Wpływ krótkoterminowego ograniczenia kalorii na aktywację komórek T w tłuszczu

Celem pracy jest zbadanie, czy właściwości immunometaboliczne tkanki tłuszczowej i znajdujących się w jej obrębie komórek zapalnych mogą być modyfikowane przez krótkotrwałe zmiany stanu odżywienia.

Po ogłoszeniu badania zainteresowani potencjalni uczestnicy zostaną poproszeni o skontaktowanie się z głównym badaczem w celu uzyskania dalszych informacji za pośrednictwem korespondencji e-mailowej/telefonicznej. Przeprowadzona zostanie wstępna ocena kwalifikowalności w oparciu o kryteria włączenia/wyłączenia, a jeśli te wymagania zostaną spełnione, potencjalny uczestnik zostanie zaproszony na spotkanie w celu dalszego omówienia badania. Po przeczytaniu arkusza informacyjnego dla uczestnika i obejrzeniu schematu blokowego przedstawiającego harmonogram badania, jeśli chcą wziąć udział, zostaną poproszeni o podpisanie formularza zgody. Następnie zostaną zaplanowane daty wstępnych pomiarów antropometrycznych, 1 tydzień monitorowania diety i aktywności fizycznej oraz 3 dni ograniczenia kalorii z datami prób po obu stronach.

Pomiary wstępne:

Wstępne badania obejmą antropometryczne pomiary wzrostu, masy ciała, obwodu talii i bioder, wysokości pasa w płaszczyźnie strzałkowej oraz ciśnienia krwi. Uczestnicy zostaną również poddani dokładnej ocenie składu ciała za pomocą absorpcjometru rentgenowskiego o podwójnej energii (DEXA). Pomiary te będą miały miejsce w laboratoriach University of Bath Physiology Laboratories.

Monitorowanie bilansu energetycznego:

Przez 1 tydzień uczestnicy będą wyposażeni w monitor aktywności fizycznej (Actiheart™) i poproszeni o zapisanie odpowiedniego dziennika swojej aktywności fizycznej w tym okresie, aby ułatwić jej interpretację i umożliwić dokładniejsze obliczenie średniego dziennego wydatku energetycznego związanego z aktywnością. Uczestnicy zostaną również poproszeni o odnotowanie spożycia posiłków i napojów w tym okresie, aby można było przeanalizować ich spożycie energii w tym okresie iw ten sposób oszacować ich „bilans energetyczny”. W tym okresie uczestnicy nie powinni dokonywać żadnych świadomych zmian w swoich normalnych nawykach/procedurach związanych ze stylem życia. Ta analiza zostanie następnie wykorzystana do napisania „recepty dietetycznej” na 3 dni, aby upewnić się, że uczestnik otrzyma 50% „normalnego” spożycia kalorii przy użyciu pokarmów, które normalnie spożywa.

Główny dzień próbny 1:

Na 2 dni przed pierwszym głównym dniem próby uczestnicy powinni powstrzymać się od wykonywania forsownej aktywności fizycznej. W ciągu ostatnich 24 godzin uczestnicy powinni również powstrzymać się od spożywania alkoholu i kofeiny. Uczestnicy powinni przybyć do Laboratorium Fizjologii Odpoczynku rano po 10-godzinnym poście (około 8 rano), gdzie zostanie zmierzone ciśnienie krwi i pobrana próbka śliny. Kaniula zostanie wprowadzona do żyły przedramienia i pobrane zostaną podstawowe próbki krwi do analizy markerów metabolicznych/zapalnych i izolacji limfocytów T. Próbka tłuszczu zostanie również pobrana techniką aspiracji igłowej. Następnie uczestnik zostanie poproszony o spożycie napoju zawierającego glukozę, składającego się z 75 g bezwodnej glukozy (113 ml Polycal i 87 ml wody) oraz próbki krwi z kaniuli pobieranej co 15 minut przez kolejne 2 godziny.

Interwencja - 3-dniowe ograniczenie kalorii:

Przez kolejne 3 dni uczestnicy zostaną poinstruowani, aby stosować dietę obliczoną na 50% ich „normalnego” spożycia energii poprzez zmniejszenie proporcji spożywanej normalnej diety. Uczestnik nie powinien wykonywać forsownej aktywności fizycznej przez ostatnie 2 dni tego 3-dniowego okresu, aw ostatnim dniu tej interwencji nie należy spożywać kofeiny ani alkoholu.

Główny dzień próbny 2:

Następnego dnia po 3 dniach ograniczenia kalorii uczestnicy przybędą do laboratorium o tej samej porze co pierwszego dnia głównego badania (aby zminimalizować różnice w czasie pobierania próbek) i zostaną poddani dokładnie tym samym procedurom.

Analiza:

W dniu badania krew pełna zostanie przeanalizowana pod kątem liczby białych krwinek. Próbki osocza i surowicy będą pobierane z krwi pełnej poprzez wirowanie i przechowywane w temperaturze -80 st. C. Monocyty i limfocyty T (populacje krwinek białych) również będą izolowane z krwi pełnej i przechowywane w celu późniejszej oceny zmian w ich proporcjach i aktywacji po okresie ograniczenia kalorii. W każdej próbce tłuszczu zostaną wyhodowane oddzielne części tkanki tłuszczowej lub adipocytów (wyizolowane z innych komórek tkanki tłuszczowej metodą trawienia) i pobrane pożywki do późniejszych badań. Pozostałe komórki z tkanki tłuszczowej (SVF) również będą przechowywane do późniejszej analizy populacji komórek i ich aktywacji za pomocą cytometrii przepływowej oraz analizy ekspresji/wydzielania. Ekspresja mRNA będzie również badana w tkance tłuszczowej.