儿童肥胖的全外显子组测序

招生科目数：

由于我们的研究旨在确定与早发性肥胖相关的易感基因变异，因此除了我们在之前的研究中收集的现有 DNA 样本外，我们还将招募 400 名肥胖儿童参与这项基因研究 (DSRB Ref C/00/501 ). 这 400 名肥胖儿童将通过健康促进委员会的 NUH 儿科诊所和学校健康诊所招募。 我们还将招募有兴趣参加研究的肥胖儿童的家庭成员。 我们将使用 2000 年 1 月至 2004 年 12 月期间招募的 250 名肥胖儿童的 DNA 样本和信息 (DSRB Ref C/00/501)。 我们还将对 500 名精瘦的成年人（作为对照）进行 WES，这些成年人被招募用于一项名为“全外显子组测序以识别亚洲人群极度近视基因”（NUS-IRB 参考代码：12-466）的正在进行的研究。

新招募的肥胖儿童受试者总数：400 家庭成员总数（父母和兄弟姐妹）：500 现有肥胖儿童受试者总数：250 现有瘦成人对照受试者总数：500

招聘标准：

医生会问一些关于受试者的年龄和病史的简单问题。

肥胖者：10岁前超重，体重超过理想身高体重40%，或BMI年龄在97%以上，无重大疾病。

对于家庭成员：肥胖儿童的父母或直系兄弟姐妹（无选择标准） 对于对照组：正在进行研究的瘦成人（NUS-IRB 参考代码：12-466），BMI 在 18.5 kg/m2 和 23 kg/m2 之间

纳入标准：

肥胖受试者必须满足以下所有纳入标准才能参与本研究：

1. 理想的身高体重 (WFH) 至少为 140% 或 BMI 年龄在 97% 以上
2. 10岁前超重
3. 肥胖儿童受试者和法定代表人的知情同意，例如 父母

家庭成员必须满足以下所有纳入标准才能参与本研究：

1. 必须是肥胖受试者的父母或直系兄弟姐妹
2. 受试者和父母的知情同意 受试者年龄低于 21 岁

排除标准：

所有在基线时满足任何排除标准的受试者都将被排除在外：

1. 不适合血液检测和 OGTT 检测
2. 无知情同意

退出标准：

如果出现以下情况，研究可能会终止：

• 没有 OSHE 批准
• 没有 DSRB 批准
• 对受试者进行的任何不当程序的投诉
• 实验室毒性

考察访问和程序：

1. 筛查访问和程序 受试者将在 HPB 的学校健康诊所或 NUH 儿科诊所接受筛查。 将记录受试者的年龄、体重和身高。 只有那些医生确定身高的理想体重大于 140% 或年龄的 BMI 大于当地儿童人口的 97% 的人才会被邀请参加研究。 受试者持同意书获准回家，并在招募前3个月内回复。

2. 研究访问和程序 研究访问 1：受过培训的医生将对受试者的病史进行访谈并进行体格检查。 将从受试者（禁食过夜后）抽取 15ml 血液，用于测试肝脏面板、脂质面板、空腹胰岛素水平、空腹 C 肽水平。 受试者还将接受口服葡萄糖耐量试验 (OGTT)，在 OGTT 期间，将在 0 分钟和 120 分钟的时间间隔抽取 2ml 血液。 在 2 小时的 OGTT 期间，受试者将被要求填写 3 套关于动机水平、社会经济状况以及身体活动和饮食的问卷。

   肥胖受试者的家庭成员需要完成上述受试者的所有测试，但他们不需要接受 OGTT。

3. 最终研究访问：

   最终研究访问将安排在第一次访问后 2-3 周。 受试者的筛查报告将由受试者的主治医生进行审查和评估。

4. 研究后跟进和程序 受试者将能够保留一份他们的健康筛查测试报告的副本。 对于发现患有血脂异常、高血压、高体脂率、肝功能异常或糖耐量异常等疾病的受试者，他们将被转介到其他部门进行进一步检测和医疗救治，以确定结果措施。 通过基因测试发现具有罕见基因变异的受试者也将被召回进行进一步和重复的临床检查和测试。
5. 中止访视和程序 受试者可以随时自愿退出研究。 应受试者的要求，将丢弃受试者的生物样本。 但是，如果在研究健康检查期间发现患者患有任何其他并发症，他们将被告知并转介到其他部门进行治疗。

数据质量保证：

将患者数据电子输入系统将由 2 名研究协调员处理，他们将独立执行数据输入。 因此，每个受试者的数据将由 2 名独立的研究协调员输入系统两次。 我们将对每个主题的 2 个条目进行系统比较，以确保正确准确地输入主题的所有信息。 主要研究者还将每月通过系统进行随机检查，以确保数据质量。

数据输入和存储：

临床试验数据和问卷由受试者在纸上填写。 纸质文件将被转移或运回 PI 办公室，每个受试者的数据将由 2 名独立研究协调员以电子方式输入，以确保数据质量保证。 文件的所有电子输入只能在办公室内使用办公室计算机进行，所有纸质文件必须在一天结束时归还以进行锁定。 电子文档将受密码保护，纸质文档的纸质副本将存储在 PI 办公室的带锁钥匙柜中。 简要讨论将在何处输入数据（即这些条目是纸质的还是电子的）、存储和处理。

样本量的确定：

使用 Quanto（ver 1.2.4）进行功率计算。 为了在发现阶段以不同的 MAF (α=0.01) 检测奇数比为 2.0-5.0 的变体，400 名肥胖儿童的样本量约为 51% 至 98%，以检测具有较大影响的变体 (OR = 3.5) 在我们的发现阶段，MAF 分别在 0.5% 和 3.0% 之间 (α=0.01)。

统计和分析计划：

将使用 SPSS 在病例对照设计中测试所有优先的破坏性非同义变体的统计关联。 2 尾 Fisher 精确检验将用于 MAF < 3% 的变体和逻辑回归，将对 MAF ≥ 3% 的变体进行性别调整。 这些将使用 PLINK 完成。 我们还将使用 Sequencing Kernel Association Test (SKAT) 软件进行基因级负担测试。 所有单变体和基因水平的结果都将使用 Bonferonni 校正进行多次测试校正。 任何被预测工具 (Polyphen2) 识别为具有高度破坏性的变体（定义为废话、剪接位点和移码变化，严重破坏蛋白质结构）都将优先进行验证。

从头基因分型数据的统计分析将类似于主要目标 1。随后，我们将使用逆方差加权方法对发现和验证阶段的数据进行荟萃分析，假设固定效应模型，以得出总体汇总估计值和双侧 p 值。 将进行异质性检查（Cochran 的 Q 和 I2 指数），并且在检测到显着（Q p 值 <0.05 和/或 I2 指数 >40%）异质性的变体中，将以随机效应模式进行荟萃分析以及。

试用文件的保留：

所有参与者的记录，包括病史、临床报告、验血结果、调查问卷、OSHE 文件、IRB 文件和 DSRB 文件，将由主要研究者保存在其卡访问办公室的上锁柜中。 只有首席调查员才能持有钥匙并直接进入上锁柜。 这些文件将在研究结束后保留​​ 6 年。

对于首席研究员发起的试验：

必须向 HSA 报告所有意外且与研究药物相关的严重不良事件 (SAE)。

“严重的不良事件或严重的药物不良反应是在任何剂量下发生的任何不良医学事件：

• 结果死亡。
• 有生命危险（即刻死亡风险）。
• 需要住院治疗或延长现有住院治疗。
• 导致持续或严重的残疾/无能力。
• 导致先天性异常/出生缺陷。
• 是医学上重要的事件。

在确定事件是否为重要医学事件时，应进行医学和科学判断。 重要的医疗事件可能不会立即危及生命和/或导致死亡或住院。 但是，如果确定该事件可能危及受试者和/或可能需要干预以防止其他不良事件结果之一，则应将重要医疗事件报告为严重事件。”

将报告所有意外的和与研究药物相关的 SAE。 调查员有责任在第一次知道案件符合加速报告条件后的 15 个日历日内通知 HSA。 后续信息将在可用时积极寻求和提交。 对于致命或危及生命的病例，HSA 将尽快收到通知，但不得迟于首次得知病例符合条件后的 7 个日历日，然后在另外 8 个日历日内提交完整报告。