Sequenzierung des gesamten Exoms bei Fettleibigkeit im Kindesalter

Anzahl der einzuschreibenden Fächer:

Da unsere Studie darauf abzielt, anfällige genetische Varianten im Zusammenhang mit früh einsetzender Fettleibigkeit zu identifizieren, werden wir zusätzlich zu den vorhandenen DNA-Proben, die wir in einer früheren Studie (DSRB Ref C/00/501 ). Diese 400 fettleibigen Kinder werden über die Kinderklinik der NUH und die Schulgesundheitsklinik des Health Promotion Board rekrutiert. Wir werden auch Familienmitglieder der adipösen Kinder rekrutieren, die daran interessiert sind, an der Forschungsstudie teilzunehmen. Wir werden die DNA-Proben und Informationen von 250 adipösen Kindern verwenden, die zuvor von Januar 2000 bis Dezember 2004 für die Obesity Genetic Study (DSRB Ref C/00/501) rekrutiert worden waren. Wir werden WES auch an 500 schlanken Erwachsenen (als Kontrollen) durchführen, die für eine laufende Studie mit dem Titel „Whole Exom Sequencing to Identify Genes for Extreme Myopia in Asian Populations“ (NUS-IRB-Referenzcode: 12-466) rekrutiert wurden.

Gesamtzahl der neu zu rekrutierenden fettleibigen Kinder: 400 Gesamtzahl der Familienmitglieder (Eltern und Geschwister): 500 Gesamtzahl der zu verwendenden vorhandenen fettleibigen Kinder: 250 Gesamtzahl der vorhandenen schlanken erwachsenen Kontrollpersonen: 500

Kriterien für die Einstellung:

Der Arzt wird einige einfache Fragen zum Alter und zur Krankengeschichte der Probanden stellen.

Für fettleibige Personen: Übergewicht vor dem 10. Lebensjahr und das Körpergewicht liegt 40 % über dem idealen Körpergewicht für die Körpergröße oder dem BMI für ein Alter über dem 97. Perzentil ohne größere medizinische Erkrankung.

Für Familienmitglieder: Eltern oder direkte Geschwister adipöser Kinder (keine Auswahlkriterien) Für Kontrollen: Schlanke Erwachsene aus laufender Studie (NUS-IRB-Referenzcode: 12-466) mit einem BMI zwischen 18,5 kg/m2 und 23 kg/m2

Einschlusskriterien:

Das adipöse Subjekt muss alle der folgenden Einschlusskriterien erfüllen, um an dieser Studie teilnehmen zu können:

1. Ideales Körpergewicht für Körpergröße (WFH) von mindestens 140 % oder BMI für Alter über 97. Perzentil
2. Übergewicht vor dem 10. Lebensjahr
3. Einverständniserklärung sowohl von übergewichtigen Kindern als auch von gesetzlichen Vertretern, z. Eltern

Familienmitglieder müssen alle der folgenden Einschlusskriterien erfüllen, um an dieser Studie teilnehmen zu können:

1. Muss ein Elternteil oder direktes Geschwister des übergewichtigen Subjekts sein
2. Die Einverständniserklärung sowohl des Probanden als auch der Eltern ist unter 21 Jahre alt

Ausschlusskriterien:

Alle Probanden, die zu Studienbeginn eines der Ausschlusskriterien erfüllen, werden von der Teilnahme ausgeschlossen:

1. Ungeeignet für Bluttests und OGTT-Tests
2. Keine Einverständniserklärung

Auszahlungskriterien:

Die Studie kann abgebrochen werden, wenn:

• Keine OSHE-Zulassung
• Keine DSRB-Zulassung
• Beschwerden über unangemessene Verfahren, die an Probanden durchgeführt werden
• Toxizität im Labor

Studienbesuche und Verfahren:

1. Screening-Besuche und -Verfahren Der Proband wird in der Schulgesundheitsklinik der HPB oder der pädiatrischen Klinik der NUH untersucht. Alter, Gewicht und Größe des Probanden werden erfasst. Nur Personen, bei denen der Arzt ein ideales Körpergewicht von mehr als 140 % oder einen BMI für das Alter von mehr als 97 Perzentil der örtlichen Kinderpopulation festgestellt hat, werden zur Studie eingeladen. Das Subjekt darf mit dem Einwilligungsformular nach Hause gehen und innerhalb von 3 Monaten vor der Einstellung antworten.

2. Studienbesuche und Verfahren Studienbesuch 1: Der ausgebildete Arzt führt ein Gespräch über die Krankengeschichte des Probanden durch und führt eine körperliche Untersuchung durch. 15 ml Blut werden dem Probanden (nach nüchternem Fasten) zum Testen des Leber-Panels, des Lipid-Panels, des Nüchtern-Insulinspiegels, des Nüchtern-C-Peptid-Spiegels entnommen. Das Subjekt wird auch einem oralen Glukosetoleranztest (OGTT) unterzogen, bei dem 2 ml Blut sowohl in 0-Minuten- als auch in 120-Minuten-Zeitintervallen während des OGTT entnommen werden. Während des 2-stündigen OGTT müssen die Probanden 3 Fragebögen zu Motivationsniveau, sozioökonomischem Status und körperlicher Aktivität und Ernährung ausfüllen.

   Das Familienmitglied der fettleibigen Person muss alle Tests wie oben für die Person beschrieben durchlaufen, mit der Ausnahme, dass sie sich keinem OGTT unterziehen müssen.

3. Abschließender Studienbesuch:

   Der letzte Studienbesuch wird 2-3 Wochen nach dem ersten Besuch geplant. Der Untersuchungsbericht des Probanden wird vom behandelnden Arzt des Probanden gesichtet und bewertet.

4. Follow-up und Verfahren nach der Studie Der Proband kann eine Kopie seiner Gesundheits-Screening-Testberichte behalten. Patienten, bei denen festgestellt wird, dass sie an Erkrankungen wie Dyslipidämie, Bluthochdruck, hohem Körperfettanteil, Leberfunktionsstörungen oder Glukoseintoleranz leiden, werden zur Bestätigung der Ergebnismessungen an andere Abteilungen für weitere Tests und medizinische Betreuung überwiesen. Probanden, bei denen durch Gentests eine seltene genetische Variante festgestellt wurde, werden ebenfalls für weitere und wiederholte klinische Untersuchungen und Tests zurückgerufen.
5. Abbruch des Besuchs und Verfahren Die Probanden können jederzeit freiwillig von der Teilnahme an der Studie zurücktreten. Die biologischen Proben des Probanden werden auf Wunsch des Probanden entsorgt. Wenn jedoch während des Studiengesundheitsscreenings andere Komplikationen festgestellt werden, wird der Patient beraten und an andere Abteilungen zur medizinischen Behandlung überwiesen.

Datenqualitätssicherung:

Die elektronische Eingabe der Patientendaten in das System erfolgt durch 2 Forschungskoordinatoren, die die Dateneingabe eigenständig durchführen. Daher werden die Daten jedes Fachs von den 2 unabhängigen Forschungskoordinatoren zweimal in das System eingegeben. Wir werden einen Systemvergleich zwischen den 2 Einträgen pro Fach durchführen, um sicherzustellen, dass alle Informationen des Fachs richtig und genau eingegeben wurden. Zur Sicherung der Datenqualität wird der Studienleiter das System außerdem jeden Monat stichprobenartig überprüfen.

Dateneingabe und -speicherung:

Die klinischen Testdaten und der Fragebogen werden von den Probanden auf Papier eingegeben. Die Papierdokumentationen werden zum Büro des PI übertragen oder zurücktransportiert und die Daten jedes Probanden werden von 2 unabhängigen Forschungskoordinatoren elektronisch eingegeben, um die Datenqualitätssicherung zu gewährleisten. Alle elektronischen Eingaben der Dokumentationen können nur innerhalb des Büros mit dem Bürocomputer durchgeführt werden, und alle Papierdokumente müssen am Ende des Tages zum Verschließen zurückgegeben werden. Die elektronischen Dokumentationen sind passwortgeschützt und die gedruckten Kopien der Papierdokumentationen werden in einem Schrank mit Schloss und Schlüssel im Büro von PI aufbewahrt. Besprechen Sie kurz, wo Daten eingegeben werden (d. h. werden diese Eingaben auf Papier oder elektronisch erfolgen), gespeichert und verarbeitet werden.

Bestimmung der Stichprobengröße:

Leistungsberechnungen wurden mit Quanto (Version 1.2.4) durchgeführt. Um Varianten mit einer Potenz von ungeraden Verhältnissen von 2,0-5,0 in der Entdeckungsphase bei variierendem MAF (α = 0,01) zu erkennen, beträgt die Stichprobengröße von 400 fettleibigen Kindern etwa 51 % bis 98 % Power, um Varianten mit großen Effekten zu erkennen (OR = 3.5) in unserer Entdeckungsphase bei MAF zwischen 0,5 % bzw. 3,0 % (α=0,01).

Statistische und analytische Pläne:

Alle priorisierten schädlichen nicht-synonymen Varianten werden in einem Fall-Kontroll-Design mit SPSS auf statistische Assoziation getestet. Für Varianten mit MAF < 3 % wird der zweiseitige exakte Fisher-Test verwendet, und für Varianten mit MAF ≥ 3 % wird eine geschlechtsspezifische logistische Regression durchgeführt. Diese werden mit PLINK durchgeführt. Wir werden auch Belastungstests auf Genebene mit der Software Sequencing Kernel Association Test (SKAT) durchführen. Alle Einzelvarianten- und Gen-Level-Ergebnisse werden für mehrere Tests mit einer Bonferonni-Korrektur korrigiert. Alle Varianten, die vom Vorhersagetool (Polyphen2) als stark störend identifiziert werden (definiert als Unsinn, Spleißstellen- und Frameshift-Änderungen, die die Proteinstruktur ernsthaft stören), werden für Validierungen priorisiert.

Statistische Analysen von De-novo-Genotypisierungsdaten werden denen in primärem Ziel 1 ähnlich sein. Anschließend werden wir Daten aus der Entdeckungs- und Validierungsphase unter Verwendung einer inversen varianzgewichteten Methode unter der Annahme eines Fixed-Effect-Modells meta-analysieren, um einen Gesamtpool abzuleiten Schätzungen und zweiseitige p-Werte. Es werden Heterogenitätsprüfungen durchgeführt (Cochrans Q- und I2-Indizes), und bei Varianten, bei denen eine signifikante (Q p-Wert < 0,05 und/oder I2-Index > 40 %) Heterogenität festgestellt wird, wird die Metaanalyse im Random-Effects-Modus durchgeführt auch.

AUFBEWAHRUNG VON STUDIENUNTERLAGEN:

Die Aufzeichnungen für alle Teilnehmer, die die Krankengeschichte, den klinischen Bericht, die Bluttestergebnisse, den Fragebogen, die OSHE-Dokumentation, die IRB-Dokumentation und die DSRB-Dokumentation enthalten, werden vom Hauptprüfarzt in einem abschließbaren Schrank in seinem Kartenzugangsbüro aufbewahrt. Nur der Hauptermittler hält den Schlüssel und hat direkten Zugang zum Schließfach. Diese Unterlagen werden für einen Zeitraum von 6 Jahren nach Abschluss des Forschungsstudiums aufbewahrt.

Für vom Hauptprüfarzt initiierte Studien:

Alle schwerwiegenden unerwünschten Ereignisse (SAEs), die unerwartet auftreten und mit dem Studienmedikament zusammenhängen, müssen HSA gemeldet werden.

„Ein schwerwiegendes unerwünschtes Ereignis oder eine schwerwiegende unerwünschte Arzneimittelwirkung ist jedes unerwünschte medizinische Ereignis bei einer beliebigen Dosis, das:

• Führt zum Tod.
• Lebensbedrohlich ist (unmittelbare Todesgefahr).
• Erfordert einen stationären Krankenhausaufenthalt oder die Verlängerung eines bestehenden Krankenhausaufenthalts.
• Führt zu anhaltender oder erheblicher Behinderung/Unfähigkeit.
• Führt zu angeborener Anomalie/Geburtsfehler.
• Ist ein medizinisch wichtiges Ereignis.

Bei der Bestimmung, ob ein Ereignis ein wichtiges medizinisches Ereignis ist, sollte medizinisches und wissenschaftliches Urteilsvermögen ausgeübt werden. Ein wichtiges medizinisches Ereignis ist möglicherweise nicht unmittelbar lebensbedrohlich und/oder führt zum Tod oder Krankenhausaufenthalt. Wenn jedoch festgestellt wird, dass das Ereignis den Probanden gefährden kann und/oder ein Eingreifen erforderlich machen kann, um eines der anderen unerwünschten Ereignisse zu verhindern, sollte das wichtige medizinische Ereignis als schwerwiegend gemeldet werden.“

Alle unerwarteten SUEs, die mit dem Studienmedikament zusammenhängen, werden gemeldet. Der Ermittler ist dafür verantwortlich, die HSA spätestens 15 Kalendertage nach der ersten Kenntnis darüber zu informieren, dass der Fall für eine beschleunigte Berichterstattung in Frage kommt. Folgeinformationen werden aktiv gesucht und übermittelt, sobald sie verfügbar sind. Bei tödlichen oder lebensbedrohlichen Fällen wird die HSA so schnell wie möglich benachrichtigt, jedoch nicht später als 7 Kalendertage nach der ersten Kenntnis, dass ein Fall in Frage kommt, gefolgt von einem vollständigen Bericht innerhalb von 8 weiteren Kalendertagen.