sliznice je charakterizováno rychlou tvorbou vaskulárních struktur a náborem zánětlivých buněk s následným dozráváním tkáně, která nakonec vytvoří pevnou bariéru supracrestální pojivové tkáně a dlouhého junkčního epitelu, který účinně brání sestupu bakteriálního biofilmu . Angiogeneze jako kritická součást hojení ran dosahuje vrcholu po 2 týdnech s poklesem během 10 týdnů, zatímco nábor zánětlivých buněk (B buňky a T buňky) se vyskytuje ve shlucích a klesá od 4 do 8 týdnů hojení v pojivové tkáni. .

O velmi časné odpovědi, která by mohla určit histologickou organizaci periimplantátových měkkých tkání obecně a v kontaktu s různými makroskopickými a mikroskopicky modifikovanými materiály, je však k dispozici jen málo. Periimplantátové měkké tkáně jsou součástí gingivy a ústní sliznice a k umístění implantátu dochází vytvořením rány. Myofibroblasty představují klíčové hráče ve fyziologické rekonstrukci pojivové tkáně po poranění a při generování patologických deformací tkáně, které charakterizují fibrózu. Představují kritický buněčný zdroj kolagenu typu I, který je nezbytný při hojení ran. Nadměrná kontrakce a nadprodukce extracelulární matrix, zejména kolagenu, myofibroblasty může způsobit tkáňovou fibrózu s tvorbou hypertrofické jizvy charakterizované sníženou pevností v tahu a dezorientovanými kolagenovými vlákny. U kožních ran plné tloušťky začíná diferenciace myofibroblastů přibližně týden po poranění a kontrakce vrcholí 5-15 dní po poranění, ale v dutině ústní k tomuto kroku dochází dříve než v kůži, vzhledem ke kratší době hojení těchto tkání.

Cílem této studie proto bylo zhodnotit myofibroblastovou složku periimplantátových slizničních tkání na různých hojících se pilířových materiálech (titan gr4, titan gr 5, zirkonium a PEEK) 24 hodin po umístění.

MATERIÁLY A METODY Etický aspekt Tento protokol bude po schválení katedrou vyhodnocen Etickou komisí Univerzity Sapienza v Římě. Každý pacient obdrží písemný informovaný souhlas.

Návrh studie Biomolekulární studie biopsií odebraných z periimplantátové měkké tkáně 24 hodin po implantaci a umístění hojícího pilíře ze čtyř různých materiálů (titan gr4, titan gr 5, zirkonium a PEEK).

Operátoři, slepota a přidělování Implantáty a abutmenty umístí jeden operátor, který se během studie nepodílí na jiných funkcích. Biopsii provede druhý operátor, který se nepodílí na umístění implantátu nebo abutmentu. Operátor laboratoře bude slepý k přidělování biopsií. Typ abutmentu spojeného s každým implantátem bude určen v uzavřené obálce, která se otevře pouze při umístění implantátu. Pacienti budou informováni o typu použitých implantátů a pilířů, nikoli však o přesném umístění každého z nich.

Charakteristika vzorku Studie se po splnění kritérií pro zařazení a vyloučení zúčastní celkem 10 pacientů přijatých k implantaci na zubní klinice Univerzity Sapienza v Římě.

Kritéria pro zařazení:

(I) Věk ≥ 18 let (II) Absence systémových onemocnění / Poruchy (III) Kouření ≤ 5 cigaret denně (IV) Parodontálně zdravé nebo léčené (V) Skóre plaku v plných ústech (FMPS) ≤ 15 % na začátku (VI ) Skóre krvácení z plných úst (FMBS) ≤ 15 % na začátku (VII) Přítomnost bezzubého prostoru vyžadujícího ošetření všichni na čtyřech nebo všichni na šest s protézou (VIII) Šířka keratinizované gingivy ≥ 2 na úrovni hřebene

Kritéria vyloučení: (vyloučení rizikových / matoucích faktorů):

(I) Těhotenství / kojení (II) Užívání systémových antibiotik v posledních 3 měsících (III) Použití systémových antibiotik jako profylaxe endokarditidy (IV) Chronicky léčený pacient (tj. 2 týdny nebo déle) léky, o kterých je známo, že ovlivňují tkáně parodontu (např. fenytoin, antagonisté vápníku, cyklosporin, warfarin a nesteroidní protizánětlivé léky) poslední měsíc před zahájením studie (V) Radioterapie v oblasti krku (VI) HIV, TBC, hepatitida nebo jiná infekční onemocnění (VII) Zneužívání s drogami nebo alkoholem (VIII) Kouřené cigarety> 5 cigaret denně (IX) Neléčená parodontitida (X) FMPS> 15 % na začátku (XI) FMBS> 15 % na začátku (XII) Implantáty s periimplantační anamnézou (XIII) Šířka keratinizované tkáně přes hřeben <2 mm (XIV) Potřeba kostní rekonstrukce kolem implantátů, které mají být vloženy

Klinická léčba

Protokol bude následovat Tomasi et al 2014 s úpravou základního vzorku odebraného při incizi pro přípravu chlopně. Stručně řečeno, po lokální anestezii, elevaci chlopně a umístění implantátu (Švédsko a Martina SpA, Padova, Itálie) bude ke každému implantátu připojen speciálně navržený abutment ze čtyř různých materiálů (tigran gr4, tigran gr 5, zirkonium a PEEK). dvojitě zaslepená alokace a chlopně budou sešity. Pacienti budou oplachovat chlorhexidinem po dobu 1 týdne až do odstranění stehu. Po 24 hodinách od zavedení implantátu bude na zakázku vyrobené řezací zařízení použito k získání obvodové biopsie periimplantátové měkké tkáně. K abutmentu bude připojen vodicí kolík a kruhový razník s řeznou hranou bude apikálně kolem abutmentu vytlačen, vypreparován 1,5 mm silný límec z periimplantátové měkké tkáně a spolu s abutmentem a řezacím zařízením odstraněn. Celý systém se umístí do 4% formalínu a po 48 hodinách se přenese do 70% roztoku ethanolu.

Cito- histologická analýza

Buněčné imunofluorescenční barvení a konfokální mikroskopie. Po sklizni děrovačem kolem krku implantátu se buňky získají metodou explantace. 2 mm vzorky se nejprve nasekají a poté umístí do kultivační baňky a inkubují v kompletním médiu v 5% CO2 při 37 °C. Alternativně se vzorky umístí do DMEM s vysokým obsahem glukózy doplněného 15 % FBS a antibiotiky a skladují se při 4 °C po dobu 24 hodin. Buňky jsou poté fixovány ve 4% PFA v PBS po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Pro označení sledovaných molekul jsou buňky permeabilizovány v PBS/10% kozí sérum/0,3% Triton X-100 (1 h, 20 °C), následovaný primárními protilátkami (proti proteinům a matricovým proteinům spojeným s cytoskeletem/cytoskeletem) v PBS/0,1 % BSA/0,3 % Triton X-100 (4 °C, 20 °C), promyty a inkubovány se sekundární protilátkou, DAPI a/nebo faloidinem (4 °C, 20 °C). Konfokální fluorescence (Leica SP8) a epifluorescenční mikroskopie (systém DeltaVision) se provádějí s použitím objektivů 20x/0,50 NA a 40x/0,80 NA (Olympus FV1000).

Mikroskopie biopsie tkáně. Vzorky tkáně získané po chirurgickém odstranění jsou fixovány ve formalínu a nařezány pomocí vibratomu (Leica, VT100s), aby se získaly plátky o tloušťce 200 μm. Pro optimalizovanou penetraci protilátek se pro každou primární a sekundární protilátku inkubace a promývací kroky provádějí sekvenční 24h inkubace (4°C) (PBS/2% kozí sérum/0,1% Triton X-100/0,05% NaN3). Snímky se získávají pomocí dvoufotonové mikroskopie s objektivem 20x/NA 0,95 (Olympus XLUMPlanFI 206) a excitací při 910/1090/1180 nm.

Statistická analýza

Při zavádění implantátu a 24 hodin poté bude odebráno celkem 80 vzorků, každý analyzován třikrát. Výsledky budou vyjádřeny jako průměr a SD hodnoty a ANOVA a Mann-Whitney test z příslušného softwaru (STATA verze 13.1; StataCorp LP; College Station, TX) použitého k nalezení rozdílu mezi čtyřmi abutmentovými materiály