プラダー ウィリー症候群の被験者における血清プロテオームの特徴付け (PROTEOMARKER) (PROTEOMARKER)

方法 研究デザイン この研究には 2 つのフェーズが含まれます。最初の探索フェーズは「発見」として知られ、プラダー ウィリー症候群 (PWS) の 30 人の被験者が SOMAscan 技術で分析され、血清プロテオミクス プロファイルが実行されます。 対照群（脂肪症グレード０／１）および脂肪症群（脂肪症グレード２／３）を確立することにより、ＰＷＳ被験者において腹部超音波を使用することにより、脂肪肝を決定する。 その後、少なくとも 2 つの候補バイオマーカーが選択され、発見フェーズで使用された 30 のサンプル (サンプルは既に血清バンクに存在) と、この研究に特別に登録された PWS 患者からのさらに 22 のサンプルで ELISA によって検証されます。

忍耐：

以前の MIRNOMAPWS プロジェクト (RC-2018) で既に採用された 30 人の被験者が、PWS の遺伝子診断を受けており、ベースライン条件で 18 歳から 45 歳までの男女が考慮されます。

各患者について、次の変数が医療記録から収集されます。

• 人体測定パラメータ (身長、体重、BMI、胴囲);
• インピーダンス測定法 (BIA) を使用した体組成 (除脂肪体重、体脂肪)。
• 標準基準に従って超音波で測定された脂肪症のレベル
• 間接熱量測定を使用した基礎代謝;
• メタボリック シンドロームを決定する生化学的パラメーター (HDL コレステロール、トリグリセリド、血糖);
• 血圧;
• 併用ホルモン療法（成長ホルモン療法、性ステロイド、および/またはl-チロキシン）。

プロテオミクス分析のための血清収集: プロテオミクス分析は、すでに利用可能な 30 のサンプル (「発見」段階に使用) と 22 人の新しい患者に対して実行されます。 MIRNOMAPWS プロジェクト (RC-2018) で行われたことと同様に、新しい患者からの空腹時血液サンプルは、BD Vacutainer® 血清分離チューブ (BD - Plymouth PL6 7BP、英国) で標準的な静脈穿刺によって収集され、1900g、4°で遠心分離されます。 C で 10 分間、16,000 g、4°C でさらに 10 分間加熱します。 長期保存のために、上清を-80℃で凍結した。

プロテオミクス分析: プロテオミクス分析の前に、ヘモグロビンの存在を分光光度計 Beckman Coulter® DU®730 (Beckman Coulter, Brea, CA, USA) により、Harboe の直接分光測光法とアレン補正を使用して評価します: Hb (g / L) = (167、2 × A415 - 83.6 × A380 - 83.6 × A450) x 1/1000 × 1 / dH2O で希釈。 血清で考慮されるカットオフは 0.020 g/L です。

血清のプロテオミクス特性評価には、SomaLogic SOMAscan プラットフォームに基づく新しいハイスループット オミックス技術が使用されます。 このシステムは、タンパク質標的に対して高い親和性と特異性を備えた DNA のアプタマー形態である SOMAmer (Slow Off-rate Modified Aptamers) の検出に基づいています。 さらに、これらのアプタマーはヌクレオチダーゼ活性に耐性があり、通常の抗体よりも高い親和性を示します。 この研究で使用されるパネルにより、代謝性疾患の発症に関与し、一般的な炎症反応の一部であり、心血管疾患および腫瘍学の研究に関心のある 1500 のタンパク質標的を評価することができます。

一般に、テストの感度と性能は通常の ELISA キットに匹敵し、定量限界は約 100 fM、検出限界は 40 fM で、必要なサンプルはわずか 65 µL です。

ELISA による候補の検証: このフェーズでは、発見フェーズで特定された少なくとも 2 つのマーカーが検証され、マルチパラメトリック相関分析で脂肪症の増加との有意な関連性が示されます。 検証は、特定のサンドイッチ型の市販の ELISA キットを使用して、血清サンプル中の候補を定量化することによって行われます。 前のセクションで述べたように、合計 52 のサンプルが測定され、そのうち 30 は発見フェーズに登録され (血清は既に保存されています)、被験者からの別の 22 の新しいサンプルは検証フェーズに登録されます。