Účinnost léčby fekální mikrobiální transplantací u dospělých s atopickou dermatitidou

Prospektivní jednoduše zaslepená, placebem kontrolovaná zkřížená studie, mezi dospělými pacienty trpícími středně těžkou až těžkou atopickou dermatitidou (AD), nedostatečně reagující na topickou a systémovou léčbu. Všichni pacienti dostanou 2 transplantace placeba každé 2 týdny od sebe, po nichž následují 4 fekální mikrobiální transplantace (FMT) od zdravých dárců každé 2 týdny od sebe. Pacientům bylo umožněno pokračovat ve své základní lékařské topické léčbě, včetně zvlhčovačů a glukokortikoidů, během období studie, ale nebyla zahájena žádná nová terapie. Závažnost AD a profil fekálního mikrobiomu byly hodnoceny skórem atopické dermatitidy (SCORAD skóre) a týdenním používáním topických kortikosteroidů na začátku studie, před každou FMT a 1–6 měsíců po poslední FMT .

Během období studie bylo pacientům povoleno používat pouze topickou terapii zahrnující změkčovadla a glukokortikoidy nebo inhibitory kalcineurinu.

Příprava a dodání FMT:

Dobrovolní dárci byli zdraví, netěhotní dospělí ve věku 18 až 50 let s normálním indexem tělesné hmotnosti. Dobrovolní dárci byli vyloučeni pro jakoukoli významnou zdravotní anamnézu nebo pro jakékoli užívání antibiotik v předchozích 3 měsících. Kandidáti byli způsobilí podle pokynů izraelského ministerstva zdravotnictví, které zahrnují fyzikální vyšetření a laboratorní screeningové testy včetně fekálních střevních patogenů, sérových protilátek proti hepatitidě A, B a C; virus lidské imunodeficience; HTLV a Treponema pallidum a také celiakie, CBC (a další testy, které jsou v souladu s pokyny izraelského ministerstva zdravotnictví). Stolice byla dodána během několika minut po defekaci v čisté uzavřené plastové nádobě a byla zpracována v zařízení banky stolice Tel Aviv Medical Center za účelem přípravy zapouzdřené FMT. Stručně, fekální materiál byl zředěn normálním fyziologickým roztokem (600 ml/100 g fekálního materiálu), filtrován a koncentrován přípravek v odstředivce. Peleta byla suspendována ve sterilním fyziologickém roztoku a glycerolu (20 %), který byl přidán jako bakteriální kryoprotektant. Tento materiál byl poté pipetován do kapslí odolných vůči kyselinám, které byly uzavřeny a poté sekundárně uzavřeny další sadou kapslí. Kapsle byly skladovány zmrazené při -80 °C. Placebo kapsle měly identický vzhled a obsahovaly pouze zředěný glycerol.

Postup FMT v kapsli:

FMT byl podáván ve dvou dávkách po 15 tobolkách FMT ve dvou po sobě jdoucích dnech (celkem 30 tobolek) na klinice bakterioterapie lékařského centra v Tel Avivu (TLVMC). V den podání byly kapsle zmrazené na -80 °C vyjmuty z mrazáku a přepraveny na kliniku na ledu. Patnáct tobolek bylo jednotlivě podáno pacientovi a pacient okamžitě spolkl tobolky s trochou vody. Pacienti byli požádáni, aby se přes noc před užitím kapslí hladověli.

Fekální mikrobiální analýza:

Aby bylo možné prozkoumat, zda může být klinický účinek zprostředkován kolonizací nových bakteriálních kmenů, výzkumníci vyvinuli robustní a citlivou metodu pro výpočet párové odlišnosti sekvence DNA mezi bakteriálními kmeny stejného druhu napříč různými metagenomickými vzorky. Vzorky stolice dárců, které byly použity pro kapsle FMT, a vzorky stolice, které byly odebrány pacientům během období studie, byly sekvenovány do metagenomických čtení. Údaje, které byly zmapovány, byly shromážděny, aby se získaly informace o variantách polohy pro každý detekovaný druh. Rozdíl ve variantě konkrétního druhu v dané poloze mezi dvěma vzorky byl definován jako bez průniku mezi sadou detekovaných alel ve dvou srovnávaných vzorcích. Odhadovaná druhová odlišnost sekvence DNA pro pár vzorků je pak počet různých pozic dělený celkovým počtem srovnávaných pozic.