HAART下のHIV患者における脂質および炭水化物の代謝変化および体脂肪分布に対するDHAの影響。

仮説：DHA治療は、樹状細胞や単球の機能能力にさらなる障害を引き起こすことなく、HAARTに関連する脂質障害を少なくとも部分的に元に戻し、HAARTに関連する脂肪再分布を改善または少なくとも悪化させないことができるだろう。

変数: 総コレステロールとその画分、トリグリセリド、インスリン、線溶マーカー、腫瘍壊死因子アルファ (TNF-α)、および人体計測、生体インピーダンス、超音波検査、DEXA、腹部 CT によって評価された脂肪分布に対する DHA 治療の効果。 樹状細胞および単核細胞の表現型および機能的能力に対する DHA 投与の影響。 目的: 高用量の高純度ドコサヘキサン酸 (DHA) による治療が、高活性抗レトロウイルス療法 (HAART) に伴う脂質障害と脂肪再分布、および表現型と機能への影響を完全または部分的に元に戻すことができるかどうかを確認すること樹状細胞と単球のデータ解析：ベースラインデータをバランスよく解析します。 フィッシャーの直接確率検定はカテゴリ変数間の差異を評価するために使用され、連続変数についてはスチューデントの t 検定が、順序変数についてはマン-ホイットニー検定が使用されます。 主な有効性変数は、ベースライン値を共変数として取る MANCOVA モデルを使用したベースライン値と最終値の差になります。 有効性は、研究終了時に両群の治療群間で調整された平均値を対比することによって評価されます。 治療意図分析が使用されます。

臨床試験が実施されるセンターで実施される方法論は次のとおりです。 インフォームド・コンセントを得た後、人口統計データ、HIV 感染状況、薬理学的データ、人体計測パラメータの収集により患者のベースラインが検査され、臨床試験が進められます。体脂肪組成、体脂肪分布を特定して定義し、前述のパラメーターを含む基礎分析を実行するために設計された補足検査を実施します。 また、アルコール摂取量、身体活動、併用薬に特に注意を払って、患者の衛生的・食習慣も評価されます。 この手順は、過去 7 日間の遡及日記を作成することによって実行されます。 患者の毎日のカロリー摂取量は、Nutrilogic® ソフトウェア (Bio Logic、スペイン、バルセロナ) によって定量化されます。 身体活動はミネソタスケール (Elosua R、Marrugat J、Molina L、Pons S、The MARATHOM Investigators) によって定量化されます。 スペイン人男性を対象としたミネソタ州の余暇身体活動アンケートの検証。 Am J Epidemiol 1994、139: 1197-1209)。

体脂肪組成と体脂肪分布: 以下の追加検査が行われます。

濃度測定または DEXA: 患者が仰臥位で両足を揃え、標準化された検査台上で濃度測定装置 (Lunar Prodigy、マディソン、ウィスコンシン州、米国) を使用して測定されます。 最初の研究では、さまざまな領域のより多くの顔を作成し、それを後続の研究の画像にコピーして転送し、連続する決定のばらつきを減らします。 二重吸光度測定法による体脂肪測定、体組成、骨密度の評価が行われます。 最後の 2 つのケースにおける骨塩密度および骨減少症の可能性を評価するために、全身の「スキャン」（体組成）が実行されるか、または腰椎（海綿骨）と大腿骨の近位 3 分の 1（皮質骨）に焦点が当てられます。骨粗鬆症。

腹部CT: 脊椎デジタルX線撮影、側方側面図を実行し、L4の位置を特定し、椎体の中心を通る断層撮影断面を取得することによって取得されます。 その後、腹腔内脂肪と皮下脂肪がデジタル計算され、対象領域を手動で選択します。 測定面積はcm2単位で測定されます。

研究室分析: 生化学的測定のための血液サンプルは、添加剤なしで 10 ml のバキュテイナーチューブに採取されます。 血液は室温で 30 分間凝固され、2500 rpm で 15 分間遠心分離されます。 血清を血餅（約 4 ～ 5 ml）から分離した後、1.5 ml の 1 アリコート（脂質の研究用）と 0.5 ml のアリコート 5 ～ 7 に分割し、-20 °C で保存します。生化学的分析が行われます。

血漿脂質、グルコース、グリコシル化ヘモグロビン、インスリンおよびC-ペプチド：総コレステロールおよびトリグリセリドの測定は、自動自動分析装置Hitachi 911に適合した自動取引方法（酵素比色分析、Roche Diagnostics）を使用して実行されます。 アポリポタンパク質 AI、B および C-III、リポタンパク質 (a) の測定は、自動自動分析装置 Hitachi 911 に適合した市販の方法 (免疫比濁分析、Roche Diagnostics および Wako Chemicals) を介して行われます。 コレステロール リポタンパク質画分 (脂質、ELIP) (VLDL、LDL、HDL) の測定は、次の方法で実行されます: 浮遊選別の超遠心分離によって分離された VLDL、直接法 (Roche Diagnostics) によって測定されたコレステロール HDL、および差異によって測定されたコレステロール LDL総コレステロール、VLDL および HDL コレステロール画分。 グルコース: 自動自動分析装置 Hitachi 747 に適合した市販の方法 (酵素比色分析、Roche Diagnostics) による。血清インスリン濃度は、非競合的化学発光酵素免疫測定法 (Immulite 2000TM、Diagnostic Products Corp.、ロサンゼルス、カリフォルニア州、米国) によって測定されます。 。 C ペプチドの血清濃度は、非競合化学発光酵素免疫測定法 (Immulite 2000TM、Diagnostic Products Corp.、ロサンゼルス、カリフォルニア州、米国) によって測定されます。

LDL 粒子のサイズの決定: LDL 粒子のサイズは、非変性条件下でアクリルアミド勾配ゲル電気泳動を使用して全血漿から決定されます。 電子顕微鏡によって事前に決定された、4 つの既知の LDL 直径バンドの標準が使用されます。

血漿中の脂肪酸の測定: 治療遵守は、ガスクロマトグラフィーによって血漿脂質の脂肪酸組成を測定することによって裏付けられます。 血漿総脂質は、クロロホルム:メタノール (2:1、V:V) を使用する Bligh and Dyer の方法によって抽出されます。 脂肪酸のメチルエステルは、メタノール中で 80 °C で 60 分間、三フッ化ホウ素を用いてエステル交換反応を行うことによって得られます。 これにより、PUFA を含むすべての脂質化合物の高回収が可能になります。 脂肪酸のメチルエステルを含むアリコートを、ガスクロマトグラフィー装置（Hewlett-Packard モデル 5890）を用いて 30 メートルで分析します。炎イオン化検出器を備えた内径 0.25 mm の RTX-2330 カラム (Restek、ペンシルベニア州ベルフォンテ)。 キャリアガスは、圧力 105 kPa のヘリウムになります。 異なる化合物を完全に分離するために、2 つの温度設定が用意されています: 140 °C ～ 200 °C から 3 °C/分、または 140 °C ～ 180 °C から 4 °C/分と 180°C の 2 段階2℃/分でC～210℃。 インジェクターと検出器の温度は 260 °C です。 検出器の線形応答は、標準混合物を使用して定期的にテストされます。 通常、分子量の異なる 2 つの内部標準 (13:0 と 23:0 または 27:0) が使用されます。 ピークはインテグレーター D-2500 (株式会社日立製作所、東京) で統合され、標準との保持時間の比較によって識別されます。 必要に応じて、イオン化ポテンシャル 70 eV での質量分析 (Hewlett-Packard 検出器モデル 5970B) によって同定を確認することができます。

炎症マーカーの研究: 血液を 5 ml EDTA チューブに採取します。 抽出後、チューブを遠心分離し、血漿をエッペンドルフチューブに収集し、サイトカインを測定するまで-70℃で凍結します。 血漿サンプル中の TNF-α、IL-1 β、および IL-6 の含有量は ELISA によって測定されます。 各サンプルは、商業供給者の仕様に従って、ELISA キット「R & D Systems」を使用して 2 回分析されます。

介入: 集中化されたランダム化リストを使用して、患者は 2 つの治療グループ (プラセボと DHA) のいずれかにランダム化されます。 この研究は、患者も医師も患者に投与された活性物質を知らない二重盲検試験方法論に従って実施されます。 ランダム化手順は、モジュール PROC PLAN SAS (バージョン 8.2) によって生成された 2 ブロックの倍数のランダム化スキームに従って、いずれかの戦略を割り当てて、センターごとに階層化された 1:1 のパターンに従って実行されます。 上記に従ってランダムな割り当てのリストが生成され、そこから連番とセンター名で識別される密封された不透明な封筒が発行されます。 封筒は中央データ管理および分析センターに預けられ、電話連絡による集中ランダム化割り当てのコーディネーターとして機能します。

患者は研究に参加するために評価され、患者の個人データは特定の収集データノートブックに収集されます。 インフォームドコンセント手順の後、患者が研究に参加することに同意した場合は、集中ランダム化割り当てセンターに連絡されます。 患者データが登録されると、封筒が開かれ、患者に割り当てられた戦略が研究者に報告されます。 この手順は、中央無作為化センターの責任者がこの登録簿に署名し、日付を記入して封筒に入っている文書に転写されます。

オレイン酸（プラセボ）とドコサヘキサエン酸を１カプセル当たり５００ｍｇ含有する同一の外観のカプセルを予め調製する。 カプセルは保護カバーで覆われているため、患者には味が感じられません。 DHAの摂取量は1日あたり4gとなります。 同じ間隔で、プラセボ群の患者は毎日 4 g のオレイン酸を摂取します。

データ収集: 患者のデータは、患者の指導、実施する検査の調整、データベースへの情報の記録に専念する医師によって収集されます。 データは、事前に設計された特定の収集データ ノートブックに収集されます。

o 効果を実証するために必要な参加者数または参加年数を特定するためのサンプルサイズの評価。

サンプルサイズの推定とデータ分析:

主な変数における積極的治療に有利な差、すなわち追跡期間（48週間）終了時のトリグリセリド値の少なくとも20％の大きさの減少を示すことができることが期待されています。共分散分析によって調整された平均値の比較。 文献データ (AIDS 1999, 13:1424-1425) と一致する、私たち自身のデータからの推定標準偏差 86 と、関連するものとして事前に定義された最小効果の大きさ (20% 削減) によると、十分であると考えられます。 1グループあたり約29人の評価可能な患者を対象とした。 約 10% の予想損失の可能性を予測して、より多くの患者を募集すること、つまり 1 グループあたり 33 人の被験者を募集することを目的としています。

サンプルサイズの再推定:

変動は他の状況からのデータ (治療前のベースライン データ) から推定され、実験状況 (DHA 治療後の変動) に関する具体的なデータがないため、このプロトコルではサンプル サイズの再推定を実行することが事前に定義されています。 4 週間の治療後のトリグリセリド値の 50% の追跡調査はいつ得られます。 この客観的なデータに対して、ベースラインおよび治療後 4 週間後の主な変数であるトリグリセリド レベルと、ランダムな割り当てとともにコードをマスキングしたデータが、第 2 の独立した統計グループ (カタルーニャ腫瘍研究所、疫学および癌部門) に提供されます。登録。 統計学者: Victor Moreno 博士) この研究の中心的な統計分析 (バルセロナ自治大学、生物統計および疫学研究室 (LBE)、臨床試験部門) に敬意を表します。 統計学者: フェラン・トーレス博士)。 この新しいグループは分析を実行し、サンプル サイズを再計算するための変動データのみを明らかにします。 サンプル サイズが予想よりも小さかった場合は、最初の設計に従って維持されます。 いかなる状況においても、ばらつきを再推定するために有意性検定が実行されたり、二次的に研究が途中で中止されたりすることはありません。 この方法によれば、多重度の調整は必要ありません。

o データの不整合や範囲外の結果により、変数が欠落、利用不可、「報告されていない」、解釈不能、または欠落しているとみなされる状況に対処するために、欠損データを計画します。 欠損値の処理

治療意図による主な分析では、選択基準からの関連逸脱がなく、治験薬を少なくとも1回服用し、少なくともその後3か月以内に主な変数を前向きに評価しているすべての被験者を使用する必要があります。上。 この仮定の下では、1年間の追跡調査で測定が行われていない被験者が見つかることが予想されます。 したがって、主変数の欠損値の代入は次のように設定されます。

• データの欠如が効率の問題によるものである場合、または原因が不明な場合は、研究グループの 95% パーセンタイル値に帰するものとします。
• 他の理由でデータが欠落している場合は、ベースライン測定から少なくとも 3 か月後の値が利用可能であれば、LOCF (Last Observation Carried Forward) 法が実行されます。

詳細な手順は統計報告書に含まれ、手順が再評価される可能性がある「ブラインドレビュー」の評価のために匿名のリストが促進される会議でデータベースを閉じる前に、方法の一貫性を評価することが計画されています（ CPMP/EWP/1776/99: 欠損データに関する考慮事項)。

研究の難しさと限界:

追加の検査が行われるため、患者の数と特殊な管理が必要となり、研究は必然的に複雑になります。 ただし、すべての患者と実施されるすべての検査を恒久的に調整する医師が存在します。 また、研究チームは幅広く、各研究者が具体的かつ相乗的に機能します。 最後に、研究者は統合グループを構成しており、同様の要件を伴う以前の研究の経験があります。

o 研究計画書または計画で指定されているように、一次および二次目的に対処するために使用される分析原理と統計手法を説明する統計分析計画。

統計的分析 記述的分析

統計レポートでは、変数の性質に応じて、次の記述指標が詳細に説明されます。

• 連続変数の場合: 平均、CI 95%、SD、最小、P25、中央値、P75、最大、N、欠損。 グループごと、そしてグローバル。
• カテゴリ変数の場合: 列に関する合計の % (各カテゴリの N)。 グループごと、そしてグローバル。
• 順序変数の場合: 順序変数は 2 つのテーブルで説明されます。1 つは連続変数の記述パラメーター、もう 1 つはカテゴリ変数です。

オープンフィールド、または 1 つ以上の変数のすべてのケースをリストしたい場合は、リストによって説明されます。

推論分析 一次有効性変数と二次有効性変数の統計的処理については、以下のセクションで具体的に説明します。 他のすべての変数については、その性質に応じて適切な仮説検定が適用されます。カテゴリ変数の場合はフィッシャーの直接確率検定、連続変数の場合はスチューデント t 検定、順序変数の場合はマン-ホイットニー U 検定です。

グループ間の基礎的均一性 治療グループのベースラインの比較可能性の分析は、参加時の人口統計学的変数、危険因子、および臨床的特徴に関して確立されます。

主な有効性分析 有効性の主な変数は、ANCOVA モデルを使用し、共変量としてのテストのベースライン値を使用して、さまざまな治療のベースライン値と最終値の差を比較することによって評価されます。 調整平均は、ANCOVA モデルによって 95% (95%) で信頼区間が計算されました。 有効性の主な判断基準として、2 つの治療グループ間の研究のエンドポイントにおける調整された平均値間の対比が実行されます。 さらに、探索的な目的として、異なる観察時点での効果の比較を評価するものとします。 この 2 番目の分析は探索的な性質があるため、多重度の調整は行われません。

パラメトリックテストに従ったケースに関連する逸脱がある場合、対応する変数の範囲への変換を使用するノンパラメトリックアプローチが適用されます。 有効性の主な分析は、治療対象の集団を対象に行われます。 ただし、結果の感度と堅牢性の証拠として、プロトコル アプローチに基づく分析が提供されます。

忍容性および受容性試験 無作為化され治療を受けたすべての患者が安全性分析に含まれます。 2 つのグループにおける有害事象の出現頻度は、フィッシャーの直接確率検定を使用して比較されます。

有意水準 提案されているすべての統計的検定において、必要とされる有意水準は従来のものとします (p < 0.05 両側)。 中間分析を除き、多重度調整を実行するための準備は行われていません。