Perfusion d'ABMSC par l'artère hépatique dans la chirurgie de l'hypertension portale pour le traitement de la cirrhose du foie

Mobilisation et récolte ABMSC

• Pour récolter plus d'ABMSC, la mobilisation de l'ABMSC a été induite par le rhG-CSF (Gran○R), administré par voie sous-cutanée à une dose de 300 μg par jour pendant trois jours consécutifs avant la chirurgie ouverte de l'hypertension portale abdominale.
• La moelle osseuse (160-200 ml) des patients a été prélevée des deux iliaques postéro-supérieures selon les procédures standard sous anesthésie locale et a été collectée dans un sac en plastique contenant de l'héparine.

Chirurgie ouverte de l'hypertension portale abdominale

- Immédiatement après la récolte de l'ABMSC, la procédure modifiée de Sugiura a été réalisée pour les patients qui ont été affectés au groupe d'étude. La même intervention chirurgicale a également été réalisée pour le groupe contrôle (sans prélèvement d'ABMSC et infusion d'ABMSC).

Séparation et infusion ABMSC

• Lors de la chirurgie de l'hypertension portale, l'ABMSC a été séparé et purifié dans un laboratoire propre de classe 10 000. Après que les particules de graisse et d'os aient été éliminées par filtration, les cellules collectées ont été déplacées vers un dispositif de traitement cellulaire. Nous avons utilisé le kit de réactifs ([Patent Number] ZL 2006 1 0106875.5 ; [Nombre de critères applicables] YZB/NING YIN 0008-2008 ; [Chercheur et développeur] Wealthlin Science & Technology Inc., Canada ; [Producteur] Ningxia Zhonglianda Biotech Co., Ltd.). Les réactifs adoptent la méthode de collecte des cellules négatives. Prenez les cellules qui devaient être supprimées comme cellules cibles et effectuez la suppression étape par étape. Sur la base de cette méthode, les globules rouges, les plaquettes sanguines, le plasma sanguin seront complètement éliminés, une partie des globules blancs et des lymphocytes étant également remarquablement éliminés tandis que toutes les cellules souches / cellules progénitrices sont bien conservées.
• Le nombre de cellules nucléées (globules blancs) de l'ABMSC final a été mesuré par un instrument automatisé de numération globulaire complète et une analyse par cytométrie en flux. Le nombre de cellules mononucléaires a été compté manuellement au microscope par la méthode de coloration de Wright-Giemsa. Les cellules CD34 positives ont été déterminées par analyse par cytométrie en flux.
• Le temps de séparation et de purification de l'ABMSC était de 2,5 à 3 heures et devait être terminé avant la conclusion de la chirurgie de l'hypertension portale (3 à 3,5 heures). ABMSC a été ajouté à 10 ml de solution saline et bien mélangé en agitant doucement le flacon. Avant la fermeture de l'incision, l'artère gastrique droite ou l'artère gastro-épiploïque droite a été sélectionnée et un cathéter a été inséré. Le cathéter a été poussé pour atteindre l'artère hépatique appropriée. Le diamètre du cathéter est de 1,4 mm, il est suffisamment fin pour être facilement inséré dans l'artère gastrique droite ou l'artère gastro-épiploïque droite (cathétérisme veineux central, produit REF NO.ES-04218, Arrow International, Inc.). Le mélange de solution saline et d'AMBC a été perfusé dans l'artère hépatique à une vitesse uniforme pendant environ deux minutes. Le cathéter a été retiré après l'ABMSCi. Le point de ponction de l'artère gastrique droite a été réparé par suture des vaisseaux sanguins ou transfixé.