5FU vs. 5FU mit viskoelastischer Formulierung zur Vorbeugung von Narbenbildung nach Trabekulektomie

Spezifische Ziele

Das Ziel dieser Studie ist es festzustellen, ob die Nadelung der Bindehautblase nach Trabekulektomie mit subkonjunktivaler Injektion einer 5-Fluorouracil (5FU)/viskoelastischen Formulierung eine wirksame Methode für eine verlängerte Arzneimittelabgabe zur Verhinderung postoperativer Vernarbung der Bindehaut ist.

Studiendesign

Zellkulturexperimente

Es wurden Zellkulturexperimente durchgeführt, um die Wirkung der Hyaluronsäure in unterschiedlichen kommerziell erhältlichen Konzentrationen auf menschliche Tenon-Fibroblasten, den Zielzelltyp unserer vorgeschlagenen HA/5FU-Mischung, zu bestimmen. Wir führen auch Tests durch, um die pharmakokinetischen Wirkstofffreisetzungsprofile der verschiedenen 5FU/HA-Formulierungen zu untersuchen. Dies ermöglichte es uns, die wirksamste Formulierung zur Verwendung für Patienten im klinischen Arm der Studie zu bestimmen.

Kurz gesagt, menschliche Tenon-Fibroblasten, die aus Gewebeexplantaten von Kadaveraugen gewonnen wurden, wurden bis zur Konfluenz in fötalem Kälberserum gezüchtet, das die Standardantibiotika für Gewebekulturen, Gentamicin und Amphotericin, enthielt, und in einen Inkubator bei 37°C unter 95% Feuchtigkeit mit 5% CO2 gegeben. Die Zellen wurden bei Konfluenz passagiert und für Experimente zwischen den Passagen 3-6 verwendet.

Alpha-Actin-Expression der glatten Muskulatur Tenons Fibroblasten wurden auf Platten mit 24 Vertiefungen ausgesät und in fötalem Kälberserum (FCS) inkubiert, das die Standardantibiotika für Gewebekulturen, Gentamicin und Amphotericin, enthielt, und in einen Inkubator bei 37 °C unter 95 % Luftfeuchtigkeit mit 5 % CO2. Das Kulturmedium wurde nach 24 Stunden entfernt und durch unten beschriebenes frisches Medium ersetzt.

Kollagen-I-Produktion Standard-3-D-Kollagen-I-Gele, die mit Fibroblasten für Gelkontraktionsassays besät wurden, wurden verwendet, um die Kollagenproduktion durch Fibroblasten zu quantifizieren, die mit unterschiedlichen HA-Konzentrationen behandelt wurden. Mit TGF beta behandelte Gele (ein bekannter Stimulator für die Collagen-I-Synthese und Induktor der Alpha-Actin-Expression der glatten Muskulatur, dh des Myofibroblasten-Phänotyps) dienten als positive Kontrolle. Vom Rattenschwanz stammendes Typ-I-Kollagen wurde mit Kulturmedium gemischt und nach Konfluenz wurden trypsinisierte Zellen in dieser Mischung resuspendiert und in eine Platte mit 24 Vertiefungen gegossen und in einem Inkubator bei 37°C polymerisieren gelassen. Nach der Polymerisation wurden die Gele vorsichtig von den Platten, in die sie gegossen wurden, abgelöst und in frischem Medium wie unten beschrieben suspendiert

Alle Experimente wurden dreifach durchgeführt und dreimal wiederholt.

Menschliche Tenon-Fibroblasten wurden in frischem Medium kultiviert, das HA allein, 5-FU/HA (HA-Konzentrationen 10, 14, 23 mg/ml) enthielt, oder ohne HA oder 5FU (Kontrollen) kultiviert. Die Fibrose- und Vernarbungsreaktion der Myofibroblasten wurde durch die Expression von Kollagen I und glattem Alpha-Muskel-Aktin (ASMA) bewertet, die durch Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR) quantifiziert wurden. Der WST-1-Assay bestimmte die Lebensfähigkeit der Zellen. 5-FU-Lösung oder -Pulver wurde in HA dispergiert und mechanisch gerührt und dann verwirbelt.

Unsere Ergebnisse zeigten, dass HA die ASMA- und Kollagen-I-mRNA-Expression durch Myofibroblasten im Vergleich zu Kontrollen ohne HA deutlich reduzierte. Die Behandlung mit HA nach einer Vorbehandlung mit 5FU (10 mg/ml) führte zu einer stärkeren Reduktion der ASMA- und Kollagen-I-Expression im Vergleich zur HA-Behandlung allein, und eine statistische Signifikanz wurde mit 23 mg/ml HA erreicht (S

Unser Forscherteam hat die Experimente zur Untersuchung der Freisetzung von 5FU aus der 5FU/HA-Mischung abgeschlossen. 5FU-Lösung oder -Pulver wurde mechanisch gerührt und in HA verwirbelt, und die Freisetzung von 5FU wurde unter Verwendung von Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) quantifiziert. Die verwendete Konzentration von 5FU war 10 mg/ml und die verwendete Konzentration von HA war 10, 14 und 23 mg/ml.

Die 5FU/HA-Mischung verzögerte die Arzneimittelfreisetzung auf 48 Stunden, wobei HA mit 14 mg/ml und 23 mg/ml eine größere Verzögerung der Arzneimittelfreisetzung zeigte als 10 mg/ml (S

Die Ergebnisse unserer In-vitro-Studien und Arzneimittelfreisetzungsassays zeigen, dass diese 5FU/HA-Mischung die gewünschte therapeutische Wirkung auf die Myofibroblasten von Human Tenon hat. Die optimale Konzentration für HA beträgt 23 mg/ml und würde mit 5FU 10 mg/ml kombiniert werden. Wir gehen davon aus, dass 5FU innerhalb von 48 Stunden aus der Mischung freigesetzt werden; Sowohl HA als auch 5FU haben Anti-Narben-Effekte im subkonjunktivalen Raum.

Patientenrekrutierung:

Die Patienten werden beim ersten postoperativen Besuch, bei dem eine 5-FU-Injektion gemäß den klinischen Parametern, die auf eine aktive Narbenbildung hindeuten, indiziert ist, rekrutiert und randomisiert. (normalerweise nach dem ersten postoperativen Monat, wenn die Nahtlyse abgeschlossen ist). Die gesamte postoperative Versorgung mit Ausnahme der Injektion von 5FU/viskoelastischem Gemisch in der Kontrollgruppe bleibt gegenüber den derzeitigen Behandlungsstandards unverändert.

Mindestens 50 Patienten, die sich einer Trabekulektomie am Singapore National Eye Centre unterzogen haben, werden in die Studie aus Glaukomkliniken des Singapore National Eye Centre rekrutiert. Dies wird aus verschiedenen Arten von Glaukom bestehen. 25 Patienten erhalten nach der Blasennadelung eine subkonjunktivale Injektion von 5 FU, während 25 Patienten Injektionen einer 5 FU/viskoelastischen Formulierung erhalten.

Patientenbeurteilung und Untersuchung zu Studienbeginn

Alle Patienten (Fälle und Kontrollen) werden wie folgt untersucht: Snellen-Sehschärfe, Spaltlampenuntersuchung des vorderen Segments, Blase und Augeninnendruckmessung mit einem Goldmann-Tonometer. Die Tonometrie wird auch vor der Injektion unter Verwendung eines Pneumatonometers (Reichert) gemäß den Richtlinien des Herstellers durchgeführt.

Farbfotos des Bläschens werden erfasst und für die Einstufung des maskierten Bläschens digital gespeichert. Das Visante OCT wird verwendet, um die Bläschenmorphologie unter dunklen Bedingungen abzubilden. Es ist ein neues berührungsloses Instrument, das schnell hochauflösende Bilder des Winkels erhält. Der Bilderfassungsscan dauert weniger als 10 Sekunden und ähnelt dem Aufnehmen eines Fotos. Das Gerät ermöglicht qualitative und quantitative Winkelaufnahmen, die objektiv und reproduzierbar sind. Dies findet vor dem Nadelvorgang statt.

Bleb Needling & subkonjunktivale Injektion

Nach Einholung der Einverständniserklärung des Patienten wird der Patient entweder der Fall- oder der Kontrollgruppe zugeordnet. Kurz gesagt, das Nadeln der Bindehautblase wird unter Verwendung einer aseptischen Technik an der Spaltlampe durchgeführt. Der Arzt, der das Verfahren durchführt, verwendet sterile Handschuhe und reinigt die Augenlider und die periorbitale Haut des Patienten mit Povidon-Jod 10 %. Das Auge wird mit Guttae Tetracaine 0,5 % betäubt und ein Drahtspekulum eingeführt, um die Augenlider zu trennen. Povidon-Jod wird in den Bindehautsack eingeführt. 0,1 ml Lignocain 2 % wird in den subkonjunktivalen Raum temporal oder nasal der Blase injiziert, bevor die Nadelung der Blase mit einer 27-Gauge-Nadel durchgeführt wird, die an einer 1-ml-Spritze befestigt ist. 5FU-Lösung (10 mg/ml) (Kontrollarm) oder 5FU/viskoelastische Formulierung (10 mg/ml von 5FU in 23 mg/ml HA, (50/50) Volumen/Volumen) (experimenteller Arm) wird nach der Nadelung hinter der Blase injiziert Komplett. Die Injektionen werden innerhalb desselben Quadranten wie die Blase verabreicht. Nach der Injektion wird der Bindehautsack gründlich gespült und erneut an der Spaltlampe untersucht. Der IOP wird am Ende des Eingriffs mit dem Goldmann-Tonometer und dem Pneumotonometer überprüft.

Die Patienten erhalten den aktuellen Behandlungsstandard in Bezug auf die intraoperative Antifibrosetherapie und den Zeitpunkt und die Häufigkeit der postoperativen 5-FU. Die weitere Verabreichung von subkonjunktivaler 5-FU-Lösung oder 5FU/HA-Formulierung (abhängig vom Behandlungsarm, dem der Patient ursprünglich zugewiesen wurde) bei späteren Arztbesuchen wird bei Bedarf gemäß der aktuellen klinischen Praxis für Patienten in beiden Behandlungsarmen verabreicht. Dies wird in der Studie festgehalten.

Nachuntersuchungen

Bei jedem Besuch, dh in Woche 1 und 12, wird eine Bleb-Bildgebung mit OCT- und IOP-Messungen des Visante-Vordersegments aufgezeichnet. Die Notwendigkeit einer weiteren Nadelung oder eines anderen Eingriffs, z. B. Massage/Nahtentfernung/Lyse (falls zutreffend), wird vom Augenarzt bei jedem Besuch klinisch entschieden, und vor allen zusätzlichen Verfahren, die in einen Forschungsbesuch fallen, dh Woche 1, wird eine Blasenbildgebung durchgeführt oder 12. Die Einstufung von Blasen anhand von Spaltlampenfotos wird zu Studienbeginn vor der Injektion und in Woche 12 durchgeführt.