Karakterisering af serumproteom hos personer med Prader Willi syndrom (PROTEOMARKER) (PROTEOMARKER)

Metoder Undersøgelsesdesign Studiet omfatter to faser, en første eksplorativ fase kendt som "opdagelse", hvor 30 forsøgspersoner med Prader-Willi Syndrom (PWS) vil blive analyseret med SOMAscan teknologi for at udføre en serum proteomisk profil. Hepatisk steatose vil blive bestemt ved brug af abdominal ultralyd hos PWS-personer ved at etablere kontrolgruppen (steatosegrad 0/1) og den steatotiske (steatosegrad 2/3). Efterfølgende vil mindst to kandidatbiomarkører blive udvalgt og valideret af ELISA i de 30 prøver, der blev brugt i opdagelsesfasen (prøver, der allerede er til stede i vores serumbank) og yderligere 22 prøver fra PWS-patienter, der er specifikt tilmeldt denne undersøgelse.

Patienter:

30 forsøgspersoner, der allerede er rekrutteret i vores tidligere MIRNOMAPWS-projekt (RC-2018) med genetisk diagnose af PWS, af begge køn og i alderen mellem 18 og 45 år i baseline-tilstande, vil blive taget i betragtning.

For hver patient vil følgende variabler blive indsamlet fra lægejournalerne:

• antropometriske parametre (højde, vægt, BMI, taljeomkreds);
• kropssammensætning (mager masse, fedtmasse), ved hjælp af impedansmålingsteknikken (BIA);
• niveauer af steatose målt med ultralyd i henhold til standardkriterier
• grundlæggende metabolisme ved hjælp af indirekte kalorimetri;
• biokemiske parametre, der bestemmer det metaboliske syndrom (HDL-kolesterol, triglycerider, blodsukker);
• blodtryk;
• samtidig hormonbehandling (væksthormonbehandling, kønssteroider og/eller l-thyroxin).

Serumindsamling til proteomisk analyse: Den proteomiske analyse vil blive udført på de 30 prøver, der allerede er tilgængelige (anvendt til "opdagelsesfasen") og på 22 nye patienter. På samme måde som det, der blev gjort for MIRNOMAPWS-projektet (RC-2018), vil fastende blodprøver fra nye patienter blive indsamlet ved standard venepunktur i BD Vacutainer® serumseparationsrør (BD - Plymouth PL6 7BP, UK) og centrifugeret ved 1900g ved 4° C i 10 minutter og ved 16.000 g ved 4°C i yderligere 10 minutter. Supernatanterne blev frosset ved -80°C til langtidsopbevaring.

Proteomisk analyse: før den proteomiske analyse vil tilstedeværelsen af ​​hæmoglobin blive evalueret med spektrofotometer Beckman Coulter® DU®730 (Beckman Coulter, Brea, CA, USA) ved brug af Harboes direkte spektrofotometriske metode med Allen-korrektion: Hb (g/L) = (167, 2 × A415 - 83,6 × A380 - 83,6 × A450) x 1/1000 × 1 / fortynding i dH2O. Skæringsgrænsen for serum vil være 0,020 g/L.

Til den proteomiske karakterisering af serum vil en ny high-throughput omics-teknologi baseret på SomaLogic SOMAscan-platformen blive brugt. Systemet er baseret på detektion af SOMAmers (Slow Off-rate Modified Aptamers), som er aptamere former for DNA med høj affinitet og specificitet for proteinmålet. Desuden er disse aptamerer resistente over for nukleotidaseaktivitet og udviser højere affinitet end normale antistoffer. Panelet brugt i denne undersøgelse vil give os mulighed for at evaluere 1500 proteinmål, der er involveret i udviklingen af ​​metaboliske sygdomme, er en del af den generelle inflammatoriske respons og er af interesse i studiet af hjerte-kar-sygdomme og onkologi.

Generelt er testens følsomhed og ydeevne sammenlignelig med den for et normalt ELISA-kit, med grænser for kvantificering omkring 100 fM og detektion på 40 fM, og behovet for kun 65 µL af prøven.

Validering af kandidater ved ELISA: i denne fase vil mindst to af markørerne blive valideret, identificeret i opdagelsesfasen, som har vist en signifikant sammenhæng med stigningen i steatose i multiparametriske korrelationsanalyser. Valideringen vil blive udført ved at kvantificere kandidaterne i serumprøverne ved hjælp af specifikke sandwich-type kommercielle ELISA-kits. Som nævnt i det foregående afsnit vil der blive målt i alt 52 prøver, hvoraf 30 er tilmeldt opdagelsesfasen (sera allerede lagret) og yderligere 22 nye prøver fra forsøgspersoner, der er tilmeldt valideringsfasen.