섬유주절제술 후 흉터 예방을 위한 점탄성 제제를 사용한 5FU 대 5FU

특정 목표

이 연구의 목적은 5Fluorouracil(5FU)/점탄성 제제의 결막하 주사로 섬유주절제술 후 결막 수포의 자침이 결막의 수술 후 흉터를 예방하는 데 장기간 약물 전달을 위한 효과적인 방법인지 여부를 결정하는 것입니다.

연구 설계

세포 배양 실험

우리가 제안한 HA/5FU 혼합물의 표적 세포 유형인 인간 테논 섬유모세포에 대한 히알루론산의 효과를 다양한 상업적으로 이용 가능한 농도로 결정하기 위해 세포 배양 실험을 수행했습니다. 또한 다양한 5FU/HA 제형의 약동학 약물 방출 프로파일을 조사하기 위한 테스트를 수행합니다. 이를 통해 연구의 임상 부문에서 환자에게 사용할 가장 효과적인 제제를 결정할 수 있었습니다.

간단히 말해서, 사체 눈의 조직 외식편으로부터 얻은 인간 테논 섬유모세포를 조직 배양을 위한 표준 항생제인 겐타마이신 및 암포테리신을 함유하는 소태아 혈청에 융합될 때까지 성장시키고, 37℃, 95% 습도 및 5% CO2의 인큐베이터에 넣었다. 세포는 컨플루언트일 때 계대되었고 계대 3-6 사이의 실험에 사용되었습니다.

알파 평활근 액틴 발현 Tenon의 섬유아세포를 24웰 플레이트에 접종하고 조직 배양을 위한 표준 항생제인 겐타마이신 및 암포테리신을 함유하는 소태아혈청(FCS)에서 배양하고 37°C, 95% 습도, 5% 이산화탄소. 24시간 후에 배양 배지를 제거하고 하기 기술된 새로운 배지로 교체하였다.

콜라겐 I 생성 겔 수축 분석을 위해 섬유아세포가 주입된 표준 3-D 콜라겐 I 겔을 사용하여 다양한 HA 농도로 처리된 섬유아세포에 의한 콜라겐 생성을 정량화했습니다. TGF 베타(콜라겐 I 합성을 위한 공지된 자극제 및 알파 평활근 액틴 발현 유도제, 즉 근섬유모세포 표현형)로 처리된 겔은 양성 대조군으로 작용하였다. 쥐 꼬리에서 유래한 유형 I 콜라겐을 배양 배지와 혼합하고 컨플루언스 후 트립신 처리된 세포를 이 혼합물에 재현탁하고 24웰 플레이트에 캐스팅하고 37°C 인큐베이터에서 중합되도록 했습니다. 중합 후, 젤은 플레이트에서 부드럽게 분리되어 아래에 설명된 새로운 매질에 캐스트되고 현탁되었습니다.

모든 실험은 3중으로 수행되었고 3회 반복되었다.

Human Tenon의 섬유아세포는 HA 단독, 5-FU/HA(HA 농도 10, 14, 23mg/ml)를 포함하는 신선한 배지에서 배양하거나 HA 또는 5FU(대조군) 없이 배양했습니다. 근섬유모세포의 섬유화 및 흉터 반응은 Real Time -Polymerase Chain Reaction (RT-PCR)에 의해 정량화된 콜라겐 I 및 알파 평활근 액틴(ASMA) 발현을 통해 평가되었습니다. WST-1 분석은 세포 생존력을 결정했습니다. 5-FU 용액 또는 분말을 HA에 분산시키고 기계적으로 교반한 다음 볼텍스 혼합하였다.

우리의 결과는 HA가 HA가 없는 대조군에 비해 근섬유모세포에 의한 ASMA 및 콜라겐 I mRNA 발현을 현저하게 감소시켰음을 보여주었습니다. 5FU(10mg/ml) 전처리 후 HA 처리는 HA 단독 처리에 비해 ASMA 및 콜라겐 I 발현의 더 큰 감소를 가져왔고 통계적 유의성은 23mg/ml HA에서 도달했습니다(p

우리 조사팀은 5FU/HA 혼합물에서 5FU의 방출을 조사하는 실험을 완료했습니다. 5FU 용액 또는 분말을 기계적으로 교반하고 HA에서 볼텍스 혼합하고 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 사용하여 5FU의 방출을 정량화했습니다. 사용된 5FU의 농도는 10mg/ml이고 사용된 HA의 농도는 10, 14 및 23 mg/ml이었다.

5FU/HA 혼합물은 약물 방출을 48시간까지 지연시켰고, 14mg/ml 및 23mg/ml의 HA는 10mg/ml보다 약물 방출에서 더 큰 지연을 나타냈습니다.

체외 연구 및 약물 방출 분석의 결과는 이 5FU/HA 혼합물이 Human Tenon의 근섬유모세포에 대해 원하는 치료 효과가 있음을 보여줍니다. HA의 최적 농도는 23mg/ml이며 5FU 10mg/ml와 결합됩니다. 우리는 48시간 동안 혼합물에서 5FU가 방출될 것으로 예상합니다. HA와 5FU 모두 결막하 공간에서 흉터 방지 효과가 있습니다.

환자 모집:

활성 흉터 형성을 나타내는 임상 매개변수에 따라 5-FU 주사가 지시되는 수술 후 첫 번째 방문 시 환자를 모집하고 무작위 배정합니다. (보통 봉합이 완료된 수술 후 첫 달 이후). 대조군의 5FU/점탄성 혼합물 주입을 제외한 모든 수술 후 관리는 현재 치료 기준에서 변경되지 않습니다.

싱가포르 국립 안과 센터에서 섬유주 절제술을 받은 최소 50명의 환자가 싱가포르 국립 안과 센터의 녹내장 클리닉에서 연구에 모집됩니다. 이것은 다양한 유형의 녹내장으로 구성됩니다. 25명의 환자는 소포 니들링 후 5FU의 결막하 주사를 받고, 25명은 5FU/점탄성 제형의 주사를 받게 됩니다.

기준선에서 환자 평가 및 검사

모든 환자(사례 및 대조군)는 다음과 같은 검사를 받게 됩니다: Snellen 시력, 전안부의 세극등 검사, Goldmann 안압계를 사용한 수포 및 안압 측정. 제조업체의 지침에 따라 기압계(Reichert)를 사용하여 주입 전 안압 측정도 수행됩니다.

수포의 컬러 사진은 마스킹된 수포 등급 지정을 위해 캡처되고 디지털 방식으로 저장됩니다. Visante OCT는 어두운 조건에서 수포 형태를 이미지화하는 데 사용됩니다. 앵글의 고해상도 이미지를 빠르게 획득하는 새로운 비접촉식 장비입니다. 이미지 캡처 스캔은 10초도 걸리지 않으며 사진을 찍는 것과 비슷합니다. 이 장치는 객관적이고 재현 가능한 정성적 및 정량적 각도 이미징을 허용합니다. 이것은 니들링 절차 전에 이루어집니다.

수포 자침 및 결막하 주사

환자로부터 정보에 입각한 동의를 얻은 후 환자는 사례 또는 통제 그룹에 배정됩니다. 요컨대, 무균 기술을 사용하여 슬릿 램프에서 결막 수포의 자침이 수행됩니다. 절차를 수행하는 의사는 멸균 장갑을 사용하고 포비돈 요오드 10%로 환자의 눈꺼풀과 안와 주위 피부를 청소합니다. Guttae Tetracaine 0.5%로 눈을 마취하고 와이어 검경을 삽입하여 눈꺼풀을 분리합니다. 포비돈 요오드는 결막낭에 삽입됩니다. 1ml 주사기에 부착된 27 게이지 바늘로 수포를 자침하기 전에 0.1ml의 리그노카인 2%를 결막하 공간, 측두부 또는 비강 내 수포에 주입합니다. 5FU 용액(10mg/ml)(대조군) 또는 5FU/점탄성 제제(23mg/ml HA에 5FU의 10mg/ml, (50/50) 부피/부피)(실험군) 니들링 후 수포 후방에 주입됩니다. 완벽한. 주사는 수포와 동일한 사분면 내에서 이루어집니다. 주입 후 결막낭을 완전히 헹구고 세극등에서 다시 검사합니다. IOP는 골드만 안압계와 기압계를 사용하여 절차가 끝날 때 확인합니다.

환자는 수술 중 항섬유증 치료와 수술 후 5-FU의 시기 및 빈도에 관한 현재 표준 치료를 받게 됩니다. 결막하 5-FU 용액 또는 5FU/HA 제형의 추가 투여(환자가 초기에 배정된 치료 부문에 따라) 후속 진료 방문 시 두 치료 부문의 환자에 대한 현재 임상 관행에 따라 필요할 때 투여될 것입니다. 이것은 연구에 기록됩니다.

후속 검사

Visante 전방 세그먼트 OCT 및 IOP 측정을 사용한 Bleb 이미징은 모든 방문(예: 1주 및 12주)에 기록됩니다. 마사지/봉합사 제거/용해(해당되는 경우)와 같은 추가 자침 또는 기타 개입의 필요성은 각 방문 시 안과의사가 임상적으로 결정하며 연구 방문(예: 1주차)에 속하는 경우 추가 절차를 수행하기 전에 수포 이미징을 수행합니다. 또는 12. 세극등 사진의 수포 등급은 기준선 주입 전 및 12주차에 수행됩니다.