Aronia v léčebném režimu diabetu 2

Hypotéza: Fermentovaný extrakt aronie (FAE) zlepšuje glykémii a lipidémii v T2D účinněji než jak nefermentovaný extrakt aronie (NFAE) tak placebo.

Výzkumné otázky:

Má FAE/NFAE při podávání subjektům T2D:

• Zlepšit glukózové reakce na orální glukózový toleranční test a HbA1C?
• Zlepšit LDL-, HDL- a celkový cholesterol nalačno?
• Snížit inzulínovou rezistenci a zvýšit celkovou antioxidační/protizánětlivou kapacitu?
• Zvýšit hladiny cirkulujícího GLP-1 a GIP s nižší aktivitou DPP4?
• Zmírnit hypertenzi a obezitu?

Metody Pro dvojitě zaslepenou, randomizovanou trojitou zkříženou studii je zapotřebí celkem 48 pacientů s T2D. Pacienti budou denně konzumovat FAE, NFAE nebo placebo rozdělené do dvou dávek, od kterých se očekává, že zajistí dostatečnou dávku bioaktivních fenolických sloučenin. Pacienti budou získáváni prostřednictvím „forsoegsperson.dk“, "sundhed.dk", a letáky umístěné ve fakultní nemocnici v Aarhusu (AUH). Budou zahrnuti pacienti T2D s glykemií nalačno ≤ 12 mM a HbA1c > 6,1 % a < 10 %, bez závažných komorbidit. Před zařazením do studie dostanou pacienti všechny nezbytné informace o studii (písemné i ústní), včetně potenciálních nežádoucích účinků (např. alergie na aronii) a budou muset poskytnout svůj informovaný souhlas (návštěva 1). Bude se posuzovat, zda i pacienti splňují kritéria.

Randomizovaná dvojitě zaslepená trojitě zkřížená studie sestává ze tří osmitýdenních intervenčních období (placebo, FAE a NFAE), kdy jsou účastníci náhodně rozděleni do pořadí léčby (šest různých možností pořadí). Intervenční období jsou oddělena minimálně třítýdenními vymývacími obdobími (podrobnosti viz obrázek 1). Před a po každém období intervence, tj. šestkrát, budou provedeny orální glukózové toleranční testy (OGTT). Výbory pro etiku zdravotnického výzkumu regionu středního Dánska studii schválily.

Analýzy OGTT: Před OGTT účastníci hladověli po dobu 8 hodin a poté během 5 minut zkonzumovali 75 g glukózy rozpuštěné ve 300 ml vody. Krev bude odebírána v časových bodech -10, 0, 30, 60, 90, 120 a 240 minut.

Krevní analýzy: Po odběru krve bude plazma skladována při -80° C až do další analýzy. Je zřejmé, že cílem výzkumníků je zjistit, zda je spotřeba FAE a NFAE schopna snížit hladinu cukru v krvi nalačno a po jídle, a proto budou měřeny hladiny glukózy, fruktosaminu a HbA1c. Koncentrace konečných produktů pokročilé glykosylace bude hodnocena ve vzorcích krve nalačno. Rovněž bude vyšetřena lipidémie, např. koncentrace celkového cholesterolu, triglyceridů, lipoproteinů s vysokou hustotou a lipoproteinů s nízkou hustotou. Zánětlivý stav bude hodnocen měřením hladiny prozánětlivých a protizánětlivých cytokinů a také koncentrace C-reaktivního proteinu ve vzorcích krve nalačno. Aby se určilo, zda aronie působí prostřednictvím regulace zprostředkované inkretinem, budou měřeny koncentrace GIP a GLP-1 a aktivita DDP4. Rovněž budou hodnoceny koncentrace glukagonu, inzulínu a adiponektinu.

Inzulinová rezistence: Dysfunkce β-buněk a inzulinová rezistence budou odhadnuty z koncentrací glukózy v krvi a inzulinu pomocí Homeostasis Model Assessment (3) a Matsuda Index (4), které jsou založeny na koncentracích měřených nalačno a během OGTT, v daném pořadí.

Denní krevní tlak: Bude prováděno 24hodinové ambulantní monitorování krevního tlaku. Potřebné vybavení je k dispozici v AUH. Účastníkům bude před a po každé intervenční periodě změřen 24hodinový krevní tlak.

Body mass index (BMI): Při první návštěvě je účastníkům změřena výška a váha a následně bude sledována váha.

Metabolomické a mikrobiomické testy: Výsledky předchozích testů (vliv na hlavní výsledky) určí rozsah následných metabolomických a mikrobiomických analýz. Vzorky stolice pro mikrobiomiku, stejně jako vzorky krve a moči pro metabolomiku, budou až do použití skladovány při -80 °C.

Analýza dat: Výpočet výkonu je založen na našem primárním parametru efektu přírůstková plocha glukózy pod křivkou (iAUC). Počet účastníků potřebný k získání statistické síly 80 % na úrovni P<0,05 (α=0,05; 1-β=0,8) byla vyčíslena na 48. Vyšetřovatelé chtěli detekovat minimální relevantní rozdíl pro oblast (průměr ± s.d.) 65±50 mmol/l x 120 min, což nám dává odhadovanou velikost účinku 1,30. Předpokládaný výpadek je 20 %. Pro každou proměnnou se bude provádět ANOVA, aby se určilo, zda se proměnné změní po podání FAE, NFAE nebo placeba, a také aby se vyhodnotila meziskupinová variabilita na začátku a na konci. Významnost bude nastavena na p < 0,05.