2型糖尿病患者における血管機能およびビタミンE補給に対するハプトグロビン表現型の関係：EVAS試験 (EVAS)

1.0 背景と臨床的意義 1.1 はじめに 2 型糖尿病 (DM2) の発生率は、世界的に、またシンガポールで急速に増加しています。 DM2 患者の罹患率と死亡率の増加の主な原因は、微小血管および大血管の合併症の発症です。 厳密な血糖コントロールは微小血管合併症を減らすことが証明されていますが、大血管合併症に関してはまだ証拠が不足しています. 加速アテローム性動脈硬化は、これらの患者の死亡率と罹患率の増加の主な原因です。 従来の治療に加えて、DM2 患者のアテローム性動脈硬化を制御するための新しい標的を評価することが最も重要です。 真性糖尿病患者のリスク増加を予測する新しいターゲットまたはマーカーを見つけるという満たされていないニーズがあり、これらのハイリスクグループ患者のリスクを軽減するために、従来のターゲットに加えて代替治療を検討する必要があります。

DM2 の患者は、アテローム性動脈硬化症のリスクが高いだけでなく、疾患の負担も大きくなります。 内皮機能不全は、血管に与えられた病理学的損傷の特徴と考えられています。 高血糖症は、活性酸素種（ROS）の生成に関連するミトコンドリア、酵素、および非酵素経路に影響を与え、一酸化窒素バイオアベイラビリティの低下と内皮機能不全を引き起こします。これは、内皮依存性血管拡張の減少と内皮由来調節タンパク質の血漿レベルの増加によって一般的に示されます。 さらに、DM2患者は、抗酸化酵素とα-トコフェロール（ビタミンE）のレベルが低いという形で抗酸化防御が損なわれており、酸化ストレスの増加に対する適切な補償を妨げる可能性があります. アテローム性動脈硬化症の発症を媒介する酸化ストレスの別の役割も、酸化仮説で実証されています。 このモデルでは、酸化的修飾の最も顕著な標的は LDL 分子です。 酸化 LDL は LDL 受容体によって認識されませんが、マクロファージの CD36 スカベンジャー受容体経路によって容易に取り込まれ、かなりのコレステリル エステルの蓄積と泡沫細胞の形成につながります。 酸化 LDL は炎症誘発性であり、内皮 NO 合成酵素の阻害を引き起こし、血管収縮と単球接着を促進し、血小板凝集と血栓症を促進します。

HP表現型と酸化組織損傷

ハプトグロビン (Hp) タンパク質は、ヘモグロビン (Hb) の酸化活性を中和する能力があるため、抗酸化物質です。 ヒトでは、Hp は 3 つの構造的に異なる表現型 (Hp1-1、Hp 2-1、および Hp 2-2) を持つ遺伝子多型によって特徴付けられます。染色体16q22。 Hp2 対立遺伝子のタンパク質産物は、Hp1 対立遺伝子産物と比較して劣った抗酸化物質です。 Hp 1-1 は明確に定義された構造の小分子 (86kDa) ですが、Hp 2-1 はヘテロポリマー (86-300 kDA) によって特徴付けられ、Hp 2-2 は大きな高分子複合体 (170-1,000 kDa) を形成します。

Hp の機能は、赤血球から放出された遊離 Hb を結合することであり、これは赤血球の自然な代謝回転中に血液中に放出されます。 遊離 Hb は、そのヘム鉄の結果として、かなりの酸化組織損傷を引き起こす可能性があります。 しかし、Hb が循環に放出されるとすぐに、非常に高い親和性で Hp に結合し、Hp-Hb 複合体を形成します。 この結合は、Hb からのヘム鉄の放出を防ぐことにより、Hb の酸化力を阻害する働きをします。 Hp は通常、遊離 Hb に対して 400 倍以上のモル過剰で血中に見出されるため、Hp は正常な赤血球代謝回転中に放出されるすべての Hb に結合することができます。 Hb が Hp に結合すると、単球/マクロファージに発現する CD163 スカベンジャー受容体を介して血流から急速に除去されますが、Hp-Hb 複合体の形成と除去は Hp 2-2 表現型で損なわれます。

Hb 由来の鉄は、Hp によって阻害される多くの酸化反応を触媒することができます。

1. 第一鉄ヘム鉄 (Fe2+) は過酸化水素と反応して第二鉄 Hb (Fe3+) と反応性の高いヒドロキシルラジカル種を生成します。 多価不飽和脂肪酸から水素原子を引き抜くことにより、ヒドロキシルラジカルは脂質過酸化のプロセスを開始する可能性があります。
2. 第一鉄 Hb (Fe2+) は、過酸化水素と反応して、非常に不安定な分子であるフェリル Hb (Fe4+) を生成することもできます。この分子は、過酸化水素の 2 番目の分子と容易に反応して、第二鉄 Hb (Fe3+) とスーパーオキシド アニオンを生成します。 スーパーオキシドアニオンの損傷効果は 2 つあります: Hb 中の第二鉄 (Fe3+) を第一鉄 (Fe2+) に還元し、反応 1 で説明した追加のヒドロキシルラジカルの生成を可能にし、スーパーオキシドアニオンを不均化して過酸化水素を生成します。 、再びROSの生産を促進します。

3. メトヘモグロビンとしても知られる第 2 鉄 Hb (Fe3+ を含む) は、そのヘム部分を自発的に移動させることができ、LDL や細胞膜などの多様な親油性環境へのヘムの侵入をもたらします。 ヘム鉄は、新しい脂質環境に挿入されると、上記のように過酸化水素と反応するか、隣接する過酸化脂質と反応してフリーラジカルカスケードを生成し、広範な脂質酸化を引き起こします。

   Hp-Hb 複合体の一部として、Hp は Hb のヘム ポケット内のヘムを安定化し、Hb が酸化損傷を引き起こすのを防ぎます 。 ただし、Hp がヘム鉄の酸化還元活性を中和する程度は、Hp の種類によって異なります。 これは、in vitro および in vivo の両方の多くのシステムで示されています。 例えば、リノレン酸を使用した研究では、232 nm での吸光度が Hp 2-2 よりも大幅に増加することから、Hp 1-1 が酸化 (ジエン形成) を防止することが示されました。 別の研究では、Hb から LDL へのヘム移動による LDL 酸化が調べられました。 ヘム移動は、ダンシル化 LDL によって放出される蛍光シグナルの消光によって測定されました。 Hp 1-1 は、Hp 2-2 と比較して、Hb からのヘム移動の防止に優れていることがわかりました。

   Hp 表現型と心血管リスク研究では、Hp 2-2 Hb 複合体は、非 Hp 2-2 Hb 複合体よりも効果的に除去されないことも示されています。 DM2 患者、特に HP 2-2 患者では、CD163 のダウンレギュレーションにより、この現象がより顕著になります。 CD163/pAkt/IL-10 軸を介した抗炎症性マクロファージ シグナル伝達の障害も、Hp 2-2 患者で見られます。

   Hp 2-2 DM2個体におけるHp-Hb欠損クリアランスは、高密度リポタンパク質（HDL-C）上のApo A1へのHp-Hb結合の増加をもたらし、それによって酸化促進ヘム部分をHDLにつなぎます。 これにより、マクロファージからコレステロールを逆転送する能力が不足します。

   Hp 2-2 タンパク質は、Hp 1-1 と比較して、Hb からのヘム移動をブロックする効率が低くなります。 さらに、Hb がグリコシル化された場合のヘム移動の増加は、Hp 2-2 DM2 で見られる心血管疾患の増加のメカニズムの説明を提供する可能性があります。

   したがって、Hp 2-2 表現型は、Hb と結合する能力の低下、Hp 2-2 Hb 複合体のクリアランスの低下、抗炎症性シグナル伝達経路の障害、LDL 酸化の増加、HDL コレステロールの非効率性およびヘム移動の遮断効率の低下に関連しています。 Hb から Hp 1-1 まで、すべてがより高い心血管リスクにつながります。 これらの経路のいくつかも影響を受ける糖尿病患者では、高血糖とハプトグロビン表現型の相乗効果が悪化し、リスクが高くなります。

   他の集団で行われた縦断研究では、Hp 2-2 遺伝子型は、DM 患者の CVD 発生リスクの 2-5 倍の増加と関連していることがわかっています。 特に、強い心臓の研究では、Hp 2-2 表現型の DM で CVD を有するオッズ比は、Hp 2-1 表現型の DM よりも 2 ～ 5 倍高かった (p=0.002)。 Munich Stent study では、治療を受けた 935 人の糖尿病患者の一連の連続したシリーズが、主要な心臓有害事象についてステント留置後 1 年間追跡調査されました。 この研究では、ハプトグロビン 2-2 表現型が主要な心臓有害事象の独立した予測因子であることがわかりました。 さらに、ビタミン E は 1 つの集団 (Israel-ICARE STUDY) および WHS の事後分析 (Women Health Study)、およびビタミンハプトグロビン 2-2 表現型に影響された死亡率を有する患者のサブグループにおける E 補給は、総死亡率の有意ではない減少を示しました。 これは、大規模な試験として広く採用されておらず、複数の集団で、関連性と利点を実証する必要があります.

   HPの表現型と民族性

   シンガポールで実施された現地研究では、Hp 遺伝子の頻度は次のように人種によって異なることがわかっています。中国の Hp1:0.330;Hp2:0.670;Hp0: 0.029;マレー人:Hp1:0.298;Hp2:0.702 ;Hp0:0.004; インディアンの HP1: 0.167;Hp2:0.833;Hp0:0.009。 Hp頻度の分布は、私たちの集団ではHardy-Weinberg平衡にあると見られているため、Hp 2-2の予想される有病率は約30-40%です。 Ｈｐ表現型は、ＴＴＳＨ研究所でのＴａｑＭａｎ分析によって決定される。

   1.2 ハプトグロビン遺伝子型と内皮機能

   内皮機能障害は、DM における血管疾患の病因の潜在的な原因としてますます注目されています。 DM2 では、内皮による収縮因子と弛緩因子の放出における自然な微妙なバランスが変化し、血管や末端器官のさらなる損傷に寄与します。 内皮機能の障害は、複数の危険因子が心血管の健康に有害な影響を与える最終的な共通経路を提供すると仮定されており、心血管リスクの強力な代理マーカーとして確立されており、ある研究ではフラミンガム リスク スコアよりも優れた予測可能性が示されています。 EndoPAT 2000 デバイスは、非侵襲的な方法で内皮機能を推定するために確立されているため、使用されます。

   Hp 遺伝子型と内皮機能との関連性を調べた直接的な研究はありませんが、虚血後の反応性充血とひずみゲージプレチスモグラフィーを使用して内皮機能を評価し、虚血期間後の最大流量として表した 1 つのパイロット研究では、それが見られました。糖尿病のHp 2-2患者は、非Hp 2-2患者と比較して内皮機能が悪かった(450 +-50対600 +-40)。

   1.3 ハプトグロビンの遺伝子型と CIMT (頸動脈内膜中膜の厚さ)

   糖尿病心臓研究では、Hp 遺伝子型の遺伝子解析により、Hp 2-2 遺伝子型と頸動脈内膜中膜厚 (CIMT) との関連が示されました。 これらの測定は、マンハイム CIMT コンセンサスの推奨事項に従って、被験者を横たえ、頭を伸ばし、調査した頸動脈の反対側にわずかに回して行います。また、ユーザー間合意の限界は -0.1 から +0.1 の範囲内であることがわかりました。

   1.4 ハプトグロビン遺伝子型と大動脈硬化

   Hp 遺伝子型と大動脈硬化を比較した直接的な研究はありませんが、脈波輪郭解析法を使用して大動脈と小動脈の動脈弾性を評価した研究が 1 つ行われました。 大動脈弾性指数は、Hp 1-1 と比較して、Hp 2-2 の患者で低かった (8.4 ± 2.3 ml/mmHg 対 12.6 ± 4.1 ml/mmHg x 100; p

   sphygmocor デバイスを使用した 2 型糖尿病の経過の早い段階で、血管硬化の増加が見られます。 このこわばりは、構造的な血管の変化ではなく、内皮機能不全に関連している可能性が高く、これは逆に可逆的であることを示唆しています。 大動脈脈波伝播速度 (PWV)、大動脈拡張性の尺度も、既知の交絡因子とは無関係に糖尿病患者の死亡率を予測することがわかっています。 SphygmoCor Xcel デバイスを使用して、頸動脈から大腿への脈波速度と中心大動脈圧を使用して大動脈硬化を推定します。 研究者は、研究を開始する前に、Bland-Altman プロットを使用して一致の限界を確立するために、20 人の個人の脈波伝播速度を推定します。

   1.5 ハプトグロビン遺伝子型と血管マーカー

   血管細胞接着分子-1 (VCAM-1) および細胞間接着分子-1 (ICAM-1) は、活性化された内皮細胞 (EC) の表面に発現し、初期のアテローム性動脈硬化症で発現するタンパク質です。 これらのマーカーは評価されており、内皮機能障害の優れたマーカーと見なされています。これは、タンパク質の一部が循環中に排出され、末梢血漿で検出できるためです。

   1.6 ハプトグロビンの遺伝子型と血漿脂質の表現型

   Hp 2-2 表現型は、主にアテローム性動脈硬化症に関与する、より高い酸化 LDL 濃度と関連しています。 Apo-A1 HDL の濃度も、このグループの患者でより高いことが知られています。 Hp 2-2 表現型は、これらの患者をより高い心血管リスクにさらす、より高い Lp(a) 濃度にも関連している可能性があります。 プロテオミクスを使用して血漿脂質の詳細な表現型を調べ、新しい関連性を探す予定です。

   1.7 ハプトグロビン遺伝子型と酸化ストレス

   Hp 2-2 遺伝子型が内皮に高い酸化ストレスを与えることが知られています。 総酸化ポテンシャルは、酸化インデックスとして計算されます。 この指数を計算するために、次のように 2 つのテストが行​​われます。 この指標は、全体的な酸化ストレスの適切な推定値として確立されています。

   1. d-ROMs テスト: このテストは、自動化された d-ROMs メソッドを使用して、血清サンプルに対して実行されます。 (Vassalle C、Pratali L、Boni C、Mercuri A、Ndreu R. 冠動脈疾患患者の酸化促進剤と抗酸化剤の複合測定としての酸化ストレススコア。 クリン・バイオケム 2008;41:1162-7)
   2. FRAP（プラズマの鉄還元能力 - 血管への損傷を防ぐプラズマの能力の尺度）およびd-ROM（活性酸素代謝物の誘導体）テストを使用して、酸化ストレススコアを計算します。

   グリオキサール、メチルグリオキサール、非対称ジメチルアルギニン、ホモアルギニンなどの酸化ストレスの他のマーカーも測定されます。

   1.8 ハプトグロビン遺伝子型と網膜動静脈指数

   網膜微小血管異常、特に動脈収縮および細静脈拡張の存在は、心血管リスクの増加と関連しており、内皮機能障害および炎症と関連しています.現在、Hp遺伝子型と網膜動静脈（AV）指数との関係を調べた研究はありません. . 検査の前に、眼底検査のために瞳孔を散大させ、角膜を潤滑するために点眼薬が注入されます。 眼科で被験者の網膜イメージングが行われます。 患者が網膜イメージングに参加したくない場合は、網膜イメージング検査からオプトアウトすることを選択できます。

   2.0 ビタミン E、ハプトグロビン表現型および心血管リスクの軽減

   特に DM における Hp1 と Hp2 の対立遺伝子タンパク質産物の機能上の違いは、Hp 2-2 個体と非 Hp 2-2 個体の合併症に対する感受性の違いを説明できますが、ビタミン E のユニークな利点の主な理由は、レドックス活性 Hb Hp 2-2 DM の個人でのみ HDL に関連付けられています。 DM患者では、Hp-Hb複合体が減少すると、高密度リポタンパク質（HDL）上のApo-A1へのHp-Hb結合が増加し、それによって酸化促進ヘム部分がHDLに結合します。 Hp 2-2 DM 個体の HDL は、マクロファージからのコレステロールの逆転送を刺激する能力が不足しています。 これらに加えて、Hp表現型2-2は、フリーラジカルのクリアランス不足とLDL過酸化の増加による酸化ストレスの増加と関連しています。

   ビタミンEは、抗炎症特性を持つ強力な抗酸化物質です。 強力なフリーラジカル捕捉特性と、抗酸化酵素と直接かつ強力に相互作用することにより、酸化ストレスの状態を大幅に軽減します。 ヒトおよび動物モデルにおけるビタミン E 補給は、脂質過酸化、スーパーオキシド生成を減少させ、泡沫細胞の形成に特に重要なスカベンジャー受容体 (SR-A および CD36) の発現を減少させることが示されています。 ビタミン E は、一般集団における心血管リスクの軽減に有用であるとは証明されていませんが、DM を伴う HP 2-2 表現型の患者には有用であり、どちらの状態も 1 つの集団で行われた研究で酸化ストレスを大幅に増加させます。

   DM参加者が摂取した唯一の抗酸化物質がビタミンEであり、研究参加者のHpタイプが決定された介入的ランダム化比較試験（RCT）は3つしかありません. ICARE 研究は、Hp 遺伝子型が前向きに収集された DM 患者のビタミン E を評価することを目的とした唯一の RCT でした。 この研究では、Hp 2-2 表現型を持つ 55 歳以上の 1,434 人の DM 患者がビタミン E (400 IU/日/プラセボ) に無作為に割り付けられました。 主要な複合結果は、試験開始後 18 か月で終了した時点で、プラセボ (4.7%、p=0.001) と比較して、ビタミン E を投与された個人 (2.2%) で有意に減少しました。 さらに、WHS および HOPE 研究のために募集された患者のサブセットからの血液サンプルは、Hp 多型について分析され、結果は患者の HP タイプに従って再評価されました。 これらすべての研究で、心血管イベントのリスクが高いのはHp 2-2の個人で見られ、ビタミンE補給の利点はこのグループで見られました.

   2.1 ビタミン E (α-トコフェロール) の用量と期間の正当化。

   1日あたり400 IUのビタミンEとそれに対応するプラセボを使用します. ビタミン E カプセル (400 IU) とそれに対応するプラセボ カプセルを準備するビーコン社に依頼します。 ビタミン E 製剤は、RRR 構成で発生する天然のトコフェロールになります。 心血管リスクの代理マーカーを使用したほとんどの研究では、補給後6か月で改善が見られたため、ビタミンE 400 IUを6か月間与えます. さらに、上記の ICARE 研究では、心血管転帰の改善が 18 か月で見られたため、心血管リスクの代理マーカーの改善を確認するには 6 か月が適切な期間であることを示唆しています。

   ビタミン E の 8 つの形態は 2 つのグループに分けられます。 4 つはトコフェロールで、4 つはトコトリエノールです。 それらは接頭辞のアルファ (α)、ベータ (β)、ガンマ (γ)、およびデルタ (δ) によって識別されます。 アルファ-トコフェロールは、自然界で最も豊富な形態であり、胎児リソルションアッセイに基づいて最も高い生物学的活性を持つことが知られており、ヒトのビタミン E 欠乏症の症状を逆転させます。 天然のトコフェロールは、RRR 構成でのみ発生します。 合成形態には 8 つの異なる立体異性体が含まれており、「all-rac」-α-トコフェロールと呼ばれます。

   ビタミン E は、植物油 (小麦胚芽油、ヒマワリ油、ベニバナ油、トウモロコシ油、大豆油)、ナッツ (アーモンド、ピーナッツ、ヘーゼル ナッツ)、種子 (ヒマワリの種)、緑の葉野菜 (ほうれん草、ブロッコリー) に天然の形で含まれており、強化されています。朝食用シリアル、フルーツ ジュース、マーガリン、スプレッド。 個人の医学研究所の推奨摂取量は、1日あたり約15mgです。 成人のビタミン E サプリメントの最高安全レベルは、ビタミン E の天然型で 1,500 IU/日、人工 (合成) 型で 1,000 IU/日です。 利用可能な人気のあるビタミン E サプリメントには、天然油由来の D-α トコフェロールが含まれます。 市販のビタミン E サプリメントは、通常、エステル化されていないか、酢酸、コハク酸、またはニコチン酸のエステルとして提供される α-トコフェロールのみを含んでいます。 ヒトでは、遊離およびエステル化α-トコフェロールは同じバイオアベイラビリティを持っています。 サプリメントには、天然の RRR または合成 (all-rac) α-トコフェロールのいずれかを含めることができます。 天然の RRR α-トコフェロールの生物学的活性は、合成 all-rac-α-トコフェロールや他の天然型のビタミン E よりも高い.

   酸化ストレスと個々の遺伝子構造の両方が、ヒトのビタミンE恒常性に寄与しており、これが臨床試験での臨床変数の改善に見られるさまざまな臨床効果の原因である可能性があります. ビタミンEは腸で吸収され、脂質と一緒に吸収されるリンパ系を介して循環に入り、カイロミクロンに詰め込まれて肝臓に運ばれます. 肝臓を通過した後、α-トコフェロールのみが優先的に血漿に現れ、他の形態のビタミン E のほとんどは優先的に代謝され、胆汁に分泌されるか、取り込まれずに糞便に排泄されます。 肝臓では、肝臓のアルファ-トコフェロール転送タンパク質 (α-TTP) が、2R-立体異性体で α- 型を特異的に選別します。 血漿 RRR-α-トコフェロールの取り込みは飽和プロセスです。 RRR-α-トコフェロールの血漿レベルは、ビタミン E サプリメントの投与量を 1 日あたり最大 1,320 mg all-rac-α-トコフェロールまで増やしても、約 80 μM で増加しなくなります。 これは、新たに吸収されたα-トコフェロールによる循環循環の急速な置換の二次的なものである可能性が高く、速度論的分析は、α-トコフェロールのプール全体が毎日置換されることを示しています. ヒトでは、体内での α-トコフェロールの優先的な蓄積は、機能的な α-TTP と非 α-トコフェロールの代謝と排泄の増加の両方に依存しています。 α-トコフェロール転送タンパク質は、肝臓からのビタミン E の分泌を制御することにより、ビタミン E の全身分布と濃度を調節します。 α-トコフェロール転移タンパク質遺伝子の発現は、酸化ストレスと低酸素、核内受容体 PPARα と RXR のアゴニスト、および cAMP レベルの増加によって誘導されることがわかっています。 これは、cAMP 応答要素結合 (CREB) 転写因子と呼ばれる既存の転写因子によって媒介されます。 健康な人によく見られる一塩基多型は、プロモーター活性に大きな影響を与えます。

   臨床試験では、400 IU から 2,000 IU までのさまざまな用量のビタミン E が使用されています。 米国医学研究所は、推奨食事摂取量 (RDA) を 15 ～ 1,000 mg/日 (1 mg = 1.5 IU; 22.5 ～ 1,500 IU/日) と提案しています。 私たちは 400 IU の用量を 6 か月間使用しています。 RDA 内で服用した場合、副作用の証拠はありませんが、特に抗凝固薬を服用している患者では、高用量で出血毒性がある可能性があります。 したがって、抗凝固薬を服用している患者は除外されます。

   3.0 統計上の考慮事項

   3.1 サンプルサイズの計算: 研究の全体的な推定サンプルサイズは 300 人の患者です。 RCT フェーズの各 Hp 表現型層に必要な 100 のサンプル サイズは、以下に基づいています。5% のタイプ I エラー。 90% の電力;ビタミンEが各リスクマーカーに対して0.5の標準化された効果サイズ（平均差/プールされた標準誤差）で表される、少なくとも中程度の効果を持つと予想されるという仮定;等分散の 2 標本 t 検定。そしてドロップアウト率15%。 私たちの母集団における Hp 2-2 の有病率が 35% であると仮定すると、100 人の Hp 2-2 表現型患者を募集するには、300 人の患者をスクリーニングする必要があります。

   RHI の平均差が 0.25 単位で、対応する標準偏差 (SD) が 0.3 であると仮定すると、標準化された効果量は 0.25/0.3 になります。 = 別の研究で見られた RHI の最小差として 0.83。 RCT のパイロットの性質、および一般的な研究の探索的性質のため、複数のテスト/比較を調整しませんでした。

   in vitro 研究のサンプル サイズは、限られたリソースによって制限されます。 それにもかかわらず、両側ウィルコクソン符号順位検定、5% のタイプ I エラー、0.5 のペア間の相関、および 5000 のモンテカルロ シミュレーション サンプルに基づくシミュレーション結果は、20 ペアが中程度から大きな標準化された効果サイズを検出するのに十分な検出力を提供することを示しています。 (M1)。

   無作為化は、ウェブを通じて電子的に行われます。これは、パスワードで保護された一元化されたイントラネット Web サイトであり、患者が試験に適格になった時点で無作為化されます (厳密に順次)。 ブロックされた無作為化スケジュールは、1:1 の割り当て比率に基づく研究のために、10 のブロックで採用されます。 専用のパスワードで保護されたサイトは、薬箱にラベル表示された治療番号に対応する一意の患者試験番号を割り当てます。 無作為化の後、最初の用量が患者に投与される。

   3.2 データ処理と統計分析: データ処理 適切に設計された適切な研究データ収集フォームを使用して、訪問のたびに適切に設計された研究データ収集フォームと電話によるフォローアップ評価を使用して、関連するすべてのデータを収集します。 すべての研究データは、データ入力およびデータ検証研究担当者のみが評価できる研究データベースに保存されます。

   ベースラインの人口統計学的変数、臨床変数、およびリスクマーカーに関する統計分析計画データは、潜在的な関連性に関する洞察を提供するために、Hp表現型および全体的に要約されます。 バイナリ データは、頻度と比率を使用して要約されます。 カイ 2 乗検定とフィッシャーの正確確率検定を使用して、関連する関連性 (ビタミン E の利点を含む) を評価し、必要に応じてロジスティック回帰を使用して、潜在的な交絡因子を調整しながら関連性を特徴付けます。 連続変数は、必要に応じて平均 (標準偏差) または中央値 (範囲) を使用して要約されます。 2 つのサンプル t 検定またはマンホイットニー検定を使用して関連する関連付けを評価し、一般化線形モデルを使用して関連付けを特徴付け、潜在的な交絡因子を調整します。 一般化線形モデルは、必要に応じて非正規 (非対称) データまたは対数正規データ (検査データなど) に対応できるため、考慮されます。 関連する結果ごとに個別のテストとモデルが実行されます。

   インビトロ研究からのデータは、前の段落で説明したのと同様に、Hp 2-2 表現型の状態とビタミン E 濃度によって要約されます。 Wilcoxon Signed-Ranked テストを使用して、Hp 表現型グループ間のビタミン E の効果を濃度別に評価します。 Mann-Whitney および Jonckheere-Terpstra テストを使用して、Hp 表現型グループによるビタミン E の濃度と利益の関係を評価します。 一般化線形混合モデルを使用して、(i) HP 2-2 患者と非 HP 2-2 患者のマッチング、(ii) ビタミン E 濃度による患者内での反復評価、(iii) を説明しながら、さまざまな傾向と関連性を調査します。潜在的な交絡因子の調整、および (iv) 対数正規分布またはガンマ分布などの他の適切な分布を使用した、データの潜在的な非正規性 (非対称性) の調整。 インビトロ研究からのデータの全体的な分析が行われます。

   Bland-Altman 分析を使用して、一致および信頼性研究の一致限界を推定および評価します。 必要に応じて、混合モデル アプローチを使用して、関連する信頼係数を推定および評価します。

   5.0 臨床的意義

   Hp 2-2 表現型と心血管リスクとの間に関連性が見られる場合、このグループの患者は、スタチンに加えてビタミン E 治療や心血管リスクを軽減するその他の従来の治療の対象となる可能性があります。 ビタミンE治療がこのグループの患者のリスクを軽減するのに役立つかどうかを確認するために、将来の大規模な全国的RCTを計画することができます. 多民族集団でこのような研究を実施することは、期待される利益の一貫性と一般化可能性に関する洞察を提供するため、不可欠です。