Effekten av co-enzym Q10 sammen med fertilitetsmedisiner på graviditetsresultatet av in vitro fertilisering (CoQ10-IVF)

Målet med denne studien er å evaluere effektiviteten av CoQ10-administrasjon med hensyn til dens effekt på graden av aneuploidi av oocytter og kumulativ levende fødselsrate.

Studiedesign Dette er en prospektiv randomisert placebokontrollert studie. Studiedeltakere vil gjennomgå opptil 3 sykluser som en del av denne protokollen. Alle kliniske vurderinger vil bli utført ved de deltakende infertilitetsklinikkene.

Studien vil bli organisert på poliklinisk basis ved Toronto Center for Advanced Reproductive Technology (TCART). Studien vil involvere 54 kvinner i alderen 35-43 år som skal gjennomgå IVF-behandling. Alle kvinner vil samle 2 mL spytt i et 5 mL polyetylenrør for baselinemåling av coQ10-aktivitet ved arNOX-analyse (beskrevet nedenfor).

Studiedeltakere vil bli tilfeldig tildelt enten placebo- eller COQ10-kapsler, (AOR - Advanced Orthomolecular Research Inc. 19 St NE Calgary, Alberta, NHPD-registreringskoder 135307). Studiedeltakere vil ta 600 mg CoQ10 oralt en gang daglig med frokost eller identiske placebokapsler i 2 måneder før en IVF-syklus og opptil 3 sykluser hvis graviditet ikke oppstår. På syklusdag 3 vil forsøkspersonene starte eggstokkstimuleringen for in vitro fertilisering mens de fortsetter inntaket av kosttilskuddene. Den kontrollerte ovariestimuleringen (COH) vil bestå av mikrodose GnRH agonist flare protocol, som er klinikkens standard protokoll for eldre kvinner. COH vil bli utført ved bruk av rekombinant FSH (Puregon; Schering-Plough Inc., Mississauga, ON, Canada) eller humane menopausale gonadotropiner (Menopur, Ferring Inc, Oakville, ON, Canada) 150 enheter to ganger daglig S.C. og Buserelin Acetate (Superfact, Sanofi -Aventis Canada Inc, Laval, Quebec) 0,05 mg subkutant B.I.D, og ​​vil fortsette til dagen før 10 000 enheter humant koriongonadotropin (hCG) (Pregnyl, Organon). Doseringen vil ikke endres og må opprettholdes så lenge studien varer. Begge legemidlene vil fortsette daglig til follikkelutviklingen anses som tilstrekkelig (minst 3 follikler >17 mm, og E2-nivået er akseptabelt for antall follikler som er tilstede) på hvilket tidspunkt hCG vil bli injisert for å utløse endelig follikkelmodning. Oocyttuthenting vil skje 36 timer senere ved vaginal ultralydveiledet nålespirasjon og med bruk av lokalbedøvelse og mild sedasjon. Ved uthentingstidspunktet vil forsøkspersonene samle 2 mL spytt, i tillegg vil 2 mL follikkelvæske samles opp fra den første follikkelen aspirert fra hver eggstokk for bestemmelse av coQ10-aktivitet ved arNOX-analyse. Siden det ikke er mulig å måle CoQ10-nivåer i en enkelt celle (f.eks. oocytter), representerer FF direkte cellulært miljø som kan reflektere den metabolske profilen til denne cellen. Etter uthenting vil oocyttene befruktes med ICSI for ikke å forurense mors DNA under en polar kroppsbiopsiprøve med sæd-DNA. Den påfølgende dagen vil alle oocyttene med 2 pronuclei gjennomgå en biopsi av en eller begge polare legemer.

Polar kroppsbiopsi Oocytten insemineres deretter ved bruk av intracytoplasmatisk spermieinjeksjonsteknikk (ICSI) og holdes i kultur i en inkubator. For å biopsi den polare kroppen, holdes oocytten av holdepipetten med den polare kroppen i stillingen 11-12. En åpning lages i zona pellucida og en polert glassnål føres inn i perivitellinerommet og polarkroppen fjernes forsiktig.

Embryooverføringen utføres om morgenen den tredje dagen etter egguttak.

Polare legemer vaskes i dråper av isotonisk HEPES-bufret saltvann og overføres deretter til hypotonisk løsning, fikseres i metanol: eddiksyre på et glassglass og dehydreres i metanol for videre genetisk analyse. Hele prosedyren har ingen negativ innvirkning på verken befruktnings- eller spaltningshastigheter i biopsierte oocytter, da den polare kroppen ikke er involvert i de ovennevnte prosessene.Karyotyping:

De polare kroppene vil bli overført til UHN-mikroarraysenteret for kromosomnummerbestemmelse. Analysen vil bli gjort med et kommersielt sett fra Advalytix ( Olympus Life Science Research, München, Tyskland). Dette er et multipleks PCR-basert sett som gir en rask og nøyaktig telling av alle 23 kromosomer og er skreddersydd for polart kroppskromosomantall. Etter 2 dager vil et enkelt embryo med en normal karyotype overføres til livmorhulen under ultralydveiledning ved hjelp av et Cook-overføringskateter (Cook, Sidney, Australia). Resten av de levedyktige embryoene med en normal karyotype vil fryses (Slow freezing). Luteal støtte vil bestå av progesteron stikkpiller 100mg (Kingsway Pharmacy, Toronto, Ontario Canada) vaginalt 3 ganger daglig fra overføringsdagen og vil fortsette i 2 uker til slutten av hver syklus når serum beta hCG vil bli tatt ut og hvis gravid , CoQ10/ placebo vil bli avviklet. Hvis du er gravid, vil luteal støtte fortsette til 10 ukers svangerskap. Hvis pasienten ikke er gravid, vil hun ha en syklus med endometriestimulering med mikronisert østradiol, etterfulgt av progesteron når en tilstrekkelig endometrietykkelse er målt. Fire dager etterpå skal 1-2 embryoer tines og overføres. Luteal støtte vil inkludere østradiol og progesteron som vil opprettholdes i opptil 10 uker hvis du er gravid. Disse syklusene med frosset embryooverføring vil fortsette så lenge det er frosne embryoer fra samme uthenting.

Studiens endepunkt vil være:

1. Primært utfallsmål vil være antall og prosentandel euploide egg per uttak

2. Sekundære resultatmål vil omfatte:

   • Ovarierespons
   • Embryo kvalitet
   • Akkumulert graviditetsrate / uthenting
   • Kumulativ fødselsrate/innhenting
   • CoQ10-aktivitet i spytt og follikulærvæske ved arNOX-analyse

Koenzym Q10-analyse arNOX er et koenzym Q10-hemmet, aldringsrelatert eksternt NADH-oksidase (ECTO-NOX)-protein på celleoverflaten som også finnes i sera og spytt. Den er i stand til superoksidgenerering målt som superoksiddismutase-hemmet reduksjon av ferricytokrom c (oksidert cytokrom C). arNOX-aktiviteten til spytt hos eldre individer hemmes av koenzym Q10. Aktiviteten dukker først opp etter fylte 30 til et nesten maksimum rundt 55 år.

arNOX-aktivitet er analysert fra målinger av superoksidproduksjon basert på standardmetoden der reduksjon av ferricytokrom c med superoksid overvåkes fra økningen i absorbans ved 550 nm med referanse ved 540 nm. Som en ytterligere sjekk for spesifisiteten til arNOX-aktiviteten, tilsettes superoksiddismutase (SOD) nær slutten av analysen for å sikre at hastigheten returnerte til basislinjen. Analysen består av 150 μl (2 mg/ml) oksidert ferricytokrom c-oppløsning og 200 μl spytt tilsatt 2,5 ml analysebuffer (8,06 g NaC1, 0,2 g KC1, 0,18 g Na 2HPO4, 0,26 g KH2,1PO30, CaCl0,1PO30, CaCl0, 1PO30. g MgCl2, 1,35 g glukose oppløst i 1000 ml avionisert vann, justert til pH 7,4, filtrert og lagret ved 4◦C). Ratene bestemmes ved bruk av et spektrofotometer i dobbel bølgelengdemodus med kontinuerlige målinger (over 1 min hvert 1,5 min.). Etter 45 minutter tilsettes 60 μl (inneholder 60 enheter) SOD og analysen fortsettes i ytterligere 45 minutter.

Spytt arNOX ble funnet å være en praktisk og ikke-invasiv metode for å overvåke arNOX-nivåer i kliniske koenzym Q10 intervensjonsforsøk med responsnivåer som er parallelle med de som er sett med serum og cellulær arNOX (Morre og Morre 2008).

Studiepopulasjon

Totalt 54 kvinnelige pasienter som ønsker å bli gravide vil bli registrert i denne studien ved TCART-Toronto Center for Advanced Reproductive Technology. Hvert emne må oppfylle studiets inkluderings- og eksklusjonskriterier

Effektberegning:

Totalt 54 pasienter vil delta i denne studien med parallelldesign av to behandlinger. Sannsynligheten er 90 prosent for at studien vil oppdage en behandlingsforskjell ved en tosidig med p-verdi ≤ 0,01, hvis den sanne forskjellen mellom behandlingene i aneuploidirate er 25 %. Dette er basert på antakelsen om at standardavviket til svarvariabelen er 0,180.

Oppdrag til behandling og randomisering:

Pasienter vil bli tildelt en datamaskingenerert randomisering i kronologisk rekkefølge på dagen for studieregistrering. Hver påmeldte deltaker vil motta en forhåndstildelt pakke som inneholder enten placebo eller CoQ10 for varigheten av studien. Legen vil bli blindet når det gjelder tildeling av pasientene. Randomisering vil bli gjort før den første syklusen startes.

Etterforskerne vil føre en egen journal som knytter navnene på forsøkspersonene til deres kodenumre, for å muliggjøre enkel kontroll av data i emnefiler når det er nødvendig.

Statistisk analyse vil bli gjort med student t-test til camper mellom behandlings- og placebogruppen for alle utfallsmålene. Effektanalyse ble beregnet for alfa < 0,01.

Forventede utfall og potensielle fallgruver. Antall pasienter som trengs for studien er rimelig og vi forventer ikke at det vil være til hinder. Hvis resultatene i denne studien vil være til dyrestudien bør vi kunne vise en signifikant forskjell i antall euploide embryoer mellom test- og kontrollgruppene, så vel som med de andre utfallsparametrene. Vi har jobbet i flere måneder med UHN mikroarray-laboratoriet for å optimalisere bruken av Advalytics multipleks PCR-sett som for tiden fungerer veldig bra. Vi forventer ingen problemer med denne komponenten av objektet.