L'effet de la co-enzyme Q10 avec les médicaments de fertilité sur le résultat de la grossesse de la fécondation in vitro (CoQ10-IVF)

L'objectif de cette étude est d'évaluer l'efficacité de l'administration de CoQ10 en ce qui concerne son effet sur le taux d'aneuploïdie des ovocytes et le taux de naissances vivantes cumulé.

Conception de l'étude Il s'agit d'une étude prospective randomisée contrôlée par placebo. Les participants à l'étude subiront jusqu'à 3 cycles dans le cadre de ce protocole. Toutes les évaluations cliniques seront effectuées dans les cliniques d'infertilité participantes.

L'étude sera organisée sur une base ambulatoire au Toronto Centre for Advanced Reproductive Technology (TCART). L'étude impliquera 54 femmes âgées de 35 à 43 ans subissant un traitement de FIV. Toutes les femmes recueilleront 2 ml de salive dans un tube en polyéthylène de 5 ml pour la mesure de base de l'activité coQ10 par dosage arNOX (décrit ci-dessous).

Les participants à l'étude seront assignés au hasard à un placebo ou à des capsules de COQ10 (AOR - Advanced Orthomolecular Research Inc. 19 St NE Calgary, Alberta, codes d'enregistrement NHPD 135307). Les participants à l'étude prendront 600 mg de CoQ10 par voie orale une fois par jour avec le petit-déjeuner ou des capsules placebo identiques pendant 2 mois avant un cycle de FIV et jusqu'à 3 cycles en l'absence de grossesse. Au jour 3 du cycle, les sujets commenceront la stimulation ovarienne pour la fécondation in vitro tout en continuant la consommation des suppléments. La stimulation ovarienne contrôlée (COH) consistera en le protocole de microdose d'agoniste de la GnRH, qui est le protocole standard de la clinique pour les femmes âgées. Le COH sera effectué à l'aide de FSH recombinante (Puregon ; Schering-Plough Inc., Mississauga, ON, Canada) ou de gonadotrophines ménopausiques humaines (Menopur, Ferring Inc, Oakville, ON, Canada) 150 unités deux fois par jour S.C. et d'acétate de busereline (Superfact, Sanofi -Aventis Canada Inc, Laval, Québec) 0,05 mg par voie sous-cutanée B.I.D, et se poursuivra jusqu'à la veille de 10 000 unités de gonadotrophine chorionique humaine (hCG) (Pregnyl, Organon). La posologie ne sera pas modifiée et devra être maintenue pendant toute la durée de l'étude. Les deux médicaments continueront quotidiennement jusqu'à ce que le développement folliculaire soit considéré comme adéquat (au moins 3 follicules> 17 mm, et le niveau d'E2 est acceptable pour le nombre de follicules présents), moment auquel l'hCG sera injectée pour déclencher la maturation folliculaire finale. Le prélèvement d'ovocytes sera effectué 36 heures plus tard par aspiration à l'aiguille guidée par échographie vaginale et avec l'utilisation d'une anesthésie locale et d'une sédation légère. Au moment de la récupération, les sujets recueilleront 2 ml de salive, en plus, 2 ml de liquide folliculaire seront prélevés du premier follicule aspiré de chaque ovaire pour la détermination de l'activité coQ10 par dosage arNOX. COMME il n'est pas possible de mesurer les niveaux de CoQ10 dans une seule cellule (par ex. ovocytes), FF représente l'environnement cellulaire direct qui peut refléter le profil métabolique de cette cellule. Après prélèvement, les ovocytes seront fécondés par ICSI afin de ne pas contaminer l'ADN maternel lors de la biopsie du globule polaire avec l'ADN du sperme. Le lendemain, tous les ovocytes à 2 pronoyaux subiront une biopsie d'un ou des deux globules polaires.

Biopsie du corps polaire L'ovocyte est ensuite inséminé par la technique d'injection intracytoplasmique de spermatozoïdes (ICSI) et maintenu en culture dans un incubateur. Afin de biopsier le globule polaire, l'ovocyte est maintenu par la pipette de maintien avec le globule polaire à la position 11-12 heures. Une ouverture est pratiquée dans la zone pellucide et une aiguille de verre polie est introduite dans l'espace périvitellin et le globule polaire est soigneusement retiré.

Le transfert d'embryons est effectué le matin du troisième jour après le prélèvement des ovules.

Les corps polaires sont lavés dans des gouttelettes de solution saline tamponnée HEPES isotonique, puis transférés dans une solution hypotonique, fixés dans du méthanol: acide acétique sur une lame de verre et déshydratés dans du méthanol pour une analyse génétique plus poussée. L'ensemble de la procédure n'affecte pas négativement les taux de fécondation ou de clivage dans les ovocytes biopsiés, car le corps polaire n'est pas impliqué dans les processus ci-dessus.

Les globules polaires seront transférés au centre de microréseau UHN pour la détermination du nombre de chromosomes. L'analyse sera effectuée avec un kit commercial d'Advalytix (Olympus Life Science Research, Munich, Allemagne). Il s'agit d'un kit basé sur la PCR multiplex qui fournit un comptage rapide et précis des 23 chromosomes et est adapté au comptage des chromosomes du corps polaire. Après 2 jours, un seul embryon avec un caryotype normal sera transféré dans la cavité utérine sous guidage échographique à l'aide d'un cathéter de transfert Cook (Cook, Sidney, Australie). Le reste des embryons viables avec un caryotype normal sera congelé (congélation lente). Le soutien lutéal consistera en des suppositoires de progestérone 100 mg (Kingsway Pharmacy, Toronto, Ontario Canada) par voie vaginale 3 fois par jour à partir du jour du transfert et se poursuivra pendant 2 semaines jusqu'à la fin de chaque cycle lorsque la bêta hCG sérique sera prélevée et si enceinte , CoQ10/placebo sera arrêté. Si vous êtes enceinte, le soutien lutéal se poursuivra jusqu'à 10 semaines de gestation. Si la patiente n'est pas enceinte, elle subira un cycle de stimulation endométriale avec de l'estradiol micronisé, suivi de progestérone une fois qu'une épaisseur endométriale suffisante aura été mesurée. Quatre jours plus tard, 1 à 2 embryons seront décongelés et transférés. Le soutien lutéal comprendra de l'œstradiol et de la progestérone qui seront maintenus jusqu'à 10 semaines si vous êtes enceinte. Ces cycles de transfert d'embryons congelés se poursuivront tant qu'il y aura des embryons congelés issus du même prélèvement.

Les critères d'évaluation seront :

1. Le critère de jugement principal sera le nombre et le pourcentage d'œufs euploïdes par prélèvement

2. Les mesures de résultats secondaires comprendront :

   • Réponse ovarienne
   • Qualité de l'embryon
   • Taux de grossesse cumulé / récupération
   • Taux de naissances vivantes cumulé / récupération
   • Activité CoQ10 dans la salive et le liquide folliculaire par dosage arNOX

Dosage de la coenzyme Q10 arNOX est une protéine NADH oxydase externe liée au vieillissement (ECTO-NOX) inhibée par la coenzyme Q10 de la surface cellulaire qui est également présente dans le sérum et la salive. Il est capable de générer du superoxyde mesuré en tant que réduction inhibée par la superoxyde dismutase du ferricytochrome c (cytochrome C oxydé). L'activité arNOX de la salive des personnes âgées est inhibée par la coenzyme Q10. L'activité apparaît pour la première fois après l'âge de 30 ans pour atteindre un quasi-maximum vers l'âge de 55 ans.

L'activité arNOX est dosée à partir des mesures de la production de superoxyde selon la méthode standard où la réduction du ferricytochrome c par le superoxyde est contrôlée à partir de l'augmentation de l'absorbance à 550 nm avec une référence à 540 nm. Comme vérification supplémentaire de la spécificité de l'activité arNOX, la superoxyde dismutase (SOD) est ajoutée vers la fin de l'essai pour s'assurer que le taux est revenu à la ligne de base. Le dosage consiste en 150 μl (2 mg/ml) de solution de ferricytochrome c oxydé et 200 μl de salive ajoutée à 2,5 ml de tampon de dosage (8,06 g NaC1, 0,2 g KC1, 0,18 g Na 2HPO4, 0,26 g KH2PO4, 0,13 g CaCl2, 0,1 g de MgCl2, 1,35 g de glucose dissous dans 1000 ml d'eau déionisée, ajustée à pH 7,4, filtrée et conservée à 4◦C). Les taux sont déterminés à l'aide d'un spectrophotomètre en mode double longueur d'onde avec des mesures continues (plus de 1 min toutes les 1,5 min). Après 45 min, 60 µl (contenant 60 unités) de SOD sont ajoutés et le dosage est poursuivi pendant 45 min supplémentaires.

L'arNOX salivaire s'est avéré être une méthode pratique et non invasive pour surveiller les niveaux d'arNOX dans les essais cliniques d'intervention sur la coenzyme Q10, les niveaux de réponse correspondant à ceux observés avec l'arNOX sérique et cellulaire (Morre et Morre 2008).

Population étudiée

Au total, 54 patientes désirant une grossesse seront inscrites à cette étude au TCART-Toronto Centre for Advanced Reproductive Technology. Chaque sujet doit répondre aux critères d'inclusion et d'exclusion de l'étude

Calcul de puissance :

Au total, 54 patients entreront dans cette étude de conception parallèle à deux traitements. La probabilité est de 90 % que l'étude détecte une différence de traitement bilatérale avec une valeur de p ≤ 0,01, si la véritable différence entre les traitements dans le taux d'aneuploïdie est de 25 %. Ceci est basé sur l'hypothèse que l'écart type de la variable de réponse est de 0,180.

Affectation au traitement et randomisation :

Les patients seront assignés par ordre chronologique le jour de l'inscription à l'étude à une randomisation générée par ordinateur. Chaque participant inscrit recevra un package pré-assigné contenant soit un placebo, soit du CoQ10 pour la durée de l'étude. Le médecin sera aveuglé quant à l'affectation des patients. La randomisation sera effectuée avant le début du premier cycle.

Les enquêteurs conserveront un dossier séparé reliant les noms des sujets à leurs numéros de code, afin de permettre une vérification facile des données dans les dossiers des sujets en cas de besoin.

L'analyse statistique sera effectuée avec le test t étudiant pour camper entre le groupe de traitement et le groupe placebo pour toutes les mesures de résultats. L'analyse de puissance a été calculée pour alpha < 0,01.

Résultats attendus et pièges potentiels. Le nombre de patients nécessaires pour l'étude est raisonnable et nous ne nous attendons pas à ce qu'il soit un obstacle. Si les résultats de cette étude correspondent à l'étude animale, nous devrions être en mesure de montrer une différence significative dans le nombre d'embryons euploïdes entre les groupes test et témoin, ainsi qu'avec les autres paramètres de résultat. Nous travaillons depuis plusieurs mois avec le laboratoire UHN microarray pour optimiser l'utilisation du kit Advalytics multiplex PCR qui fonctionne actuellement très bien. Nous ne prévoyons aucun problème avec ce composant de l'objet.