DHA:n vaikutus lipidi- ja hiilihydraattiaineenvaihdunnan muutoksiin ja kehon rasvan jakautumiseen HAART-potilailla.

Hypoteesi: DHA-hoito pystyisi palauttamaan ainakin osittain HAART:iin liittyvät lipidihäiriöt ja parantamaan tai ainakin ei pahentamaan HAART:iin liittyvää rasvan uudelleenjakautumista aiheuttamatta lisähäiriöitä dendriittisoluissa ja monosyyttien toimintakyvyssä.

Muuttujat: DHA-hoidon vaikutukset kokonaiskolesteroliin ja sen fraktioihin, triglyserideihin, insuliiniin, fibrinolyysimarkkereihin, tuumorinekroositekijä alfa (TNF-α) ja rasvan jakautumiseen antropometrisilla mittauksilla, bioimpedanssilla, sonografialla, DEXA:lla ja vatsan CT:llä. DHA:n antamisen vaikutukset dendriitti- ja mononukleaaristen solujen fenotyyppiin ja toiminnallisiin kykyihin. Tavoite: Selvittää, pystyykö hoito suurilla annoksilla erittäin puhdistettua dokosaheksaanihappoa (DHA) korjaamaan kokonaan tai osittain erittäin aktiiviseen antiretroviraaliseen hoitoon (HAART) liittyvät lipidihäiriöt ja rasvan uudelleenjakautumista sekä vaikutuksia fenotyyppiin ja toimintaan. dendriittisoluista ja monosyytteistä Tietojen analyysi: Perustiedot analysoidaan hyvän tasapainon varmistamiseksi. Kategoristen muuttujien erojen arvioimiseen käytetään Fisherin eksaktia testiä, jatkuvien muuttujien Studentin t-testiä ja järjestysmuuttujien Mann-Whitney-testiä. Pääasiallinen tehokkuusmuuttuja on erot lähtötason ja lopullisten arvojen välillä käyttäen MANCOVA-mallia, jossa perusarvo on komuuttuja. Tehoa arvioidaan vertaamalla sovitettuja keskiarvoja tutkimuksen lopussa molempien hoitoryhmien välillä. Aikomusta käsitellä analyysiä käytetään.

Keskuksissa, joissa kliininen polku suoritetaan, suoritettavat menetelmät ovat seuraavat: Tietoon perustuvan suostumuksen saatuaan potilaan lähtötilanne tutkitaan keräämällä demografisia tietoja, HIV-infektiosta, farmakologisia tietoja, antropometrisiä parametreja ja etenee. suorittaa täydentävän tutkimuksen, jonka tarkoituksena on tunnistaa ja määritellä kehon rasvakoostumus, kehon rasvan jakautuminen ja suorittaa perusanalyysi, joka sisältää edellä mainitut parametrit. Lisäksi arvioidaan potilaan hygienia-ruokavaliotapoja kiinnittäen erityistä huomiota alkoholin nauttimiseen, fyysiseen aktiivisuuteen ja samanaikaiseen lääkitykseen. Tämä toimenpide suoritetaan tekemällä takautuvasti päiväkirjoja viimeisen 7 päivän ajalta. Nutrilogic ® -ohjelmisto (Bio Logic, Barcelona, ​​España) määrittää potilaan päivittäisen kalorinsaannin. Fyysinen aktiivisuus mitataan Minnesotan asteikolla (Elosua R, Marrugat J, Molina L, Pons S, MARATHOM Investigators. Minnesotan vapaa-ajan fyysistä aktiivisuutta koskevan kyselylomakkeen validointi espanjalaisilla miehillä. Am J Epidemiol 1994, 139: 1197-1209).

Kehon rasvan koostumus ja rasvan jakautuminen: tehdään seuraavilla lisätesteillä:

Densitometria tai DEXA: Määritetään potilaan ollessa makuuasennossa jalat suorina ja jalat yhdessä, standardoidulla tutkimuspöydällä densitometrialaitteella (Lunar Prodigy, Madison, WI, USA). Ensimmäisessä tutkimuksessa enerarán eri alueiden enemmän kasvoja kopioidaan ja siirretään myöhempien tutkimusten kuviin peräkkäisten määritysten vaihtelun vähentämiseksi. Suoritetaan kehon rasvan mittaus, kehon koostumus ja luun mineraalitiheyden arviointi kaksoisabsorptiometriatekniikalla. Tehdään koko kehon "skannaus" (kehon koostumus) tai se keskittyy lannerangaan (trabekulaariluun) ja reisiluun proksimaaliseen kolmannekseen (kortikaaliseen luuhun) luun mineraalitiheyden ja mahdollisen osteopenian tai osteopenian arvioimiseksi. osteoporoosi.

Vatsan CT: Saadaan tekemällä selkärangan digitaalinen röntgenkuvaus, lateraalinen lateraalikuvaus, paikallistamalla L4 ja ottamalla tomografinen leike, joka kulkee nikaman keskustan läpi. Myöhemmin suoritetaan digitaalinen laskenta vatsansisäisestä rasvasta ja ihonalaisesta rasvasta ja valitaan manuaalisesti kiinnostava alue. Mitatut pinta-alat tehdään cm2.

Laboratorioanalyysi: Verinäytteet biokemiallisia määrityksiä varten otetaan 10 ml:n Vacutainer-putkissa ilman lisäaineita. Veri hyytyy huoneenlämmössä 30 minuuttia ja sentrifugoidaan nopeudella 2500 rpm 15 minuuttia. Kun seerumi on erotettu hyytymisestä (noin 4-5 ml), se jaetaan 1,5 ml:n alikvootiksi (lipidien tutkimista varten) ja 5-7 0,5 ml:n alikvootiksi, jotka pakastetaan -20 °C:ssa, kunnes biokemiallinen analyysi suoritetaan.

Plasman lipidit, glukoosi, glykosyloitu hemoglobiini, insuliini ja C-peptidi: kokonaiskolesterolin ja triglyseridien mittaukset suoritetaan automaattisilla kaupankäyntimenetelmillä (entsyymikolorimetria, Roche Diagnostics), jotka on mukautettu automaattiseen autoanalysaattoriin Hitachi 911. Apolipoproteiinit AI, B ja C-III, lipoproteiini (a) määritetään kaupallisilla menetelmillä (immunoturbidimetrinen määritys, Roche Diagnostics ja Wako Chemicals), jotka on sovitettu automaattiseen autoanalysaattoriin Hitachi 911. Kolesterolin lipoproteiinifraktioiden (Lipidi, ELIP) (VLDL, LDL, HDL) määritys suoritetaan seuraavilla menetelmillä: vaahdotuksella ultrasentrifugoimalla erotettu VLDL, suoralla menetelmällä määritetty kolesterolin HDL (Roche Diagnostics) ja kolesterolin LDL erotuksena määritettynä. kokonaiskolesteroli- ja VLDL- ja HDL-kolesterolifraktioissa. Glukoosi: kaupallisella menetelmällä (entsyymikolorimetria, Roche Diagnostics), joka on sovitettu automaattiseen autoanalysaattoriin Hitachi 747. Seerumin insuliinipitoisuus määritetään ei-kilpailevalla kemiluminesenssientsyymi-immunomäärityksellä (Immulite 2000TM, Diagnostic Products Corp., Los Angeles, CA, USA) . C-peptidin seerumin pitoisuus määritetään ei-kilpailevalla kemiluminesenssientsyymi-immunomäärityksellä (Immulite 2000TM, Diagnostic Products Corp., Los Angeles, CA, USA).

LDL-partikkelien koon määrittäminen: LDL-partikkelien koko määritetään kokonaisplasmasta käyttämällä akryyliamidigradienttigeelielektroforeesia ei-denaturoivissa olosuhteissa. Käytetään neljän tunnetun LDL-halkaisijakaistan standardia, jotka on määritetty aiemmin elektronimikroskopialla.

Rasvahappojen määrittäminen plasmassa: Hoidon noudattaminen vahvistetaan määrittämällä plasman lipidien rasvahappokoostumus kaasukromatografialla. Plasman kokonaislipidit uutetaan Blighin ja Dyerin menetelmällä kloroformi:metanolilla (2:1, tilavuus:tilavuus). Rasvahappojen metyyliesterit saadaan transesteröimällä booritrifluoridilla metanolissa 80 °C:ssa 60 minuutin ajan. joka mahdollistaa kaikkien lipidiyhdisteiden, mukaan lukien PUFA:iden, suuren talteenoton. Rasvahappojen metyyliestereitä sisältävä alikvootti analysoidaan kaasukromatografialaitteella (Hewlett-Packard malli 5890) 30 m:llä. RTX-2330-kolonni (Restek, Bellefonte, PA), jonka sisähalkaisija on 0,25 mm ja varustettu liekki-ionisaatioilmaisimella. Kantokaasu on heliumia, jonka paine on 105 kPa. Eri yhdisteiden täydelliseen erottamiseen siinä on kaksi lämpötila-asetusta: 140 °C-200 °C - 3 °C/min tai kahdessa vaiheessa 140 °C-180 °C - 4 °C/min ja 180 °. C-210 °C nopeudella 2 °C/min. Injektorin ja anturin lämpötila on 260 °C. Ilmaisimen lineaarinen vaste testataan säännöllisesti standardiseoksilla. Tyypillisesti käytetään kahta sisäistä standardia, joilla on eri molekyylipaino (13:0 ja 23:0 tai 27:0). Huiput integroidaan integraattoriin D-2500 (Hitachi Ltd., Tokio) ja tunnistetaan vertaamalla retentioaikoja standardeihin. Tarvittaessa tunnistus voidaan vahvistaa massaspektrometrialla (Hewlett-Packard-detektorimalli 5970B) ionisaatiopotentiaalilla 70 eV.

Tulehdusmarkkerien tutkimus: veri otetaan 5 ml:n EDTA-putkeen. Uuton jälkeen putki sentrifugoidaan ja plasma kerätään eppendorf-putkiin ja jäädytetään -70 °C:ssa sytokiinien määritykseen asti. TNF-alfan, IL-1 beetan ja IL-6:n pitoisuus plasmanäytteissä mitataan ELISA:lla. Jokainen näyte analysoidaan kahtena rinnakkaisena käyttämällä ELISA-sarjoja "R & D Systems" kaupallisen toimittajan ohjeiden mukaisesti.

Interventio: Potilaat satunnaistetaan yhteen kahdesta hoitoryhmästä (plasebo ja DHA) käyttämällä keskitettyä satunnaistuslistaa. Tutkimus suoritetaan kaksoissokkotutkimuksen metodologialla, jossa potilas tai lääkäri eivät ole tietämättömiä potilaille annetusta vaikuttavasta aineesta. Satunnaistamismenettely suoritetaan määrittämällä jompikumpi strategia PROC PLAN SAS -moduulin (versio 8.2) generoiman satunnaistusmenettelyn mukaisesti kahdessa lohkossa ja seuraamalla kaavaa 1:1, joka on kerrostettu keskustan mukaan. Edellä mainitun mukaisesti laaditaan satunnaisten toimeksiantojen luettelo, josta jaetaan sinetöity läpinäkymätön kirjekuori, joka on merkitty järjestysnumerolla ja keskuksen nimellä. Kirjekuoret talletetaan keskitetyn tiedonhallinnan ja -analyysin keskukseen, joka toimii keskitetyn satunnaistehtävän koordinaattorina puhelimitse.

Potilaiden osallistuminen tutkimukseen arvioidaan ja heidän henkilötiedot kerätään erityiseen keräystietomuistioon. Tietoisen suostumusmenettelyn jälkeen ja jos potilas suostuu tutkimukseen, otetaan yhteyttä keskitettyyn satunnaistuskeskukseen. Kun potilastiedot rekisteröidään, kirjekuori avataan ja potilaalle määrätty strategia raportoidaan tutkijalle. Menettely on kopioitava kirjekuoreen sisältyväksi asiakirjaksi, joka allekirjoittaa ja päivätään tähän rekisteriin keskussatunnaistuskeskuksen vastuuhenkilö.

Ulkonäöltään identtiset kapselit, jotka sisältävät öljyhappoa (plaseboa) ja dokosaheksaeenihappoa annoksina 500 mg kapselia kohti, valmistetaan aiemmin. Kapselit on päällystetty suojakuorella, jonka ansiosta potilas ei huomaa sen makua. DHA:n annos on 4 g päivässä. Samoin väliajoin lumelääkeryhmän potilaat ottavat 4 g öljyhappoa päivässä.

Tiedonkeruu: Potilastiedot kerää lääkäri, joka on kokonaan omistautunut potilaiden ohjaamiseen, suoritettavien testien koordinointiin ja tietojen tallentamiseen tietokantaan. Tiedot kerätään aiemmin suunniteltuun erityiseen keräystietomuistikirjaan.

o Otoskoon arviointi, jolla määritellään vaikutuksen osoittamiseen tarvittava osallistujien lukumäärä tai osallistumisvuodet.

Otoskoon arvioiminen ja data-analyysi:

Sen odotetaan pystyvän osoittamaan eroa aktiivisen hoidon eduksi päämuuttujassa, nimittäin triglyseridiarvojen alenemisessa seurantajakson (48 viikkoa) lopussa vähintään 20 prosentilla. keskiarvojen vertailu kovarianssianalyysillä. Arvioidun 86:n standardipoikkeaman omista tiedoistamme, jotka ovat yhdenmukaisia ​​kirjallisuustietojen kanssa (AIDS 1999, 13:1424-1425), ja ennalta määritellyn merkityksellisen vähimmäisvaikutuksen suuruuden (20 %:n vähennys) mukaan se riittäisi. noin 29 arvioitavalle potilaalle ryhmää kohden. Tarkoituksena on rekrytoida lisää potilaita ennusteen mukaan mahdollisista noin 10 %:n odotettavissa olevista menetyksistä eli 33 koehenkilöä ryhmää kohden.

Otoskoon uudelleenarviointi:

Koska vaihtelu on arvioitu muista tilanteista saaduista tiedoista (esikäsittelyn perustiedot), eikä kokeellisesta tilanteesta ole konkreettista tietoa (vaihtelu DHA-hoidon jälkeen), tässä protokollassa on ennalta määritetty näytteen koon uudelleenarviointi. milloin saadaan 50 %:n seuranta 4 viikon hoidon jälkeen triglyseridiarvoista. Tätä objektiivista tietoa päämuuttujasta, triglyseriditasoista lähtötilanteessa ja 4 viikon hoidon jälkeen, sekä satunnaismäärittelyä mutta koodit peittämällä toimitetaan toiselle riippumattomalle tilastoryhmälle (Katalaanien onkologian instituutti, epidemiologian ja syövän osasto Rekisteröinti. Tilastomies: Dr. Victor Moreno) tämän tutkimuksen keskeisen tilastollisen analyysin osalta (Biostatistiikan ja epidemiologian laboratorio (LBE), Kliiniset tutkimukset -osasto, Barcelonan autonominen yliopisto. Tilastomies: tohtori Ferran Torres). Tämä uusi ryhmä suorittaa analyysin ja paljastaa vain vaihtelutiedot otoskoon uudelleen laskemiseksi. Jos otoskoko on odotettua pienempi, se säilytetään alkuperäisen suunnitelman mukaisesti. Merkitystestejä ei missään tapauksessa tehdä tai tutkimusta keskeytetään ennenaikaisesti toissijaisesti vaihtelevuuden arvioimiseksi uudelleen. Tämän menetelmän mukaan sinun ei tarvitse säätää monikertaisuutta.

o Suunnittele puuttuvien tietojen puuttuminen tilanteisiin, joissa muuttujat ilmoitetaan puuttuviksi, ei-saatavilla, "ei-raportoiduiksi", tulkittamattomiksi tai niiden katsotaan puuttuvan tietojen epäjohdonmukaisuuden tai vaihteluvälin ulkopuolisten tulosten vuoksi. Puuttuvien arvojen käsittely

Hoitoaikeellisessa pääanalyysissä on käytettävä kaikkia koehenkilöitä, joilla ei ole olennaisia ​​poikkeamia valintakriteereistä, jotka ovat ottaneet vähintään yhden annoksen tutkittua lääkettä ja joilla on päämuuttujan arviointi prospektiivisesti, vähintään kolmen kuukauden kuluttua seuraavista ylös. Tämän oletuksen perusteella odotetaan, että vuoden mittaisessa seurannassa löydetään koehenkilöitä, joiden mittauksia ei ole tehty. Siksi päämuuttujan puuttuvien arvojen imputointi esitetään seuraavasti:

• Jos tiedon puute johtuu tehokkuusongelmista tai syytä ei tunneta, tutkimusryhmän 95 %:n prosenttipisteen arvoksi määritetään.
• Mikäli tiedot puuttuvat muista syistä, otetaan käyttöön LOCF (Last Observation Carried Forward) -menetelmä edellyttäen, että arvo on saatavilla vähintään kolme kuukautta sen perusmittauksen jälkeen.

Yksityiskohtainen menettely sisällytetään tilastoraporttiin ja menetelmän johdonmukaisuutta suunnitellaan arvioimaan ennen tietokannan sulkemista kokouksessa, jossa anonyymejä listauksia helpotetaan sen arvioimiseksi "Blind Review", jossa menettely voidaan arvioida uudelleen ( CPMP/EWP/1776/99: huomioitavia tietoja puuttuvien tietojen yhteydessä).

Tutkimuksen vaikeudet ja rajoitukset:

Potilaiden määrä ja erikoinen hoito, joka heillä on suoritettujen lisäkokeiden vuoksi, tekevät tutkimuksesta väistämättä monimutkaisen. Siellä on kuitenkin lääkäri, joka koordinoi jatkuvasti kaikkia potilaita ja kaikkia suoritettuja testejä. Lisäksi tutkimusryhmä on laaja ja jokaiselle tutkijalle on konkreettisia ja synergistisiä toimintoja. Lopuksi tutkijat muodostavat konsolidoidun ryhmän ja heillä on kokemusta aikaisemmista tutkimuksista, joilla on samanlaiset vaatimukset.

o Tilastollinen analyysisuunnitelma, jossa kuvataan analyyttiset periaatteet ja tilastolliset tekniikat, joita käytetään ensisijaisen ja toissijaisen tavoitteen saavuttamiseksi, kuten tutkimusprotokollassa tai -suunnitelmassa on määritelty.

Tilastollinen analyysi Kuvaava analyysi

Seuraavat kuvaavat indeksit esitetään tilastoraportissa muuttujien luonteen mukaan:

• Jatkuvissa muuttujissa: Keskiarvo, CI 95%, SD, minimi, P25, mediaani, P75, max, N ja puuttuu. Ryhmäkohtaisesti ja maailmanlaajuisesti.
• Kategorisissa muuttujissa: % yhteensä sarakkeen osalta, N kussakin luokassa. Ryhmäkohtaisesti ja maailmanlaajuisesti.
• Järjestysmuuttujissa: Niitä kuvataan kahdella taulukolla: toisessa on jatkuvien muuttujien kuvaavat parametrit ja toisessa kategoriamuuttujat.

Avoimissa kentissä tai haluttaessa luetella kaikki tapaukset yhdelle tai useammalle muuttujalle, kuvataan listoilla.

Päätelmäanalyysi Ensisijaisten ja toissijaisten tehokkuusmuuttujien tilastollinen käsittely kuvataan erityisesti seuraavassa osiossa. Kaikille muille muuttujille käytetään asianmukaista hypoteesitestiä sen luonteen mukaan: Fisherin tarkka testi kategorisille muuttujille, Studentin t -testi jatkuville muuttujille, Mann-Whitney U -testi järjestysmuuttujille.

Perushomogeenisuus ryhmien välillä Hoitoryhmien vertailukelpoisuuden lähtötilanteen analyysi tehdään demografisten muuttujien, riskitekijöiden ja kliinisten ominaisuuksien osalta sisällyttämishetkellä.

Pääasiallinen tehokkuusanalyysi Tehon päämuuttuja arvioidaan vertaamalla ANCOVA-mallia käyttävien eri hoitojen lähtö- ja loppuarvojen välistä eroa testin perusarvoon kovariaattina. Säädetyt keskiarvot ja luottamusvälit 95 %:lla (95 %) laskettiin ANCOVA-mallilla. Tehokkuuden pääasiallisena päätöksentekokriteerinä suoritetaan kontrasti säädettyjen keskiarvojen välillä tutkimuksen loppupisteessä kahden hoitoryhmän välillä. Lisäksi ja tutkivana tarkoituksena on arvioitava vertailuvaikutus eri havaintoaikoina. Tämän toisen analyysin tutkivan luonteen vuoksi ei tehdä monikertakorjauksia.

Mikäli parametristen testien mukaisissa tapauksissa on olennaisia ​​poikkeamia, sovelletaan ei-parametrista lähestymistapaa käyttäen muunnoksia vastaavien muuttujien alueisiin. Tehon pääasiallinen analyysi tehdään sen väestön kanssa, jota on tarkoitus hoitaa. Kuitenkin todisteena tulosten herkkyydestä ja luotettavuudesta toimitetaan protokolla-lähestymistavan mukainen analyysi.

Sieto- ja hyväksyttävyystestit Kaikki potilaat, jotka on satunnaistettu ja hoidettu, otetaan mukaan turvallisuusanalyysiin. Haittavaikutusten esiintymistiheyttä kahdessa ryhmässä verrataan käyttämällä Fisherin tarkkaa testiä.

Merkitystaso Kaikissa ehdotetuissa tilastollisissa testeissä vaaditun merkitsevyyden tason on oltava sopimus (p < 0,05 kahdenvälinen). Mitään monikertakorjauksen suorittamista ei ole tehty lukuun ottamatta välianalyysiä.