Эффективность лечения фекальной микробной трансплантацией у взрослых с атопическим дерматитом

Проспективное одно-слепое плацебо-контролируемое перекрестное исследование среди взрослых пациентов, страдающих атопическим дерматитом (АД) средней и тяжелой степени, недостаточно поддающихся местному и системному лечению. Все пациенты получают 2 плацебо-трансплантации каждые 2 недели с последующим 4 фекальными микробными трансплантациями (FMT) от здоровых доноров каждые 2 недели. Пациентам было разрешено продолжать их базовое местное лечение, включая увлажнители и глюкокортикоиды, в течение периода исследования, но новая терапия не была начата. Тяжесть БА и профиль фекального микробиома оценивали по шкале оценки атопического дерматита (шкала SCORAD) и еженедельному применению топических кортикостероидов в начале исследования, перед каждой ТФМ и через 1-6 месяцев после последней ТФМ. .

В период исследования пациентам разрешалось использовать только местную терапию, включающую эмоленты и глюкокортикоиды или ингибиторы кальциневрина.

Подготовка и доставка FMT:

Добровольными донорами были здоровые небеременные взрослые в возрасте от 18 до 50 лет с нормальным индексом массы тела. Доноры-добровольцы были исключены из исследования из-за какой-либо серьезной истории болезни или любого использования антибиотиков в предшествующие 3 месяца. Кандидаты имели право на участие в соответствии с руководящими принципами Министерства здравоохранения Израиля, которые включают медицинский осмотр и лабораторные скрининговые тесты, включая фекальные кишечные патогены, сывороточные антитела к гепатитам A, B и C; Вирус иммунодефицита человека; HTLV и Treponema pallidum, а также целиакию, общий анализ крови (и дополнительные тесты, соответствующие рекомендациям Министерства здравоохранения Израиля). Стул был доставлен в течение нескольких минут после дефекации в чистом закрытом пластиковом контейнере и обработан в банке стула Тель-Авивского медицинского центра для приготовления капсулированного ТФМ. Вкратце, фекальный материал разбавляли физиологическим раствором (600 мл/100 г фекального материала), фильтровали и концентрировали препарат в центрифуге. Осадок суспендировали в стерильном физиологическом растворе и глицерине (20%), который добавляли в качестве бактериального криопротектора. Затем этот материал пипеткой помещали в кислотостойкие капсулы, которые закрывали, а затем вторично запечатывали дополнительным набором капсул. Капсулы хранили замороженными при -80°С. Капсулы плацебо имели идентичный внешний вид и содержали только разбавленный глицерин.

Капсулированная процедура FMT:

FMT вводили двумя дозами по 15 капсул FMT в течение двух дней подряд (всего 30 капсул) в клинике бактериотерапии Тель-Авивского медицинского центра (TLVMC). В день введения капсулы, замороженные при -80°С, доставали из морозильной камеры и транспортировали в клинику на льду. Пятнадцать капсул были переданы пациенту индивидуально, и пациент немедленно проглотил капсулы с небольшим количеством воды. Пациентов просили голодать в течение ночи перед приемом капсул.

Микробиологический анализ кала:

Чтобы выяснить, может ли клинический эффект быть опосредован колонизацией новых бактериальных штаммов, исследователи разработали надежный и чувствительный метод для расчета несхожести попарных последовательностей ДНК между бактериальными штаммами одного и того же вида в различных метагеномных образцах. Образцы стула доноров, которые использовались для капсул ТФМ, и образцы стула, которые были собраны у пациентов в течение периода исследования, были секвенированы в метагеномные чтения. Прочтения, которые были нанесены на карту, были сложены для получения информации о вариантах положения для каждого обнаруженного вида. Различие варианта конкретного вида в данной позиции между двумя выборками определялось как отсутствие пересечения между набором выявленных аллелей в двух сравниваемых выборках. Таким образом, предполагаемое несходство последовательностей ДНК видов для пары образцов равно количеству различных положений, деленному на общее количество сравниваемых положений.