Prader Willi Syndrome(PROTEOMARKER) 환자에서 혈청 프로테옴의 특성 규명 (PROTEOMARKER)

방법 연구 설계 이 연구에는 두 단계가 포함됩니다. "발견"으로 알려진 첫 번째 탐색 단계에서는 PWS(Prader-Willi Syndrome)가 있는 30명의 피험자가 SOMAscan 기술로 분석되어 혈청 프로테옴 프로필을 수행합니다. 간 지방증은 대조군(지방증 등급 0/1)과 지방증 그룹(지방증 등급 2/3)을 설정하여 PWS 피험자에서 복부 초음파를 사용하여 결정됩니다. 그 후, 발견 단계에서 사용된 30개 샘플(혈청 은행에 이미 존재하는 샘플)과 이 연구에 특별히 등록된 PWS 환자의 추가 22개 샘플에서 적어도 2개의 후보 바이오마커가 선택되고 ELISA에 의해 검증됩니다.

환자:

이전 MIRNOMAPWS 프로젝트(RC-2018)에서 PWS의 유전적 진단과 함께 이미 모집된 30명의 피험자는 기준 조건에서 18세에서 45세 사이의 남녀 모두를 고려할 것입니다.

각 환자에 대해 의료 기록에서 다음 변수를 수집합니다.

• 인체 측정 파라미터(신장, 체중, BMI, 허리 둘레);
• 임피던스 측정 기술(BIA)을 사용한 체성분(제지방량, 체지방량);
• 표준 기준에 따라 초음파로 측정한 지방증 수준
• 간접 열량계를 이용한 기본 대사;
• 대사 증후군을 결정하는 생화학적 파라미터(HDL 콜레스테롤, 트리글리세리드, 혈당);
• 혈압;
• 수반되는 호르몬 요법(성장 호르몬 요법, 성 스테로이드 및/또는 l-티록신).

단백질 분석을 위한 혈청 수집: 단백질 분석은 이미 이용 가능한 30개의 샘플("발견" 단계에 사용됨)과 22명의 새로운 환자에 대해 수행됩니다. MIRNOMAPWS 프로젝트(RC-2018)에서 수행된 것과 유사하게, 새로운 환자의 공복 혈액 샘플은 BD Vacutainer® 혈청 분리 튜브(BD - Plymouth PL6 7BP, UK)에서 표준 정맥 천자에 의해 수집되고 4°에서 1900g에서 원심분리됩니다. C에서 10분간, 16,000g에서 4°C에서 추가로 10분간. 장기 보관을 위해 상청액을 -80°C에서 동결시켰다.

단백질체 분석: 단백질체 분석 전에 헤모글로빈의 존재를 분광광도계 Beckman Coulter® DU®730(Beckman Coulter, Brea, CA, USA)에 의해 Harboe의 직접 분광광도법과 Allen 보정을 사용하여 평가합니다: Hb(g/L) = (167, 2 × A415 - 83.6 × A380 - 83.6 × A450) x 1/1000 × 1 / dH2O로 희석. 혈청에 대해 고려되는 컷오프는 0.020g/L입니다.

혈청의 단백질 특성화를 위해 SomaLogic SOMAscan 플랫폼을 기반으로 하는 새로운 고처리량 오믹스 기술이 사용될 것입니다. 이 시스템은 SOMAmers(Slow Off-rate Modified Aptamers)의 검출을 기반으로 하며, 이는 단백질 표적에 대해 높은 친화력과 특이성을 가진 압타머 형태의 DNA입니다. 또한, 이러한 앱타머는 뉴클레오티다아제 활성에 저항성이 있으며 일반 항체보다 높은 친화력을 나타냅니다. 이 연구에 사용된 패널을 통해 대사 질환의 발달에 관여하고 일반적인 염증 반응의 일부이며 심혈관 질환 및 종양학 연구에 관심이 있는 1500개의 단백질 표적을 평가할 수 있습니다.

일반적으로 테스트의 감도와 성능은 일반 ELISA 키트와 비슷하며 정량화 한계는 약 100fM이고 검출은 40fM이며 시료는 65µL만 필요합니다.

ELISA에 의한 후보 검증: 이 단계에서는 다중 매개변수 상관 분석에서 지방증의 증가와 유의미한 연관성을 입증한 발견 단계에서 식별된 적어도 두 개의 마커가 검증됩니다. 유효성 검사는 특정 샌드위치 유형의 상용 ELISA 키트를 사용하여 혈청 샘플의 후보를 정량화하여 수행됩니다. 이전 섹션에서 언급한 바와 같이 총 52개의 샘플이 측정될 것이며, 그 중 30개는 발견 단계(이미 저장된 혈청)에 등록되고 다른 22개의 새로운 샘플은 검증 단계에 등록됩니다.