Activación de un inflamasoma cutáneo en la piel de pacientes con hidradenitis supurativa

El objetivo es investigar ex vivo la respuesta inflamatoria en la hidradenitis supurativa (activación de un inflamasoma, papel de las citoquinas proinflamatorias) en la piel de pacientes tratados quirúrgicamente por esta enfermedad.

Los investigadores plantean la hipótesis de que las citoquinas derivadas de Th17, especialmente la IL-17, podrían actuar como un relevo en el proceso inflamatorio que conduce a la gravedad y las recurrencias de la HS. Para cumplir con esta propuesta, los investigadores intentarán demostrar y caracterizar la presencia de un inflamasoma asociado a Enfermedad de HS - Hipótesis Está ampliamente aceptado que la hiperqueratinización y la oclusión folicular originan la infección del mismo provocando inflamación de la piel. Los investigadores plantearon la hipótesis de que las señales de peligro derivadas del huésped conducían a la liberación de mediadores inflamatorios como la IL-1β mediante la activación de una estructura de inflamasoma.

El inflamasoma es una plataforma molecular que controla la expresión y la activación de IL-1β a través de diferentes sensores. La citocina proinflamatoria IL-1β podría conducir posteriormente al reclutamiento y la orientación de los linfocitos hacia un subtipo Th17 creando un circuito de retroalimentación que mantiene la inflamación excesiva del tejido en la HS.

Si un proceso inflamatorio tan complejo está presente en la HS, el bloqueo de la inflamación inducida por bacterias (IL-1 β) y asociada a la esterilidad (IL-17) mejoraría en gran medida el beneficio terapéutico para los pacientes con HS.

- Enfoque experimental

Los investigadores buscarán resaltar la presencia de sensores y efectores del inflamasoma en explantes de piel de HS en comparación con la piel de control. Para este estudio fisiopatológico original, se investigarán 10 pieles lesionales extirpadas de pacientes con HS o controles (cirugía plástica) después de que hayan firmado el consentimiento informado requerido por la junta de revisión ética (CPP aceptado el 23-01-2015). La gravedad de la enfermedad de HS se basará en la estadificación según la estadificación de Hurley. Se obtendrán perforaciones de piel de seis mm de explantes de control y de sitios tanto in situ como perilesionales de explantes de piel HS. Las muestras de piel se manipularán directamente (día 0) o después de un período de cultivo de tejido de 4 días con o sin tratamientos.

Todos los experimentos se llevarán a cabo de la siguiente manera:

• Las muestras de tejido de piel ex vivo se insertarán en un filtro Transwell® y se cultivarán durante un período de 4 días con o sin antibióticos (rifampicina, clindamicina).

• Tanto en el día 0 como en el día 4:

  • se incrustará un conjunto de muestras de piel para analizar la presencia de sensores y efectores del inflamasoma mediante inmunohistoquímica (IHC)
  • Se homogeneizará otro conjunto para la determinación de citoquinas (ELISA) y la estimulación celular (ver más abajo)
• Las muestras homogeneizadas serán tratadas o no con anticuerpos anti-citocina (Secukinumab vs isotipo) durante 4 horas antes de la adición a la línea celular de queratinocitos oa la línea celular de monocitos/macrófagos. La influencia de la IL-17 y la infección bacteriana sobre la activación del inflamasoma en estas líneas celulares se investigará como se describe anteriormente y se asociará con la técnica de PCR.