Aktivace kožního zánětu v kůži pacientů s Hidradenitis suppurativa

Cílem je ex vivo zkoumat zánětlivou odpověď u hidradenitis suppurativa (aktivace zánětlivého zánětu, role prozánětlivých cytokinů) v kůži pacientů léčených chirurgicky pro toto onemocnění.

Vyšetřovatelé předpokládají, že cytokiny odvozené od Th17, zejména IL-17, by mohly sloužit jako relé v zánětlivém procesu vedoucím k závažnosti HS a recidivám. Aby tento návrh splnili, zaměří se výzkumníci na prokázání a charakterizaci přítomnosti zánětlivého zánětu spojeného s HS nemoc - hypotéza Je široce přijímáno, že hyperkeratinizace a folikulární okluze jsou původci jejich infekce způsobující zánět kůže. Badatelé zde předpokládali, že nebezpečné signály odvozené od hostitele vedly k uvolnění zánětlivých mediátorů, jako je IL-1β, aktivací zánětlivé struktury.

Inflammasom je molekulární platforma řídící expresi a aktivaci IL-lp prostřednictvím různých senzorů. Prozánětlivý cytokin IL-lp by mohl následně vést k náboru a orientaci lymfocytů směrem k podtypu Th17 vytvářející zpětnovazební smyčku udržující nadměrný zánět tkáně u HS.

Pokud je u HS přítomen takový komplexní zánětlivý proces, blokování jak bakteriálně indukovaného (IL-1 β) tak i sterilně asociovaného (IL-17) zánětu by do značné míry zlepšilo terapeutický přínos pro pacienty s HS.

- Experimentální přístup

Výzkumníci se budou snažit zdůraznit přítomnost zánětlivých senzorů a efektorů v kožních explantátech z HS ve srovnání s kontrolní kůží. Pro tuto původní fyziopatologickou studii bude vyšetřeno 10 lézí vyříznutých pacientům s HS nebo kontrolám (plastická chirurgie) poté, co podepsali informovaný souhlas, jak to vyžaduje etická komise (CPP přijato 23. 1. 2015). Závažnost onemocnění HS bude založena na stagingu podle Hurleyho stagingu. Z kontrolních explantátů a z míst in situ i peri-lezionálních kožních explantátů HS budou odebrány šestimilimetrové kožní děrovače. Se vzorky kůže se bude manipulovat buď přímo (den 0), nebo po období tkáňové kultury 4 dny s ošetřením nebo bez ošetření.

Všechny experimenty budou provedeny následovně:

• Ex vivo vzorky kožní tkáně budou vloženy do filtru Transwell® a kultivovány po dobu 4 dnů s antibiotiky nebo bez antibiotik (Rifampicin, Clindamycin).

• V den 0 i den 4:

  • jedna sada vzorků kůže bude vložena pro analýzu přítomnosti zánětlivých senzorů a efektorů pomocí imunohistochemie (IHC)
  • Další sada bude homogenizována pro stanovení cytokinů (ELISA) a buněčnou stimulaci (viz níže)
• Homogenizované vzorky budou nebo nebudou ošetřeny anticytokinovými protilátkami (Secukinumab vs izotyp) po dobu 4 hodin před přidáním do keratinocytové buněčné linie nebo monocytové/makrofágové buněčné linie. Vliv IL-17 a bakteriální infekce na aktivaci zánětu v těchto buněčných liniích bude zkoumán, jak je popsáno výše a spojeno s technikou PCR.