5FU vs 5FU viszkoelasztikus formulával a trabeculectomia utáni hegesedés megelőzésére

Konkrét célok

Ennek a vizsgálatnak a célja annak meghatározása, hogy a kötőhártya-hólyag tűszúrása trabeculectomia után 5 fluorouracil (5FU)/viszkoelasztikus készítmény szubkonjunktivális injekciójával hatékony módszer-e a hosszan tartó gyógyszeradagolásra a kötőhártya műtét utáni hegesedésének megelőzésére.

Dizájnt tanulni

Sejttenyésztési kísérletek

Sejttenyésztési kísérleteket végeztünk, hogy meghatározzuk a hialuronsavnak a kereskedelemben kapható változó koncentrációkban a humán Tenon-fibroblasztokra, a javasolt HA/5FU keverék célsejttípusára kifejtett hatását. Teszteket is végzünk a különböző 5FU/HA készítmények farmakokinetikai hatóanyag-felszabadulási profiljának vizsgálatára. Ez lehetővé tette számunkra, hogy meghatározzuk a leghatékonyabb készítményt a vizsgálat klinikai ágában lévő betegek számára.

Röviden összefoglalva, a hullaszemekből származó szövetexplantátumokból nyert humán Tenon fibroblasztokat a szövettenyésztéshez használt standard antibiotikumokat, gentamicint és amfotericint tartalmazó magzati borjúszérumban összefolyóig növesztjük, majd inkubátorba helyezzük 37 °C-on, 95%-os páratartalom mellett 5% CO2 mellett. A sejteket passzáltuk, amikor összefolytak, és a 3-6. passzázs közötti kísérletekhez használtuk.

Alfa simaizom aktinexpresszió A Tenon-fibroblasztokat 24 lyukú lemezekre oltottuk, és a szövettenyésztéshez használt standard antibiotikumokat, gentamicint és amfotericint tartalmazó magzati borjúszérumban (FCS) inkubáltuk, majd inkubátorba helyeztük 37°C-on, 95%-os páratartalom mellett, 5%-os páratartalom mellett. CO2. A táptalajt 24 óra elteltével eltávolítottuk, és az alábbiakban ismertetett friss tápközeggel helyettesítettük.

Kollagén I termelés A gélösszehúzódási vizsgálatokhoz fibroblasztokkal beoltott standard 3-D kollagén I géleket alkalmaztunk a különböző HA koncentrációkkal kezelt fibroblasztok kollagéntermelésének mennyiségi meghatározására. A TGF béta-val (a kollagén I szintézis ismert stimulátora és az alfa simaizom aktin expressziójának indukálója, azaz a myofibroblast fenotípus) kezelt gélek pozitív kontrollként működtek. A patkány farkából származó I-es típusú kollagént összekevertük a táptalajjal, majd az összefolyást követően a tripszinnel kezelt sejteket ebben a keverékben újraszuszpendáltuk, és 24 lyukú lemezre öntöttük, és inkubátorban 37 °C-on hagytuk polimerizálni. A polimerizáció után a géleket óvatosan leválasztottuk a lemezekről, amelyekbe öntötték, és az alábbiakban leírt friss közegben szuszpendáltuk.

Minden kísérletet háromszor végeztünk, és háromszor megismételtük.

Humán Tenon fibroblasztjait friss tápközegben tenyésztettük, amely önmagában HA-t, 5-FU/HA-t (HA koncentrációk 10, 14, 23 mg/ml) tartalmazott, vagy HA vagy 5FU nélkül tenyésztettük (kontroll). A miofibroblasztok fibrózisára és hegesedésére adott válaszát a kollagén I és az alfa simaizom aktin (ASMA) expressziójával értékeltük, amelyeket valós idejű polimeráz láncreakcióval (RT-PCR) határoztunk meg. A WST-1 vizsgálat meghatározta a sejt életképességét. 5-FU oldatot vagy port diszpergáltunk HA-ban, és mechanikusan kevertük, majd vortex-el kevertük.

Eredményeink azt mutatták, hogy a HA jelentősen csökkentette a miofibroblasztok ASMA és kollagén I mRNS expresszióját a HA nélküli kontrollokhoz képest. Az 5FU (10 mg/ml) előkezelést követő HA-val végzett kezelés az ASMA és a kollagén I expresszió nagyobb csökkenését eredményezte, mint az önmagában végzett HA-kezelés, a statisztikai szignifikancia pedig 23 mg/ml HA-val érhető el (p

Kutatócsoportunk befejezte az 5FU/HA keverékből az 5FU felszabadulását vizsgáló kísérleteket. Az 5FU oldatot vagy port mechanikusan kevertük, és örvénykeveréssel kevertük HA-ban, és az 5FU felszabadulást nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával (HPLC) határoztuk meg. Az alkalmazott 5FU koncentrációja 10 mg/ml, a HA koncentrációja pedig 10, 14 és 23 mg/ml volt.

Az 5FU/HA keverék 48 órára késleltette a gyógyszerfelszabadulást, a HA 14 mg/ml és 23 mg/ml pedig nagyobb késést mutatott a gyógyszerfelszabadulásban, mint 10 mg/ml, (p

In vitro vizsgálataink és gyógyszerfelszabadulási vizsgálataink eredményei azt mutatják, hogy ez az 5FU/HA keverék rendelkezik a kívánt terápiás hatással a Human Tenon myofibroblasztjaira. A HA optimális koncentrációja 23 mg/ml, és ezt 10 mg/ml 5FU-val kombinálják. Arra számítunk, hogy az 5FU 48 óra alatt szabadul fel a keverékből; mind a HA, mind az 5FU hegesedésgátló hatással bír a kötőhártya alatti térben.

Beteg toborzás:

A betegeket az első posztoperatív vizit alkalmával toborozzák és randomizálják, ahol 5-FU injekciót írnak elő az aktív hegképződést jelző klinikai paraméterek alapján. (általában az első posztoperatív hónap után, amikor a varratkezelés befejeződött). A kontrollcsoportban az 5FU/viszkoelasztikus keverék injekción kívül minden posztoperatív ellátás változatlan marad a jelenlegi kezelési standardokhoz képest.

Legalább 50 olyan beteget vonnak be a vizsgálatba, akiken trabeculectomián estek át a Szingapúri Nemzeti Szemközpontban a Szingapúri Nemzeti Szemközpont glaukóma klinikáiról. Ez a glaukóma különböző típusaiból áll. 25 beteg kap kötőhártya alatti 5FU injekciót a hólyagtűzés után, míg 25 beteg 5FU/viszkoelasztikus készítményt kap.

A beteg értékelése és kivizsgálása az alaphelyzetben

Minden betegnél (eseteknél és kontrolloknál) a következő vizsgálatot kell elvégezni: Snellen látásélesség, az elülső szegmens réslámpás vizsgálata, vérhólyag- és intraokuláris nyomásmérés Goldmann tonométerrel. A tonometriát a befecskendezés előtt is elvégzik pneumatométerrel (Reichert) a gyártó útmutatásai szerint.

A foltról készült színes fényképeket rögzítik és digitálisan tárolják a maszkos foltminősítéshez. A Visante OCT-t a hólyagok morfológiájának leképezésére fogják használni sötét körülmények között. Ez egy új, érintésmentes műszer, amely gyorsan készít nagy felbontású képeket a szögről. A képrögzítési szkennelés kevesebb mint 10 másodpercet vesz igénybe, és egy fénykép készítéséhez hasonlít. A készülék lehetővé teszi a minőségi és mennyiségi szögből történő képalkotást, amely objektív és reprodukálható. Ez a tűszúrási eljárás előtt történik.

Bleb tűszúrás és kötőhártya alatti injekció

A beteg tájékoztatáson alapuló beleegyezését követően a beteg az eset- vagy a kontrollcsoportba kerül besorolásra. Röviden, a kötőhártya-hólyag tűzését a réslámpánál végzik el, aszeptikus technikával. Az eljárást végző orvos steril kesztyűt használ, és 10%-os povidon-jóddal tisztítja meg a szemhéjat és a szemkörnyéki bőrt. A szemet 0,5%-os Guttae Tetracaine-nal érzéstelenítik, és egy drótspekulumot helyeznek be a szemhéjak szétválasztására. A povidon-jódot a kötőhártyazsákba helyezik. 0,1 ml 2%-os lignokaint fecskendeznek be a kötőhártya alatti térbe, időlegesen vagy nazálisan a hólyagba, mielőtt a hólyagot egy 27-es méretű tűvel egy 1 ml-es fecskendőhöz csatlakoztatják. 5FU oldatot (10 mg/ml) (kontroll kar) vagy 5FU/viszkoelasztikus készítményt (10 mg/ml 5FU 23 mg/ml HA-ban, (50/50) térfogat/térfogat) (kísérleti kar) fecskendeznek be a húgyhólyag hátuljára a tű felhelyezése után. teljes. Az injekciókat ugyanabban a kvadránsban adják be, mint a hólyag. Az injekció beadása után a kötőhártya tasakot alaposan kiöblítjük, és újra megvizsgáljuk a réslámpán. Az eljárás végén az IOP-t Goldmann tonométerrel és pneumotonométerrel ellenőrzik.

A betegek a jelenlegi standard ellátásban részesülnek az intraoperatív antifibrosis terápia, valamint a posztoperatív 5-FU időzítése és gyakorisága tekintetében. Szubkonjunktív 5-FU oldat vagy 5FU/HA készítmény (attól függően, hogy a beteget eredetileg melyik kezelési ágra jelölték) további beadása a következő rendelői vizitek alkalmával történik, ha a jelenlegi klinikai gyakorlat szerint mindkét kezelési karban szükséges. Ezt rögzítjük a tanulmányban.

Utóellenőrző vizsgálatok

Minden vizit alkalmával, azaz az 1. és 12. héten rögzítik a Visante elülső szegmens OCT és IOP méréseit. A további tűszúrás vagy egyéb beavatkozás, pl. masszázs/varrateltávolítás/lízis (ha releváns) szükségességét a szemész minden vizit alkalmával klinikailag dönti el, és ha az kutatási vizitre, azaz az 1. hétre esik, minden további beavatkozás előtt vérhólyag-leképezést kell végezni. vagy 12. A réslámpás fényképekről készült bleb-osztályozást a kiindulási előinjektáláskor és a 12. héten végzik el.