Роль модифицированного ишемией альбумина у пациентов с COVID-19

Активация и дисфункция эндотелия связаны с тяжестью COVID-19. Эпидемиологические исследования показывают, что тяжелые случаи или смерти от COVID-19 часто сопровождаются сопутствующими заболеваниями, такими как пожилой возраст, гипертония, диабет и сердечно-сосудистые заболевания. Эндотелиальная дисфункция с последующим использованием комплемента, состояние гиперкоагуляции и продукция тромбина, по-видимому, являются общим знаменателем разновидностей клинических признаков и симптомов COVID-19, которые непосредственно связаны с тромбоэмболическими явлениями. Результаты вскрытия у пациентов с COVID-19 показали катастрофическое повреждение микрососудов, при этом легочный эндотелиит, тромбоз и ангиогенез являются отличительными патофизиологическими особенностями легких у пациентов с COVID-19 по сравнению с пациентами с H1N1 и неинфицированным контролем.

Венозная тромбоэмболия, которая может проявляться тромбозом глубоких вен (ТГВ) или легочной эмболией (ТЭЛА), часто возникает у пациентов с тяжелой формой COVID-19, несмотря на профилактическую антикоагулянтную терапию. ТЭЛА была обнаружена почти у 20% пациентов, несмотря на то, что они получали антикоагулянтную терапию. В другом исследовании вскрытие было проведено у 12 пациентов с COVID-19, которые получали антикоагулянты. ТГВ выявлен у 7 (58%) пациентов, хотя ни у одного из них не было клинического подозрения. ТЭЛА была ведущей причиной смерти у 4 пациентов. Венозный тромбоз встречается особенно часто (14–81%) у пациентов с COVID-19 в критическом состоянии, госпитализированных в отделения интенсивной терапии (ОИТ). Фактически ТЭЛА была зарегистрирована как наиболее частое тромботическое осложнение у этих пациентов с частотой до 81%. У госпитализированных пациентов с COVID-19 венозный тромбоз возникает реже (3-21%), в то время как для амбулаторных больных данных недостаточно. В дополнение к ТГВ, случаи острой ишемии верхней или нижней конечности с потенциальной необходимостью хирургического вмешательства также были зарегистрированы как менее распространенное артериальное тромботическое осложнение при COVID-19.

Кроме того, острая ишемия миокарда является наиболее частым сердечно-сосудистым осложнением COVID-19. Распространенность ишемии миокарда колеблется от 7% до 28%. Исследования коррелируют повышение уровня тропонина у госпитализированных пациентов с более тяжелым клиническим течением и худшим прогнозом.

Ишемический инсульт — еще одно распространенное внелегочное тромбоэмболическое осложнение COVID-19. Имеются сообщения об ишемическом инсульте как первом симптоме инфекции (проявляющемся особенно в виде тромбоза средней мозговой артерии даже у молодых пациентов) и как осложнении при госпитализации. В ретроспективных обсервационных исследованиях распространенность ишемического инсульта в этой популяции колеблется от 1,3% до 46%. Наиболее вероятным механизмом инсультов при COVID-19 считается последующая гиперкоагуляция и дисфункция эндотелия сосудов за счет активации воспалительных цитокинов.

Сывороточный альбумин человека представляет собой пептид, состоящий из 585 аминокислот, связанных в определенной последовательности у человека. Молекула модифицированного ишемией альбумина (IMA) была идентифицирована в начале 2000-х годов, когда было замечено, что ишемия, вызванная гипоксией, приводит к модификации молекулы циркулирующего альбумина. В условиях ишемии N-конец альбумина дифференцируется, возможно, в результате гипоксии, окисления, свободных радикалов и энергозависимых изменений мембран. Эту модификацию на N-конце альбумина можно оценить косвенно. Когда кобальт (in vitro) добавляется к ишемическому образцу, нормальные молекулы альбумина будут связываться с ним, оставляя небольшой процент свободным, в то время как IMA не может связываться с добавленным кобальтом из-за его модификации в месте связывания. Повышенное процентное содержание IMA приводит к большему количеству несвязанного кобальта, что можно обнаружить путем добавления хроматографического агента, такого как дитиотреит, и оценить фотоспектрометрически. Увеличение IMA обратно пропорционально количеству кобальта, что вызывает увеличение цветности продукта. Это основа теста на связывание альбумина и кобальта, теста ACB.

IMA изучался как индикатор сердечной ишемии, но также было обнаружено, что он повышен у пациентов с эндотелиальной дисфункцией, инфекциями и сепсисом. Он также увеличивается у больных с церебральной ишемией, тромбоэмболией легочной артерии, тромбозом глубоких вен, сердечной недостаточностью, ишемией кишечника и др. Значения ИМА имеют нормальное распределение в контрольной популяции и не связаны с возрастом и полом. IMA, который является единственным биомаркером ишемии, достигшим уровня клинической оценки, увеличивается в течение нескольких минут после начала ишемии независимо от пораженной ткани органа.

SuPAR (растворимый рецептор активации урокиназы плазминогена) представляет собой растворимую форму uPAR, белка, который в основном экспрессируется в клетках иммунной системы, включая нейтрофилы, активированные Т-лимфоциты и макрофаги. uPAR связывается с клеточной мембраной с помощью гликозилфосфатидилинозитола (GPI). Когда uPAR высвобождается из клеточной мембраны, он становится растворимым (SuPAR) и может быть измерен как стабильный белок в различных биологических жидкостях, таких как плазма, моча и спинномозговая жидкость. Уровни SuPAR у здоровых людей достаточно стабильны в крови и моче. Повышенные уровни SuPAR отражают активацию иммунной системы и оцениваются как показатель воспаления и повреждения органов при некоторых заболеваниях, включая COVID-19. Исследования концентрации SuPAR у 57 пациентов с пневмонией COVID-19 показали, что концентрации SuPAR были выше у пациентов, у которых в конечном итоге развилась тяжелая дыхательная недостаточность и им потребовалась искусственная вентиляция легких, по сравнению с пациентами, у которых не развилась тяжелая дыхательная недостаточность. В частности, концентрации, превышающие или равные 6 нг/мл, имели чувствительность 85,7% для прогнозирования неблагоприятного исхода даже за 12 дней до его возникновения. SuPAR, по-видимому, является важным инструментом стратификации риска у пациентов с COVID-19, поскольку он может на ранней стадии выявлять пациентов, у которых разовьется тяжелая дыхательная недостаточность или которым требуется искусственная вентиляция легких.

Поскольку это первое исследование IMA у пациентов с COVID-19, основная цель исследования — выяснить, будут ли уровни IMA при поступлении или на 10-й день от появления симптомов (пик симптомов) выше у пациентов с COVID-19. пневмонии по сравнению со здоровыми людьми. Вторичная цель состоит в том, чтобы оценить, может ли ИМА предсказать тяжелую дыхательную недостаточность и риск ухудшения состояния, а также повысит ли ее точность комбинация с SuPAR.

Участники: будут включены 2 учебные группы:

i) 128 пациентов с подтвержденным заболеванием COVID-19 (исследуемая группа, группа 1) ii) 64 здоровых добровольца без каких-либо критериев исключения (контрольная группа, группа 2) Пациенты из группы исследования будут разделены на две подгруппы, с тяжелым течением дыхательная недостаточность (PaO2/FiO2 <150 мм рт.ст.) и те, у кого нет тяжелой дыхательной недостаточности (PaO2/FiO2 >150 мм рт.ст.). смерть.

Тип исследования: это будет проспективное обсервационное исследование, которое будет проводиться в отделении пульмонологии/ковида-19 Университетской больницы общего профиля Ларисы.

Анализ мощности: для статистической мощности 90% с вероятностью α-ошибки 0,05 и соотношением Группа 1/Группа 2 2:1 было подсчитано, что необходимо 64 человека в контрольной группе (группа 2) и 128 человек в контрольной группе. учебная группа (группа 1).

Вмешательства: Образцы крови будут собираться при поступлении для измерения уровней IMA и SuPAR и на 10-й день с момента появления симптомов (пик симптомов) для уровня IMA.

Сбор образцов крови: Образцы будут собираться в пробирки для сбора крови, содержащие K2EDTA в качестве антикоагулянта, и пробирки с гелем для разделения сыворотки для анализов SuPAR и IMA соответственно. Образцы центрифугируют (при 3000 g в течение 10 минут) в течение первых 3 часов после отбора проб. Затем образцы плазмы и сыворотки помещают в пробирки Эппендорф и хранят при температуре -80°C.

Измерения IMA и SuPAR: уровни IMA будут определяться в соответствии с принципами анализа ACB с использованием имеющегося в продаже метода «Набор для анализа модифицированного альбумина ишемии» (Abbexa LTD, Кембридж, Великобритания) на автоматической аналитической системе Architect c8000 (Abbott, Великобритания). США). Уровни SuPAR будут определять с помощью количественного турбидиметрического иммуноанализа suPARnostic TurbiLatex (ViroGates A/S, Дания), также на автоматической аналитической системе Architect c8000.

Мониторинг/регистрация: демографические данные (возраст, пол, национальность), дата госпитализации, сопутствующие заболевания, лекарства, симптомы, жизненно важные показатели (частота сердечных сокращений, температура, артериальное давление, частота дыхания, насыщение артериальной крови кислородом и соотношение PaO2/FiO2), артериальная кровь газы (PaO2, PaCO2, pH, HCO3), молочная кислота, вирусная нагрузка по данным ОТ-ПЦР на SARS-COV2 и результаты визуализации и лабораторных исследований (гемоглобин, гематокрит, лейкоциты, нейтрофилы, лимфоциты, тромбоциты, протромбиновое время, МНО, АЧТВ, фибриноген, d-димеры, СРБ, ферритин, ЛДГ, тропонин, мочевина, креатинин, АСТ, АЛТ, ЩФ, КФК, калий, натрий, кальций, общий белок, альбумин, общий билирубин) будут зарегистрированы при поступлении.

Жизненно важные показатели (частота сердечных сокращений, температура, артериальное давление, частота дыхания, насыщение артериальной крови кислородом и соотношение PaO2/FiO2), лабораторные данные (как указано выше) и наличие каких-либо осложнений (пневмония, ОРДС, тромбоэмболия легочной артерии, инсульт, острая почечная недостаточность). недостаточность, полиорганная недостаточность, аритмии, шок, псевдомембранозный колит и др.) будут регистрироваться ежедневно.

Ожидаемые результаты: i) ожидается, что уровни IMA будут выше у пациентов с COVID-19 по сравнению со здоровыми добровольцами ii) уровни IMA при поступлении будут выше у пациентов, у которых разовьется тяжелая дыхательная недостаточность или с риском ухудшения состояния iii) уровни IMA при ожидается, что на 10-й день от появления симптомов будет выше у пациентов с тяжелой дыхательной недостаточностью и предскажет риск ухудшения с большей точностью iv) ожидается, что уровни SuPAR будут выше у пациентов с COVID-19 по сравнению со здоровыми добровольцами v) уровни SuPAR при поступлении Ожидается, что она будет выше у пациентов, у которых разовьется тяжелая дыхательная недостаточность или с риском ухудшения состояния. vi) Ожидается, что комбинация IMA и SuPAR повысит прогностическую точность SuPAR.

Насколько нам известно, это будет первое исследование модифицированного ишемией альбумина у пациентов с COVID-19. Прогноз является ключевым фактором принятия клинических решений. Если будет доказана корреляция между уровнями ИМА и неблагоприятным прогнозом, это станет полезным инструментом для стратификации риска у пациентов с COVID-19. Кроме того, сочетание биомаркера ишемии, такого как IMA, с биомаркером воспаления, таким как SuPAR, может быть ключом к этому подходу.