Karakterisering av serumproteom hos personer med Prader Willi syndrom (PROTEOMARKER) (PROTEOMARKER)

Metoder Studiedesign Studien inkluderer to faser, en første utforskende fase kjent som "oppdagelse" hvor 30 personer med Prader-Willi syndrom (PWS) vil bli analysert med SOMAscan-teknologi for å utføre en serum proteomisk profil. Hepatisk steatose vil bli bestemt ved bruk av abdominal ultralyd hos PWS-personer ved å etablere kontrollgruppen (steatosegrad 0/1) og steatotisk (steatosegrad 2/3). Deretter vil minst to kandidatbiomarkører bli valgt ut og validert av ELISA i de 30 prøvene som ble brukt i oppdagelsesfasen (prøver som allerede finnes i serumbanken vår) og ytterligere 22 prøver fra PWS-pasienter som er spesifikt registrert for denne studien.

Pasienter:

30 forsøkspersoner som allerede er rekruttert i vårt tidligere MIRNOMAPWS-prosjekt (RC-2018) med genetisk diagnose av PWS, av begge kjønn og i alderen mellom 18 og 45 år i baseline-tilstander, vil bli tatt i betraktning.

For hver pasient vil følgende variabler bli samlet inn fra journalene:

• antropometriske parametere (høyde, vekt, BMI, midjeomkrets);
• kroppssammensetning (mager masse, fettmasse), ved bruk av impedansmålingsteknikken (BIA);
• nivåer av steatose målt med ultralyd i henhold til standardkriterier
• grunnleggende metabolisme, ved hjelp av indirekte kalorimetri;
• biokjemiske parametere som bestemmer det metabolske syndromet (HDL-kolesterol, triglyserider, blodsukker);
• blodtrykk;
• samtidig hormonbehandling (veksthormonbehandling, kjønnssteroider og/eller l-tyroksin).

Seruminnsamling for proteomisk analyse: den proteomiske analysen vil bli utført på de 30 prøvene som allerede er tilgjengelige (brukt til "oppdagelsesfasen") og på 22 nye pasienter. I likhet med det som ble gjort for MIRNOMAPWS-prosjektet (RC-2018), vil fastende blodprøver fra nye pasienter bli samlet inn ved standard venepunktur i BD Vacutainer® serumseparasjonsrør (BD - Plymouth PL6 7BP, UK) og sentrifugert ved 1900g ved 4° C i 10 minutter og ved 16 000 g ved 4 °C i ytterligere 10 minutter. Supernatantene ble frosset ved -80°C for langtidslagring.

Proteomisk analyse: før den proteomiske analysen vil tilstedeværelsen av hemoglobin bli evaluert med spektrofotometer Beckman Coulter® DU®730 (Beckman Coulter, Brea, CA, USA) ved å bruke den direkte spektrofotometriske metoden til Harboe med Allen-korreksjon: Hb (g/L) = (167, 2 × A415 - 83,6 × A380 - 83,6 × A450) x 1/1000 × 1 / fortynning i dH2O. Skjæringsgrensen som vurderes for serum vil være 0,020 g/L.

For proteomisk karakterisering av serum, vil en ny high-throughput omics-teknologi basert på SomaLogic SOMAscan-plattformen bli brukt. Systemet er basert på deteksjon av SOMAmers (Slow Off-rate Modified Aptamers), som er aptamere former for DNA med høy affinitet og spesifisitet for proteinmålet. Videre er disse aptamerene resistente mot nukleotidaseaktivitet og viser høyere affinitet enn normale antistoffer. Panelet som brukes i denne studien vil tillate oss å evaluere 1500 proteinmål som er involvert i utviklingen av metabolske sykdommer, er en del av den generelle inflammatoriske responsen, og er av interesse i studiet av hjerte- og karsykdommer og onkologi.

Generelt er følsomheten og ytelsen til testen sammenlignbar med den for et normalt ELISA-sett, med grenser for kvantifisering rundt 100 fM og deteksjon på 40 fM, og behovet for kun 65 µL av prøven.

Validering av kandidater ved ELISA: i denne fasen vil minst to av markørene bli validert, identifisert i oppdagelsesfasen, som har vist en signifikant sammenheng med økningen i steatose i multiparametriske korrelasjonsanalyser. Valideringen vil bli gjort ved å kvantifisere kandidatene i serumprøvene ved å bruke spesifikke kommersielle ELISA-sett av sandwich-type. Som nevnt i forrige seksjon vil totalt 52 prøver bli målt, hvorav 30 er registrert for oppdagelsesfasen (sera allerede lagret) og ytterligere 22 nye prøver fra forsøkspersoner som er påmeldt til valideringsfasen.