5FU vs 5FU med viskoelastisk formulering for forebygging av arrdannelse etter trabekulektomi

Spesifikke mål

Målet med denne studien er å finne ut om nåling av konjunktivalbleb etter trabekulektomi med subkonjunktival injeksjon av en 5 Fluorouracil (5FU)/viskoelastisk formulering er en effektiv metode for forlenget medikamentlevering for å forhindre postoperativ arrdannelse i konjunktiva.

Studere design

Cellekultureksperimenter

Cellekultureksperimenter ble utført for å bestemme effekten av hyaluronsyre, ved varierende kommersielt tilgjengelige konsentrasjoner, på humane Tenons fibroblaster, målcelletypen til vår foreslåtte HA/5FU-blanding. Vi utfører også tester for å undersøke de farmakokinetiske medikamentfrigjøringsprofilene til de forskjellige 5FU/HA-formuleringene. Dette tillot oss å bestemme den mest effektive formuleringen å bruke for pasienter i den kliniske delen av studien.

Kort fortalt ble humane Tenons fibroblaster oppnådd fra vevseksplantater fra kadaverøyne dyrket til konfluens i føtalt kalveserum som inneholdt standard antibiotika for vevskultur, gentamicin og amfotericin, og plassert i en inkubator ved 37 °C under 95 % fuktighet med 5 % CO2. Cellene ble passert når de var sammenflytende og brukt til eksperimenter mellom passasjer 3-6.

Alfa glattmuskelaktinekspresjon Tenons fibroblaster ble sådd på 24-brønners plater og inkubert i føtalt kalveserum (FCS) som inneholdt standard antibiotika for vevskultur, gentamicin og amfotericin, og plassert i en inkubator ved 37 °C under 95 % fuktighet med 5 %. CO2. Kulturmediet ble fjernet etter 24 timer og erstattet med ferskt medium beskrevet nedenfor.

Kollagen I-produksjon Standard 3-D kollagen I-geler sådd med fibroblaster for gelkontraksjonsanalyser ble brukt for å kvantifisere kollagenproduksjonen av fibroblaster behandlet med forskjellige HA-konsentrasjoner. Geler behandlet med TGF beta (en kjent stimulator for kollagen I-syntese og induserer av alfa-glatmuskelaktinekspresjon, dvs. myofibroblast-fenotype) fungerte som positiv kontroll. Type I kollagen avledet fra rottehale ble blandet med kulturmedium og etter konfluens ble trypsiniserte celler resuspendert i denne blandingen og støpt i en 24-brønners plate og tillatt å polymerisere i en inkubator ved 37°C. Etter polymerisering ble gelene forsiktig løsnet fra platene de er støpt i og suspendert i friskt medium beskrevet nedenfor

Alle forsøk ble utført i tre eksemplarer og gjentatt 3 ganger.

Human Tenons fibroblaster ble dyrket i ferske medier som inneholdt HA alene, 5-FU/HA (HA-konsentrasjoner 10, 14, 23 mg/ml) eller dyrket uten HA eller 5FU (kontroller). Fibrose og arrdannelsesrespons av myofibroblastene ble vurdert gjennom kollagen I og alfa glattmuskelaktin (ASMA) uttrykk som ble kvantifisert ved sanntid - Polymerasekjedereaksjon (RT-PCR). WST-1-analyse bestemte cellelevedyktighet. 5-FU-løsning eller pulver ble dispergert i HA og mekanisk omrørt og deretter vortexblandet.

Resultatene våre viste at HA markant reduserte ASMA og kollagen I mRNA-uttrykk av myofibroblaster sammenlignet med kontroller uten HA. Behandling med HA etter 5FU (10mg/ml) forbehandling resulterte i en større reduksjon i ASMA og kollagen I-ekspresjon sammenlignet med HA-behandling alene, og statistisk signifikans oppnådd med 23mg/ml HA (p

Vårt team av etterforskere har fullført eksperimentene som undersøkte frigjøringen av 5FU fra 5FU/HA-blandingen. 5FU-løsning eller pulver ble mekanisk omrørt og vortexblandet i HA og frigjøringen av 5FU ble kvantifisert ved bruk av høyytelses væskekromatografi (HPLC). Konsentrasjonen av 5FU som ble brukt var 10 mg/ml og konsentrasjonen av HA som ble brukt var 10, 14 og 23 mg/ml.

5FU/HA-blandingen forsinket frigjøring av legemiddel til 48 timer, med HA på 14 mg/ml og 23 mg/ml som viser en større forsinkelse i frigjøring av legemiddel enn 10 mg/ml, (p

Resultatene av våre in vitro-studier og medikamentfrigjøringsanalyser viser at denne 5FU/HA-blandingen har den ønskede terapeutiske effekten på Human Tenons myofibroblaster. Den optimale konsentrasjonen for HA er 23mg/ml og den vil bli kombinert med 5FU 10mg/ml. Vi forventer at 5FU vil bli frigjort fra blandingen i løpet av 48 timer; både HA og 5FU vil ha anti-arrdannelseseffekter i det subkonjunktivale rommet.

Pasientrekruttering:

Pasienter vil bli rekruttert og randomisert ved første postoperative besøk hvor en 5-FU-injeksjon er indisert i henhold til kliniske parametere som indikerer aktiv arrdannelse. (vanligvis etter den første postoperative måneden når suturlyse er fullført). All postoperativ behandling bortsett fra injeksjonen av 5FU/viskoelastisk blanding i kontrollgruppen vil være uendret fra gjeldende behandlingsstandarder.

Minst 50 pasienter som har gjennomgått trabekulektomi ved Singapore National Eye Centre vil bli rekruttert i studien fra glaukomklinikker ved Singapore National Eye Centre. Denne vil bestå av ulike typer glaukom. 25 pasienter vil få subkonjunktival injeksjon av 5FU etter bleb needling mens 25 vil få injeksjoner av en 5FU/viskoelastisk formulering.

Pasientvurdering og undersøkelse ved baseline

Alle pasienter (tilfeller og kontroller) vil ha følgende undersøkelse: Snellen synsskarphet, spaltelampeundersøkelse av fremre segment, bleb og intraokulært trykkmåling med Goldmann tonometer. Tonometri vil også bli utført før injeksjon ved bruk av et pneumatonometer (Reichert) i henhold til produsentens retningslinjer.

Fargefotografier av bleb vil bli tatt og lagret digitalt for maskert bleb gradering. Visante OCT vil bli brukt til å avbilde bleb-morfologien under mørke forhold. Det er et nytt berøringsfritt instrument som raskt får høyoppløselige bilder av vinkelen. Bildefangstskanningen tar mindre enn 10 sekunder og ligner på å ta et bilde. Enheten tillater kvalitativ og kvantitativ vinkelavbildning, som er objektiv og reproduserbar. Dette vil skje før nåleprosedyren.

Bleb needling og subkonjunktival injeksjon

Etter å ha tatt informert samtykke fra pasienten, vil pasienten bli plassert i enten case- eller kontrollgruppe. Kort fortalt vil nåling av konjunktivalbleb bli utført ved spaltelampen ved bruk av aseptisk teknikk. Legen som utfører prosedyren vil bruke sterile hansker og rense pasientens øyelokk og peri-orbital hud med povidonjod 10%. Øyet vil bli bedøvet med Guttae Tetracaine 0,5% og et wirespekulum satt inn for å skille øyelokkene. Povidonjod er satt inn i konjunktivalsekken. 0,1 ml lignokain 2 % injiseres i det subkonjunktivale rommet, temporalt eller nasal til bleb før nåling av bleb utføres med en 27 guage nål festet til en 1 ml sprøyte. 5FU-løsning (10mg/ml) (kontrollarm) eller 5FU/viskoelastisk formulering (10mg/ml av 5FU i 23mg/ml HA, (50/50) volum/volum) (eksperimentell arm) injiseres posteriort til bleb etter nål fullstendig. Injeksjoner gis innenfor samme kvadrant som bleb. Etter injeksjonen skylles konjunktivalsekken grundig og undersøkes på nytt på spaltelampen. IOP kontrolleres på slutten av prosedyren med Goldmann-tonometeret og pneumotonometeret.

Pasienter vil motta gjeldende standardbehandling med hensyn til intraoperativ antifibrosebehandling og tidspunktet og frekvensen av postoperativ 5-FU. Videre administrering av subkonjunktival 5-FU-løsning eller 5FU/HA-formulering, (avhengig av behandlingsarmen pasienten opprinnelig ble tildelt) ved påfølgende kontorbesøk vil bli administrert når det er nødvendig i henhold til gjeldende klinisk praksis for pasienter i begge behandlingsarmene. Dette vil bli registrert i studien.

Oppfølgingsundersøkelser

Bleb-avbildning med Visante fremre segment OCT- og IOP-målinger vil bli registrert ved hvert besøk, dvs. uke 1 og 12. Behovet for ytterligere nåling eller annen intervensjon, f.eks. massasje/fjerning av sutur/lyse (hvis relevant) vil avgjøres klinisk av øyelegen ved hvert besøk, og bleb-avbildning vil bli utført før eventuelle ytterligere prosedyrer utføres hvis det faller på et forskningsbesøk, dvs. uke 1 eller 12. Bleb-gradering fra spaltelampefotografier vil bli utført ved baseline pre-injeksjon og i uke 12.