Skuteczność leczenia transplantacji drobnoustrojów kałowych u osób dorosłych z atopowym zapaleniem skóry

Prospektywne, krzyżowe badanie kontrolowane placebo z pojedynczą ślepą próbą, przeprowadzone wśród dorosłych pacjentów cierpiących na atopowe zapalenie skóry (AZS) o nasileniu umiarkowanym do ciężkiego, niewystarczająco reagujących na leczenie miejscowe i ogólnoustrojowe. Wszyscy pacjenci otrzymują 2 przeszczepy placebo w odstępie 2 tygodni, a następnie 4 przeszczepy drobnoustrojów kałowych (FMT) od zdrowych dawców w odstępie 2 tygodni. Pacjentom pozwolono kontynuować podstawowe medyczne leczenie miejscowe, w tym środki nawilżające i glikokortykosteroidy, podczas okresu badania, ale nie rozpoczęto żadnej nowej terapii. Ciężkość AZS i profil mikrobiomu kałowego oceniano za pomocą punktacji Scoring Atopic Dermatitis Score (wynik SCORAD) oraz cotygodniowego stosowania miejscowych kortykosteroidów na początku badania, przed każdym FMT i 1-6 miesięcy po ostatnim FMT .

W okresie badania pacjenci mogli stosować wyłącznie terapię miejscową, w tym emolienty i glikokortykosteroidy lub inhibitory kalcyneuryny.

Przygotowanie i dostawa FMT:

Ochotniczymi dawcami były zdrowe, niebędące w ciąży osoby dorosłe w wieku od 18 do 50 lat, z prawidłowym wskaźnikiem masy ciała. Dawcy-wolontariusze zostali wykluczeni ze względu na istotną historię medyczną lub stosowanie antybiotyków w ciągu ostatnich 3 miesięcy. Kandydaci kwalifikowali się zgodnie z wytycznymi izraelskiego Ministerstwa Zdrowia, które obejmują badanie fizykalne i laboratoryjne testy przesiewowe, w tym patogeny jelitowe w kale, przeciwciała w surowicy przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu A, B i C; ludzki wirus niedoboru odporności; HTLV, Treponema pallidum oraz celiakia, CBC (oraz dodatkowe badania zgodne z wytycznymi izraelskiego Ministerstwa Zdrowia). Kał dostarczano w ciągu kilku minut po wypróżnieniu do czystego, zamkniętego plastikowego pojemnika i przetwarzano w banku stolca Centrum Medycznego w Tel Awiwie w celu przygotowania kapsułkowanego FMT. Pokrótce, materiał kałowy rozcieńczono normalną solanką (600 ml/100 g materiału kałowego), przesączono i zatężono preparat w wirówce. Osad zawieszono w sterylnej soli fizjologicznej i glicerolu (20%), który dodano jako bakteryjny środek krioochronny. Materiał ten następnie odpipetowano do kwasoodpornych kapsułek, które zamknięto, a następnie wtórnie uszczelniono dodatkowym zestawem kapsułek. Kapsułki przechowywano zamrożone w temperaturze -80°C. Kapsułki placebo były wizualnie identyczne i zawierały jedynie rozcieńczony glicerol.

Kapsułkowa procedura FMT:

FMT podawano w dwóch dawkach po 15 kapsułek FMT przez dwa kolejne dni (łącznie 30 kapsułek) w klinice bakterioterapii centrum medycznego w Tel Awiwie (TLVMC). W dniu podania kapsułki zamrożone w temperaturze -80°C wyjmowano z zamrażarki i transportowano do kliniki na lodzie. Pacjentowi wręczono pojedynczo piętnaście kapsułek i pacjent natychmiast połknął kapsułki, popijając niewielką ilością wody. Pacjentów poproszono o poszczenie przez noc przed przyjęciem kapsułki.

Analiza mikrobiologiczna kału:

Aby zbadać, czy w efekcie klinicznym może pośredniczyć kolonizacja nowych szczepów bakteryjnych, badacze opracowali solidną i czułą metodę obliczania parzystej odmienności sekwencji DNA między szczepami bakteryjnymi tego samego gatunku w różnych próbkach metagenomicznych. Próbki kału dawcy, które zostały użyte do kapsułek FMT i próbki kału pobrane od pacjentów w okresie badania, zostały zsekwencjonowane do odczytów metagenomicznych. Odczyty, które zostały zmapowane, zostały zebrane w stos, aby uzyskać informacje o wariantach dla każdego wykrytego gatunku. Różnica w wariancie określonego gatunku w danej pozycji między dwiema próbkami została zdefiniowana jako brak przecięcia między zestawem wykrytych alleli w dwóch porównywanych próbkach. Oszacowana odmienność sekwencji DNA gatunku dla pary próbek jest zatem liczbą różnych pozycji podzieloną przez całkowitą liczbę porównywanych pozycji.