メトホルミンは B 細胞前駆体 (Ph+ 陰性) 急性リンパ芽球性白血病患者の再発率を低下させる

MDR (Multidrug-Resistance) 遺伝子は、いくつかの種類の癌の耐性に関与しています。 白血病で最も重要なのは ABCB1 と ABCG2 です。ABCB1 は急性骨髄性白血病と小児急性リンパ芽球性白血病の耐性と重症度に関与しています。 これらのトランスポーターは、ATP を使用して使用します。 メトホルミンは、AMPK の活性化によって細胞内の ATP (アデノシン三リン酸) を減少させます。 最近、MCF7-Adr (Michigan Cancer Foundation 7、乳癌細胞株) 癌細胞株で、メトホルミンは核因子 -κ-B の阻害によって P-糖タンパク質の機能をブロックします。

小規模な臨床試験または観察研究に基づいており、現時点での臨床的証拠は限られています。 この研究では、mRNA (メッセンジャーリボ核酸) ABCB1 の発現レベルが高い患者に対する、標準的な化学療法レジメンへのメトホルミンの追加の効果を評価しようとしています。

実験プロトコル

患者は、診断時のABCB1のmRNAレベルに応じて、高発現、低発現、および遺伝子発現の欠如の3つのグループに層別化されます。 サンプルは単核末梢血細胞から得られます

全 RNA の抽出 総 RNA は、Chomczynski と Sacchi によって説明された製造元の推奨に従って、TRIzol® (Invtirogen Life Technologies) によって分離されました。

全ＲＮＡの濃度および純度は、ＵＶ－ｖｉｓ分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｇｅｎｅｓｉｓ １０Ｓ ＵＶ－ｖｉｓ）で測定した。 遺伝物質の完全性は、70 V で 40 分間の 1.5% アガロースゲル電気泳動によって確認されました。 RNAは必要になるまで-80℃で保存した。

cDNA の合成 c DNA (相補的デオキシリボ核酸) の合成では、使用した RNA の量は 20 µg の最終容量に対して 2 µg でした。 ＲＮＡを１μｌのオリゴヌクレオチド１２－１８（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）および１μｌのｄＮＴＰｓ（デオキシヌクレオシド三リン酸）１０ｍＭ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｒｏｃｈｅ）と混合した。 4 μl の Buffer 5 X (Tris-HCl (塩酸) 250 mM、KCl (塩化カリウム) 375 mM MgCl2 15 mM)、2 μl de DTT (ジチオスレイトール) (0.1 M)、および水を加えた後、すべての混合物をインキュベートしました。 ３７℃で２分間、１μｌのＭＭＬＶ（モロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素）逆転写酵素（２００ｕ）（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ、カリフォルニア州カールスバッド）を添加し、３７℃で５０分間インキュベートした。

リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応 (qRT-PCR) 分析 ABCB1 (Hs01069047) およびグリセルアルデヒド 3-リン酸デヒドロゲナーゼ (GAPDH; Hs00985689) 遺伝子の mRNA 発現レベルは、TaqMan® 遺伝子発現アッセイ (Applied Biosystems、Foster City) を使用して測定しました。 、カリフォルニア州、米国）。 GAPDH遺伝子を内因性コントロールとして使用し、各サンプルを3回分析しました。 相対発現レベルは、骨髄をキャリブレーターとして2-ΔΔCt法を使用して計算されました。 高発現および低発現のカットオフ点は、健康なドナーで観察された平均値によって決定されました。

治療プロトコール すべての患者は、-7 日目から -1 日目 (-7、-6 = 25mg、-5、-4 : 50mg、-3、 -2: 75mg および -1 日: 100mg)。 寛解導入療法は、プレドニゾン（60mg/m2）、ビンクリスチン（1.5mg/m2、最大2mg）およびダウノルビシン60mg/m2による+1、+8、および+15日目の28日間の治療に基づいています。 患者が完全寛解を達成した場合は、シタラビン、エトポシド、メトトレキサートを含む一連の治療ブロックによる地固め療法を続けます。 地固め療法の終了時に患者がまだ寛解状態にある場合、約 2 年間、6-メルカプトプリンと週 1 回のメトトレキサート投与を含む維持期を継続します。

反応 導入寛解治療の 28 日目に、骨髄サンプルの結果に従って、患者は寛解 (5% 芽球未満) または難治性 (>5% 芽細胞) であると宣言されます。 患者が治療のいずれかの時点で骨髄芽球数の増加を示している場合、患者は再発していると見なされます。