HAART에 따른 HIV 환자의 지질 및 탄수화물 대사 변화 및 체지방 분포에 대한 DHA의 영향.

가설: DHA 치료는 HAART와 관련된 지질 장애를 적어도 부분적으로 되돌릴 수 있고 HAART와 관련된 지방 재분배를 개선하거나 적어도 악화시키지 않으면서 수지상 세포 및 단핵구 기능 능력에 추가 장애를 유발하지 않을 수 있습니다.

변수: 총 콜레스테롤 및 그 분획, 트리글리세리드, 인슐린, 섬유소용해 마커, 종양 괴사 인자 알파(TNF-α) 및 인체 측정, 생체 임피던스, 초음파, DEXA 및 복부 CT로 평가한 지방 분포에 대한 DHA 치료의 효과. 수지상 세포와 단핵 세포의 표현형 및 기능적 능력에 대한 DHA 투여의 효과. 목적: 고용량의 고순도 도코사헥사노산(DHA) 치료가 고활성 항레트로바이러스 요법(HAART)과 관련된 지질 장애 및 지방 재분포, 표현형 및 기능에 미치는 영향을 전체적으로 또는 부분적으로 되돌릴 수 있는지 확인하기 위해 수지상 세포 및 단핵구의 데이터 분석: 기준선 데이터는 양호한 균형을 위해 분석됩니다. Fisher의 정확 테스트는 범주형 변수, 연속 변수에 대한 스튜던트 t 테스트 및 순서 변수에 대한 Mann-Whitney 테스트 간의 차이를 평가하는 데 사용됩니다. 주요 효능 변수는 기준선 값을 공변량으로 취하는 MANCOVA 모델을 사용하여 기준선과 최종 값 사이의 차이입니다. 효능은 두 치료 그룹 사이의 연구가 끝날 때 조정된 수단을 대조하여 평가할 것입니다. Intention to Treat 분석이 사용됩니다.

임상 추적이 수행될 센터에서 수행하는 방법론은 다음과 같습니다. 정보에 입각한 동의를 얻은 후 인구 통계학적 데이터, HIV 감염 상태, 약리학적 데이터, 인체 측정 매개 변수 수집으로 환자의 기준선을 검사하고 진행합니다. 체지방 구성, 체지방 분포를 식별 및 정의하고 앞서 언급한 매개변수를 포함한 기본 분석을 수행하도록 설계된 보완 검사를 수행합니다. 또한 알코올 섭취, 신체 활동 및 병용 약물에 특별한 주의를 기울여 환자의 위생-식이 습관을 평가합니다. 이 절차는 지난 7일의 회고 일기를 작성하여 진행됩니다. 환자의 일일 칼로리 섭취량은 Nutrilogic ® 소프트웨어(Bio Logic, Barcelona, ​​España)에 의해 정량화됩니다. 신체 활동은 미네소타 척도(Elosua R, Marrugat J, Molina L, Pons S, The MARATHOM Investigators. 스페인 남성의 미네소타 여가 시간 신체 활동 설문지 검증. Am J Epidemiol 1994, 139: 1197-1209).

체지방 구성 및 체지방 분포: 다음과 같은 추가 테스트를 통해 수행됩니다.

Densitometry 또는 DEXA: Densitometry 장치(Lunar Prodigy, Madison, WI, USA)의 표준화된 검사 테이블에서 다리를 곧게 펴고 발을 모은 앙와위 자세의 환자와 함께 결정됩니다. 초기 연구에서는 연속 결정의 가변성을 줄이기 위해 후속 연구의 이미지로 복사 및 전송될 다른 영역의 더 많은 얼굴을 enerarán합니다. 체지방 측정, 체성분 및 이중 흡광도 측정 기술을 통한 골밀도 평가가 수행됩니다. 골밀도 및 가능한 골감소증 또는 골다공증.

Abdominal CT: 척추 디지털 방사선 촬영, 측면 보기, L4 위치 지정 및 척추체 중앙을 통과하는 단층 섹션을 가져와서 얻습니다. 그 후, 복부 지방과 피하지방의 디지털 계산이 이루어지며 관심 영역을 수동으로 선택합니다. 측정된 영역은 cm2 단위로 수행됩니다.

실험실 분석: 생화학적 측정을 위한 혈액 샘플은 첨가물 없이 10ml Vacutainer 튜브에서 채취됩니다. 혈액은 실온에서 30분 동안 응고되고 2500rpm에서 15분 동안 원심분리됩니다. 혈전에서 혈청을 분리한 후(약 4-5ml), 1.5ml(지질 연구용) 1개 분취량과 0.5ml 분취량 5-7개 분취량으로 나누어 -20°C에서 냉동 보관합니다. 생화학 분석이 수행됩니다.

혈장 지질, 포도당, 글리코실화 헤모글로빈, 인슐린 및 C-펩티드: 자동 자동 분석기 Hitachi 911에 적합한 자동 거래 방법(효소 비색법, Roche Diagnostics)을 사용하여 총 콜레스테롤 및 트리글리세리드 측정을 수행합니다. apolipoproteins AI, B 및 C-III, lipoprotein (a)의 결정은 자동 자동 분석기 Hitachi 911에 적합한 상업적 방법 (면역 탁도 분석, Roche Diagnostics 및 Wako Chemicals)을 중재합니다. 콜레스테롤 지단백 분획(Lipid, ELIP)(VLDL, LDL, HDL)의 결정은 하기 방법에 의해 수행될 것이다: 부양의 초원심분리에 의해 분리된 VLDL, 직접 방법(로슈 진단)에 의해 결정된 콜레스테롤 HDL 및 차이에 의해 결정된 콜레스테롤 LDL 총 콜레스테롤 및 VLDL 및 HDL 콜레스테롤 분율. 포도당: 자동 자동 분석기 Hitachi 747에 적합한 상업적 방법(enzyme colorimetry, Roche Diagnostics)에 의해. 혈청 인슐린 농도는 비경쟁 화학발광 효소 면역분석(Immulite 2000TM, Diagnostic Products Corp., Los Angeles, CA, USA)에 의해 결정됩니다. . C-펩티드의 혈청 농도는 비경쟁적 화학발광 효소 면역분석(Immulite 2000TM, Diagnostic Products Corp., Los Angeles, CA, USA)에 의해 결정된다.

LDL 입자의 크기 결정: 비변성 조건에서 아크릴아미드 구배 겔 전기영동을 사용하여 전체 혈장에서 LDL 입자의 크기를 결정합니다. 이전에 전자현미경으로 결정된 4개의 알려진 LDL 직경 밴드의 표준으로 사용됩니다.

혈장 내 지방산 측정: 가스 크로마토그래피로 혈장 지질의 지방산 조성을 측정하여 치료 순응도를 확증합니다. 혈장 총 지질은 클로로포름:메탄올(2:1, V:V)을 사용하여 Bligh 및 Dyer의 방법으로 추출됩니다. 지방산의 메틸 에스테르는 80°C에서 60분 동안 메탄올에서 삼불화붕소로 에스테르 교환 반응을 통해 얻을 수 있습니다. 이는 PUFA를 포함한 모든 지질 화합물의 높은 회수율을 허용합니다. 지방산의 메틸 에스테르를 포함하는 분취량은 가스 크로마토그래피 장치(Hewlett-Packard 모델 5890)를 사용하여 30m에서 분석됩니다. 불꽃 이온화 검출기가 장착된 내경 0.25mm의 RTX-2330 컬럼(Restek, Bellefonte, PA). 운반 가스는 105kPa 압력의 헬륨입니다. 서로 다른 화합물의 전체 분리를 위해 140°C-200°C에서 3°C/분 또는 140°C-180°C에서 4°C/분 및 180°의 두 단계의 두 가지 온도 설정을 제공했습니다. 2°C/min에서 C-210°C. 인젝터와 검출기의 온도는 260 °C입니다. 검출기의 선형 응답은 표준 혼합물로 주기적으로 테스트됩니다. 일반적으로 분자량이 다른 두 개의 내부 표준(13:0 및 23:0 또는 27:0)이 사용됩니다. Peaks는 적분기 D-2500(Hitachi Ltd., Tokyo)과 통합되고 표준과 머무름 시간을 비교하여 식별됩니다. 필요한 경우 이온화 포텐셜 70eV에서 질량 분석법(Hewlett-Packard 검출기 모델 5970B)으로 식별을 확인할 수 있습니다.

염증 마커 연구: 5ml EDTA 튜브에서 혈액을 채취합니다. 추출 후, 튜브를 원심분리하고 혈장을 에펜도르프 튜브에 수집하고 사이토카인이 결정될 때까지 -70°C에서 동결합니다. 혈장 샘플에서 TNF-알파, IL-1 베타 및 IL-6의 함량은 ELISA에 의해 측정될 것이다. 각 샘플은 상업적 공급업체의 사양에 따라 ELISA 키트 "R&D Systems"를 사용하여 이중으로 분석됩니다.

개입: 환자는 중앙 집중식 무작위 목록을 사용하여 두 치료 그룹(위약 및 DHA) 중 하나로 무작위 배정됩니다. 본 연구는 환자에게 투여된 활성 물질에 대해 환자나 의사 모두 알지 못하는 이중 맹검 시험 방법론에 따라 수행될 것이다. 무작위화 절차는 모듈 PROC PLAN SAS(버전 8.2)에 의해 생성된 무작위화 체계에 따라 2개의 블록의 배수로 센터별로 계층화된 1:1 패턴을 따라 전략을 할당하여 수행됩니다. 무작위 배정 목록은 위에서 언급한 대로 생성되며, 동일한 내용에서 일련 번호와 센터 이름으로 식별되는 봉인된 불투명 봉투가 발행됩니다. 봉투는 중앙 데이터 관리 및 분석 센터에 보관되며 전화 연락을 통해 중앙 집중식 무작위 할당의 조정자 역할을 합니다.

환자는 연구에 포함되고 특정 수집 데이터 노트북에 수집된 개인 데이터에 대해 평가됩니다. 정보에 입각한 동의 절차 후 환자가 연구에 포함되는 데 동의하는 경우 중앙 집중식 무작위 지정 센터에 연락합니다. 환자 데이터가 등록되면 봉투가 열리고 환자에게 할당된 전략이 조사자에게 보고됩니다. 절차는 봉투에 포함된 문서에 전사하고 중앙 무작위화 센터의 책임자가 이 등록부에 서명하고 날짜를 기입해야 합니다.

올레산(위약)과 캡슐당 500mg의 도코사헥사엔산을 함유한 동일한 외관의 캡슐을 미리 준비합니다. 캡슐은 보호 덮개로 코팅되어 있어 환자가 맛을 느낄 수 없습니다. DHA의 복용량은 매일 4g입니다. 같은 간격으로 위약 그룹의 환자는 매일 4g의 올레산을 섭취합니다.

데이터 수집: 환자의 데이터는 전적으로 환자 안내, 수행할 테스트 조정, 데이터베이스에 정보 기록을 전담하는 의사가 수집합니다. 데이터는 이전에 설계된 특정 수집 데이터 노트북에서 수집됩니다.

o 효과를 입증하는 데 필요한 참여자 수 또는 참여 연도를 지정하기 위한 표본 크기 평가.

샘플 크기 및 데이터 분석 추정:

주요 변수, 즉 추적 관찰 기간(48주) 종료 시 트리글리세리드 값의 최소 20% 감소에서 적극적인 치료에 유리한 차이를 공분산 분석에 의해 조정된 평균의 비교. 문헌 데이터(AIDS 1999, 13:1424-1425)와 일치하는 자체 데이터의 추정 표준 편차 86과 관련이 있는 것으로 미리 정의된 최소 효과의 크기(20% 감소)에 따르면 충분할 것입니다. 그룹당 약 29명의 평가 가능한 환자에게. 약 10%의 예상 손실, 즉 그룹당 33명의 피험자를 예상하여 더 많은 환자를 모집하기 위한 것입니다.

샘플 크기의 재추정:

가변성은 다른 상황의 데이터(전처리 기준 데이터)에서 추정되고 실험 상황(DHA 처리 후 가변성)에 대한 구체적인 데이터가 없기 때문에 샘플 크기의 재추정을 수행하도록 이 프로토콜에서 미리 정의됩니다. 트리글리세리드 값의 치료 4주 후 50%의 후속 조치를 언제 얻을 수 있습니까? 주요 변수의 이 객관적인 데이터에 대해 기준선 및 치료 후 4주 후의 트리글리세라이드 수치는 무작위 할당과 함께 코드를 마스킹하여 두 번째 독립적인 통계 그룹(Catalan Institute of Oncology, Department of Epidemiology and Cancer)에 제공됩니다. 등록. 통계학자: 빅터 모레노 박사) 본 연구의 중앙 통계 분석(LBE(생물 통계학 및 역학 연구소), 섹션 임상 시험, 바르셀로나 자치 대학. 통계학자: Ferran Torres 박사). 이 새 그룹은 분석을 수행하고 변동성 데이터만 표시하여 샘플 크기를 다시 계산합니다. 샘플 크기가 예상보다 작을 경우 초기 설계에 따라 유지됩니다. 어떠한 경우에도 유의성 테스트를 수행하지 않거나 변동성을 재추정하기 위해 연구가 조기에 중단되지 않습니다. 이 방법에 따르면 다중도를 조정할 필요가 없습니다.

o 데이터 불일치 또는 범위를 벗어난 결과로 인해 변수가 누락, 사용 불가능, "보고되지 않음", 해석 불가능 또는 누락으로 간주되는 상황을 해결하기 위해 누락 데이터 계획 누락 값 처리

치료 의향에 의한 주요 분석은 선택 기준에서 관련 편차가 없는 모든 대상체를 사용하는 것을 요구할 것이며, 연구 약물의 최소 1회 용량을 복용하고 주요 변수를 전향적으로 평가하는 대상을 추적 후 최소 3개월 동안 사용할 것을 요구합니다. 위로. 이러한 가정 하에서 1년 간의 후속 연구에서 측정이 이루어지지 않은 피험자를 찾을 것으로 예상됩니다. 따라서 다음과 같이 주 변수의 결측값 대치를 설정합니다.

• 데이터 부족이 효율성 문제로 인한 것이거나 원인을 알 수 없는 경우 연구 그룹에 대한 95% 백분위수 값으로 귀속됩니다.
• 다른 이유로 데이터가 누락된 경우 기준 측정 후 최소 3개월의 값을 사용할 수 있는 경우 LOCF(Last Observation Carried Forward) 방법을 구현합니다.

자세한 절차는 통계 보고서에 포함될 예정이며, 평가를 위해 익명 목록이 촉진되는 회의에서 데이터베이스를 닫기 전에 방법의 일관성을 평가할 예정입니다. 절차를 재평가할 수 있는 '블라인드 검토'( CPMP/EWP/1776/99: 누락된 데이터에 대한 고려 사항).

연구의 어려움과 한계:

수행되는 추가 검사로 인해 받게 될 환자의 수와 독특한 관리로 인해 연구가 복잡해질 수밖에 없습니다. 그러나 모든 환자와 수행된 모든 검사를 영구적으로 조정하는 의사가 있을 것입니다. 또한 연구팀은 각 연구원에 대한 구체적이고 시너지 기능으로 광범위합니다. 마지막으로, 연구자들은 통합된 그룹을 구성하고 유사한 요구 사항을 가진 이전 연구에 경험이 있습니다.

o 연구 계획서 또는 계획에 명시된 대로 1차 및 2차 목표를 다루기 위해 사용할 분석 원칙 및 통계 기법을 설명하는 통계 분석 계획.

통계분석 기술분석

변수의 특성에 따라 통계 보고서에 다음과 같은 설명 인덱스가 자세히 설명됩니다.

• 연속 변수: 평균, CI 95%, SD, 최소, P25, 중앙값, P75, 최대, N 및 누락. 그룹별 및 전 세계적으로.
• 범주형 변수: 열에 대한 총 %, 각 범주의 N. 그룹별 및 전 세계적으로.
• 순서형 변수: 두 개의 표로 설명됩니다. 하나는 연속 변수의 설명 매개변수가 있고 다른 하나는 범주형 변수가 있습니다.

열린 필드에서 또는 하나 이상의 변수에 대한 모든 사례를 나열하는 데 관심이 있는 경우 목록으로 설명됩니다.

추론 분석 1차 및 2차 효능 변수의 통계적 처리는 아래 섹션에서 구체적으로 설명될 것입니다. 다른 모든 변수의 경우 특성에 따라 적절한 가설 테스트가 적용됩니다. 범주형 변수에 대한 Fisher 정확 테스트, 연속 변수에 대한 Student t 테스트, 순서 변수에 대한 Mann-Whitney U 테스트.

그룹 간 기본 동질성 포함 시점의 인구통계학적 변수, 위험 요인 및 임상적 특성에 관한 치료 그룹의 기준선 비교 가능성에 대한 분석이 확립됩니다.

주요 효능 분석 효능의 주요 변수는 ANCOVA 모델을 사용하여 공변량으로 테스트의 기준 값을 사용하여 다른 치료의 기준선과 최종 값 간의 차이를 비교하여 평가됩니다. 조정된 평균은 ANCOVA 모델에 의해 95%(95%)의 신뢰 구간과 계산되었습니다. 효능의 주요 결정 기준으로서 두 치료군 사이의 연구 종점에서 조정된 평균 사이의 대조가 수행될 것이다. 추가로 그리고 탐색적 의도로서 서로 다른 관찰 시간에서 비교 효과를 평가해야 합니다. 이 두 번째 분석의 탐색적 특성으로 인해 다중도 조정은 이루어지지 않습니다.

파라메트릭 테스트에 따른 사례에서 관련 편차가 있는 경우 해당 변수 범위로의 변환을 사용하는 비모수적 접근 방식이 적용됩니다. 효능의 주요 분석은 치료하고자 하는 모집단을 대상으로 수행됩니다. 그러나 결과의 민감도 및 견고성에 대한 증거로 프로토콜 접근법에 따른 분석이 제공됩니다.

내약성 및 수용성 테스트 무작위 배정 및 치료를 받은 모든 환자가 안전성 분석에 포함됩니다. 피셔의 정확 테스트를 사용하여 두 그룹에서 부작용이 나타나는 빈도를 비교합니다.

유의 수준 제안된 모든 통계 테스트에서 요구되는 유의 수준은 통상적인 수준이어야 합니다(p < 0.05 양측). 중간 분석을 제외하고는 다중도 조정을 수행하기 위한 규정이 없습니다.