Sóérzékenység és immunitás sejtaktiválás

A kutatók a Weinberger protokollt alkalmazzák 20 betegnél, amint arról korábban beszámoltunk. Azt tanácsolják a résztvevőknek, hogy a protokoll kezdetéig tartsák be szokásos étrendjüket és sófogyasztásukat, és biztosítsák számukra a tartályt és a megfelelő utasításokat, hogy 24 órás vizeletmintát vegyenek a kórházba való felvétel előtti napon. A felvételre két héttel később kerül sor, a gyógyszerek hatásának kimosására, este pedig arra, hogy a beteg egy éjszakát a kórházban pihenjen, mielőtt elkezdené a protokollt. Ezalatt a két hét alatt a kezeletlen vérnyomást a betegek otthon vagy időközi tervezett vizitek alkalmával ellenőrzik annak biztosítása érdekében, hogy az ne haladja meg a 180/110 Hgmm-t, ebben az esetben a protokollt a biztonság kedvéért megszakítjuk. Felvételkor megmérik a kiindulási vizelet térfogatát, és az alikvot részeket elküldik a laboratóriumba, vagy -800 °C-on lefagyasztják kutatási analitok céljából. A felvételt követő reggelen (6:00) ambuláns vérnyomásmérőt (SpaceLabs 90207 vagy 90210) állítanak fel a folyamatos vérnyomásmérés érdekében a vizsgálat teljes időtartama alatt (15 percenként 6 és 22 óra között és 30 percenként 22:00-tól). reggel 6 óra), a beteg köpenyben lévő testtömegét rögzítik (a következő napokkal megegyező skálán), vérmintákat vesznek az alábbiakban ismertetett vizsgálat analitjaihoz (alaptesztek), és új 24 órás gyűjtést végeznek. 8 órakor indult a sórakodás időszakára. A sóterhelés magas sótartalmú étrend (izokalória, 160 mEq Na és 70 mEq K) kombinációjával érhető el, amelyet a beteg teljes egészében elfogyaszt, és 2 liter sóoldat (300 mEq Na+) infúzióval. A betegek szabadon hozzáférhetnek vízhez, de táplálékuk a protokoll által biztosított mennyiségre korlátozódik. Este 10-kor mennek lefeküdni. Másnap reggel (6 órakor) ismét testtömeg- és vérmintavétel történik, és a 24 órás gyűjtés reggel 8 órakor szándékos ürítéssel zárul. Ezek a laboratóriumi adatok tükrözik a sóterhelés hatását. Reggel 8 órakor az alanyokat sócsökkentésnek vetik alá. Ezt 10 mEq Na-t és 70 mEq K-t tartalmazó izokalóriás étrend beadásával és folyamatos korlátlan vízbevitellel érik el. Reggel 8, 12 és 16 órakor az alanyok 40 mg furoszemidet kapnak szájon át. Egy további 12 órás vizeletgyűjtés reggel 8 órakor kezdődik és 20 órakor szándékos ürítéssel zárul (a furoszemid natriurézis időszakát tükrözve). Este 20 órakor kezdődik az új 12 órás gyűjtés, amelyet másnap reggel 8 órakor szándékos ürítéssel zárnak (a sószegény időszakot tükrözve). Másnap reggel (6 órakor) megtörténik az utolsó testtömeg-felvétel és vérvétel, reggel 8-ra pedig a 12 órás vizeletgyűjtés a sószegény időszakra. A betegek a szokásos kórházi étrendből kapnak reggelit, amelyet sós ételekkel vagy folyadékkal egészíthetnek ki, ha a sószegény beavatkozás szédülést vagy dokumentált ortosztázist okozott. Ha a beteg stabil, és toleranciát mutat az egyenes testtartással szemben, hazaengedik, és utasítást adnak a vérnyomáscsökkentő gyógyszerek szedésének folytatására, kivéve, ha az ortosztázis jelenléte a kezelési rend módosítását teszi szükségessé, amelyre a kutatásban részt vevő orvos tanácsot ad. csapat.

Laboratóriumi vérmérések: A napi 3 vérminta-sorozatban elvégzendő vizsgálatok magukban foglalják; CBC-k és rutin kémiák (beleértve a szérum kreatinint, Na+-t és K+-t) a VUMC központi laboratóriumában; Plazma renin aktivitás radioimmunoassay-vel; Plazma aldoszteron radioimmunoassay-vel; Plazma eikozatriénsavak (EET) és 20-hidroxieikozatetraénsav (20-HETE) a VUMC eikozanoid magjában folyadékkromatográfiával/tandem tömegspektrometriával.

Vizeletvizsgálat: A 4 vizeletmintán elvégzendő tesztek (24 órás kiindulási állapot, 24 órás sóterhelés, 12 órás furoszemid natriurézis és 12 órás sókivonás) tartalmazzák; Na+, K+ és kreatinin koncentráció a VUMC központi laboratóriumában; Vizelet eikozatriénsavak (EET) és 20-hidroxieikozatetraénsav (20-HETE) a VUMC eikozanoid magjában folyadékkromatográfiával/tandem tömegspektrometriával.

A vérnyomás sóérzékenységének definíciója: A monitorok vérnyomásadatai letöltésre kerülnek, és a 12 órától (a sóinfúzió vége) 22 óráig a sóterhelés napjának szisztolés vérnyomásának átlagát használjuk. BP a vizsgálat sóterhelési időszakára. A sószegény vizsgálati időszak vérnyomásértékeként a 12 órától (második furoszemid adag) 22 óráig tartó szisztolés vérnyomás átlagát használjuk. A szisztolés vérnyomás ≥ 10 Hgmm-es csökkenése a sóterheléstől a sókiürítési periódusig az alany sóérzékenyként való besorolására szolgál.

Nátrium MRI képalkotás: A kutatók nem invazív módon kimutatják a Na+ raktározását az emberi szövetekben a Vanderbilt Képalkotó Intézetben. 23 Na MRI-vel számszerűsítik a bőr Na+-tartalmát, szigorúan betartva a korábban bejelentett megközelítéseket.6, 37, 38. A képalkotás Philips Achieva 3.0T MR szkenneren (Philips Healthcare, Cleveland OH, USA) történik, 23 Na kvadratúra térdtekerccsel (Rapid Biomedical GmbH, Rimpar, Németország). A vizsgálók kalibrációs fantomokat (növekvő NaCl-koncentrációjú vizes oldatokat) használnak referenciastandardként, és ezeket a vizsgálati alany vádli izmain áthaladó metszetekkel együtt szkennelik a minőségellenőrzés érdekében. A bal alsó lábszárat (a vádli régió legszélesebb részét) úgy pásztázzák, hogy a bőr szorosan érintkezzen a fantomtartó kemény felületével 3 perc 52 másodpercig. Minden képadatot off-line feldolgozunk egyéni MATLAB (R2013a) szkriptekkel. A Na+ mennyiségi meghatározását a szöveti és a kalibrációs fantomok közötti jelintenzitás összehasonlításával végezzük a Na+ képen. A fantomadatok alapján lineáris összefüggést (Na+-koncentráció vs. jelintenzitás) értékelünk, és a lineáris regresszió eredményeit alkalmazzuk a szöveti régiókra a Na+-tartalom mennyiségi meghatározására.

Immunsejtaktivációs vizsgálatok: A kutatók meg fogják határozni, hogy a sóérzékenység összefügg-e az emberi monociták aktiválási állapotával. Heparinizált vérmintákat (40 ml) veszünk, és a PBMC-ket Ficoll-gradienssel izoláljuk. A monocitákat a PBMC-ből mágneses jelöléssel és negatív szelekcióval izoláljuk a Miltenyi monocita-izolációs kit segítségével, és áramlási citometriával analizáljuk. A monocitákat CD45+/CD14+ sejtként azonosítják, és tovább tudják vizsgálni az intermediereket (CD14+/CD16+ és nem klasszikus monociták (CD14-/CD16+). A CD14+/CD16+ sejtek, amelyek a keringés körülbelül 10%-át teszik ki, különösen érdekesek, mivel megnövekedett mennyiségű TNFalpha-t termelnek és elősegítik a T-sejt aktiválódást. Ezek megnövekednek magas vérnyomásban szenvedő emberekben, és az in vitro megemelkedett Na+ expozíció hatására. Bár a DC-k altípusai viszonylag ritkák, a kutatók a CD45+/CD1c+, CD45+/CD141+, CD45+/CD209+, CD45+/CD83+ és a nemrégiben azonosított Axl/SICLEC6 sejtek mérésével fogják számszerűsíteni őket. A 7-AAD-t az elhalt sejtek kizárására használják. Az IsoLG-protein adduktumok kimutatására intracelluláris festést alkalmazunk a D-11 egyláncú antitesttel. Mérni fogják a CD80 és CD86 felszíni expresszióját, amelyek érett antigénprezentáló sejteken expresszálódnak, lehetővé téve számukra, hogy részt vegyenek a T-sejt-kostimulációban. A perifériás vér mononukleáris sejtjeinek általános jellemzése áramlási citometriával más gyulladásos sejtek esetében, beleértve a teljes leukociták (CD45+ sejtek), B-sejtek (CD45+/CD19+), teljes T-sejtek (CD45+/CD3+ sejtek) és a T-sejt altípus (CD3+/CD8+ és CD4+) sejteket is végrehajtanak. Ezeket a kísérleteket frissen izolált sejtekben, valamint 48 órán át normál sónak vagy magas sótartalmúnak kitett monocitákon hajtják végre annak meghatározására, hogy a sóérzékenység tükröződik-e a monocitákban, ahogy az a 2. ábrán látható. A 48 órán át tenyésztett monociták táptalajt citokin felszabadulásra elemezték, beleértve az IL-1 béta-t, a TNF-alfát, az IL-6-ot és az IL-23-at luminex alkalmazásával. A kutatók plazmát is szereznek a citokinek, köztük a GM-CSF, IL-4 és Flt3 ligandum meghatározásához, amelyek felelősek a monociták DC-kké való átalakulásáért. A reprodukálhatóság biztosítása érdekében a mintákat be kell küldeni a Vanderbilt Endokrinológiai és Metabolizmus Alapintézetbe vak Luminex elemzés elvégzésére. Az O2·-termelés és a NADPH-oxidáz aktiválásának mérése, beleértve a p47phox foszforilációját és a p47phox asszociációját a gp91phox-szal immunprecipitációval és Western blot-tal, mind a kiinduláskor, mind a válaszként megemelkedett Na+-ra a korábban leírtak szerint kerül sor.