DHA 对 HAART 下 HIV 患者脂质和碳水化合物代谢改变和体脂分布的影响。

假设：DHA 治疗将能够至少部分地恢复与 HAART 相关的脂质紊乱，并改善或至少不会恶化与 HAART 相关的脂肪再分布，而不会引起树突细胞和单核细胞功能的进一步紊乱。

变量：DHA 治疗对总胆固醇及其组分、甘油三酯、胰岛素、纤维蛋白溶解标志物、肿瘤坏死因子 α (TNF-α) 的影响，以及通过人体测量、生物阻抗、超声检查、DEXA 和腹部 CT 评估的脂肪分布。 DHA 给药对树突状细胞和单核细胞表型和功能的影响。 目的：确定高剂量高纯度二十二碳六烯酸 (DHA) 治疗是否能够全部或部分恢复与高效抗逆转录病毒疗法 (HAART) 相关的脂质紊乱和脂肪再分布，以及对表型和功能的影响树突状细胞和单核细胞的数据分析：将分析基线数据以获得良好的平衡。 Fisher 精确检验将用于评估分类变量之间的差异，Student's t 检验用于连续变量，Mann-Whitney 检验用于有序变量。 使用以基线值作为协变量的 MANCOVA 模型，主要功效变量将是基线值和最终值之间的差异。 将在研究结束时通过对比两组治疗之间的调整方法来评估功效。 将使用意向治疗分析。

在将进行临床试验的中心执行的方法如下：在获得知情同意后，将通过收集人口统计数据、HIV 感染状况、药理学数据、人体测量参数来检查患者的基线，并将继续进行进行补充检查，旨在识别和定义身体脂肪成分、身体脂肪分布，并进行基础分析，包括前面提到的参数。 它还将评估患者的卫生饮食习惯，特别注意酒精摄入、身体活动和伴随用药。 该程序将通过制作最近 7 天的回顾日记来执行。 患者的每日热量摄入将通过 Nutrilogic ® 软件（Bio Logic，巴塞罗那，西班牙）进行量化。 体力活动将通过明尼苏达量表（Elosua R、Marrugat J、Molina L、Pons S、The MARATHOM Investigators）进行量化。 验证西班牙男性的明尼苏达休闲时间体育活动问卷。 Am J Epidemiol 1994, 139: 1197-1209)。

身体脂肪成分和身体脂肪分布：将通过以下附加测试完成：

密度测定法或 DEXA：患者仰卧，双腿伸直，双脚并拢，在标准检查台上使用密度测定仪（美国威斯康星州麦迪逊 Lunar Prodigy）进行测定。 在最初的研究中，enerarán 不同区域的更多面孔将被复制并转移到后续研究的图像中，以减少连续测定的可变性。 将通过双重吸收测定技术进行体脂测量、身体成分和骨矿物质密度评估。 将进行全身“扫描”（身体成分）或侧重于腰椎（小梁骨）和股骨近三分之一（皮质骨），以评估骨矿物质密度的最后两种情况和可能的骨质减少或骨质疏松症。

腹部 CT：将通过脊柱数字 X 线摄影、横向视图、定位 L4 并获得穿过椎体中心的断层扫描切片来获得。 随后，将对腹内脂肪和皮下脂肪进行数字计算，手动选择感兴趣的区域。 测量的面积将以 cm2 为单位。

实验室分析：用于生化测定的血液样本将在 10 毫升无添加剂的 Vacutainer 管中获得。 血液将在室温下凝固 30 分钟，并以 2500 rpm 的转速离心 15 分钟。 将血清与凝块（约 4-5 毫升）分离后，将分成 1 份 1.5 毫升（用于脂质研究）和 5-7 份 0.5 毫升等份，将其冷冻在 -20 °C 直到进行生化分析。

血脂、葡萄糖、糖化血红蛋白、胰岛素和 C 肽：总胆固醇和甘油三酯的测量将使用适用于自动分析仪 Hitachi 911 的自动交易方法（酶比色法，Roche Diagnostics）进行。 载脂蛋白 AI、B 和 C-III、脂蛋白 (a) 的测定将采用适用于自动自动分析仪 Hitachi 911 的商业方法（免疫比浊法、Roche Diagnostics 和 Wako Chemicals）。 胆固醇脂蛋白组分（Lipid、ELIP）（VLDL、LDL、HDL）的测定将通过以下方法进行：通过超速离心浮选法分离 VLDL，通过直接法（Roche Diagnostics）测定胆固醇 HDL，通过差异法测定胆固醇 LDL总胆固醇和极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白胆固醇分数。 葡萄糖：通过适用于自动自动分析仪 Hitachi 747 的商业方法（酶比色法，Roche Diagnostics）。血清胰岛素浓度将通过非竞争性化学发光酶免疫测定法（Immulite 2000TM，Diagnostic Products Corp.，Los Angeles，CA，USA）测定. C 肽的血清浓度通过非竞争性化学发光酶免疫测定法（Immulite 2000TM，Diagnostic Products Corp.，Los Angeles，CA，USA）测定。

确定 LDL 颗粒的大小：LDL 颗粒的大小将在非变性条件下使用丙烯酰胺梯度凝胶电泳从总血浆中确定。 将使用先前通过电子显微镜确定的四个已知 LDL 直径条带的标准。

血浆中脂肪酸的测定：治疗依从性将通过气相色谱测定血浆脂质的脂肪酸组成来证实。 血浆总脂质将通过Bligh和Dyer的方法用氯仿：甲醇（2:1，V:V）提取。 通过在甲醇中于 80 °C 下与三氟化硼进行酯交换反应 60 分钟，将获得脂肪酸甲酯。 这使得包括 PUFA 在内的所有脂质化合物都能得到高回收率。 含有脂肪酸甲酯的等分试样将在 30 米处用气相色谱仪（惠普 5890 型）进行分析。 RTX-2330 色谱柱（Restek，Bellefonte，PA），内径为 0.25 mm，配备火焰离子化检测器。 载气为压力为 105 kPa 的氦气。 为了完全分离不同的化合物，它提供了两个温度设置：140 °C-200 °C 至 3 °C/min 或在 140°C-180°C 至 4°C/min 和 180° 的两个阶段C-210°C，2°C/分钟。 进样器和检测器的温度为 260 °C。 将使用标准混合物定期测试检测器的线性响应。 通常，将使用两个具有不同分子量（13:0 和 23:0 或 27:0）的内标。 峰将与积分仪 D-2500（Hitachi Ltd.，Tokyo）积分，并通过将保留时间与标准进行比较来识别。 必要时，可以在 70 eV 的电离电位下通过质谱法（Hewlett-Packard 检测器型号 5970B）确认鉴定。

炎症标志物研究：将血液抽取到 5 ml EDTA 试管中。 提取后，将管离心，将血浆收集在eppendorf管中并冷冻在-70℃直至细胞因子测定。 血浆样品中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量将通过ELISA测定。 每个样品将按照商业供应商的规格使用 ELISA 试剂盒“R & D Systems”一式两份进行分析。

干预：患者将被随机分配到两个治疗组（安慰剂组和 DHA）中的一个，使用集中随机列表。 该研究将根据双盲试验方法进行，患者和医生都不知道给予患者的活性物质。 随机化程序将根据模块 PROC PLAN SAS（版本 8.2）在 2 个块的倍数中生成的随机化方案分配任一策略，并遵循按中心分层的 1:1 模式。 将根据上述生成随机分配列表，并从中发出一个密封的不透明信封，由序列号和中心名称标识。 信封应存放在中央数据管理和分析中心，该中心将通过电话联系作为集中随机分配的协调员。

将对患者进行评估以纳入研究，并将他们的个人数据收集在特定的收集数据笔记本中。 在知情同意程序之后，如果患者同意被纳入研究，将联系集中随机化分配中心。 登记患者数据后，将打开信封并将分配给患者的策略报告给研究者。 该程序应转录成包含在信封中的文件，由中央随机化中心的负责人在该登记册上签名并注明日期。

预先制备含有油酸（安慰剂）和二十二碳六烯酸且每个胶囊剂量为 500 毫克的具有相同外观的胶囊。 胶囊涂有保护层，使患者感觉不到它的味道。 DHA的剂量为每天4克。 在相同的时间间隔内，安慰剂组的患者将每天服用 4 克油酸。

数据收集：患者的数据将由专门负责指导患者、协调执行测试并将信息记录到数据库中的医生收集。 数据将收集在事先设计的特定收集数据笔记本中。

o 样本量评估，以指定证明效果所需的参与者人数或参与者年限。

估计样本量和数据分析：

预计能够在主要变量中显示有利于积极治疗的差异，即在随访期（48 周）结束时甘油三酯值至少减少 20%，在通过协方差分析调整的方法的比较。 根据我们自己数据的估计标准偏差 86，与文献数据（AIDS 1999, 13:1424-1425）一致，以及预定义为相关的最小效应量级（减少 20%），这就足够了每组约 29 名可评估患者。 它旨在招募更多的患者作为预测可能的预期损失约 10%，或者换句话说，每组 33 名受试者。

重新估计样本量：

由于变异性是根据其他情况的数据（治疗前基线数据）估计的，并且没有关于实验情况的具体数据（DHA 治疗后的变异性），因此在本协议中预定义要对样本量进行重新估计治疗 4 周后甘油三酯值何时会获得 50% 的跟进。 对于来自主要变量的客观数据，基线和治疗后 4 周后的甘油三酯水平，以及随机分配但屏蔽代码将提供给第二个独立统计组（加泰罗尼亚肿瘤研究所，流行病学和癌症系）登记。 统计学家：Victor Moreno 博士）尊重本研究的中央统计分析（生物统计学和流行病学实验室 (LBE)，巴塞罗那自治大学临床试验部。 统计学家：Ferran Torres 博士）。 这个新小组将执行分析，并且只会显示变异性数据以重新计算样本量。 如果样本量小于预期，将根据初始设计进行维护。 在任何情况下都不会进行显着性检验，或者过早停止研究以重新估计变异性。 根据这种方法，您不需要任何重数调整。

o 为缺失数据制定计划，以解决由于数据不一致或结果超出范围而导致变量被报告为缺失、不可用、“未报告”、无法解释或被认为缺失的情况 缺失值的处理

意向治疗的主要分析将需要使用与选择标准没有相关偏差的所有受试者，他们至少服用了一剂研究药物并且对主要变量进行了前瞻性评估，至少在接下来的三个月向上。 在此假设下，预计在为期 1 年的研究中会发现未进行测量的受试者。 因此提出主变量缺失值的插补如下：

• 如果缺乏数据是由于效率问题，或原因不明，则应归因于研究组的 95% 百分位值。
• 如果由于其他原因丢失数据，将实施 LOCF（上次观察结转）方法，前提是在其基线测量后至少三个月内提供可用的值。

详细程序将包含在统计报告中，并计划在关闭数据库之前评估方法的一致性，在会议上将促进匿名列表的评估“盲目审查”，其中可能会重新评估程序（ CPMP/EWP/1776/99：缺失数据的考虑点）。

研究的难点和局限性：

由于进行了额外的测试，患者的数量和他们将要进行的特殊管理使研究不可避免地变得复杂。 但是，将有一名医生永久协调所有患者和执行的所有测试。 此外，研究团队广泛，每个研究人员都有具体和协同的功能。 最后，研究人员组成了一个统一的小组，并且在以前的研究中有类似要求的经验。

o 统计分析计划描述了为解决研究方案或计划中指定的主要和次要目标而采用的分析原则和统计技术。

统计分析 描述性分析

统计报告将根据变量的性质详细说明如下描述性指标：

• 在连续变量中：平均值、CI 95%、SD、最小值、P25、中值、P75、最大值、N 和缺失。 每组和全球。
• 在分类变量中：相对于列的总计百分比，每个类别中的 N。 每组和全球。
• 在序数变量中：它们将用两个表来描述：一个是连续变量的描述性参数，另一个是分类变量。

在开放领域或有兴趣列出一个或多个变量的所有情况时，将通过列表进行描述。

推论分析主要和次要功效变量的统计处理将在下面的部分中具体描述。 对于所有其他变量，将根据其性质应用适当的假设检验：分类变量的 Fisher 精确检验，连续变量的 Student t 检验，序数变量的 Mann-Whitney U 检验。

组间基础同质性 将在纳入时建立关于人口统计学变量、风险因素和临床特征的治疗组基线可比性分析。

主要疗效分析 疗效的主要变量将通过使用 ANCOVA 模型比较不同治疗的基线和最终值之间的差异，以测试的基线值作为协变量来评估。 通过 ANCOVA 模型计算调整后的均值和 95% (95%) 的置信区间。 作为疗效的主要决定标准，将在两个治疗组之间的研究终点进行调整平均值之间的对比。 此外，作为探索性目的，应评估不同观察时间的比较效果。 由于第二次分析的探索性，将不会进行多重性调整。

如果根据参数测试在案例中出现相关偏差，将应用非参数方法，使用对相应变量范围的转换。 疗效的主要分析将针对预期治疗的人群进行。 然而，作为结果的敏感性和稳健性的证据，将提供协议方法下的分析。

耐受性和可接受性测试 所有已随机化和接受治疗的患者都将纳入安全性分析。 将使用 Fisher 精确检验比较两组中不良事件的出现频率。

显着性水平 在所有提议的统计测试中，所需的显着性水平应为常规水平（p < 0.05 双侧）。 除中间分析外，没有规定执行任何多重性调整。