Ativação de Inflamassoma Cutâneo na Pele de Pacientes com Hidradenite Supurativa

O objetivo é investigar ex vivo a resposta inflamatória na hidradenite supurativa (ativação de um inflamassoma, papel de citocinas pró-inflamatórias) na pele de pacientes tratados cirurgicamente para esta doença.

Os investigadores levantam a hipótese de que as citocinas derivadas de Th17, especialmente a IL-17, poderiam servir como um relé no processo inflamatório levando à gravidade e recorrências da HS. Doença HS - Hipótese É amplamente aceito que a hiperqueratinização e a oclusão folicular originam sua infecção causando inflamação da pele. Os pesquisadores levantaram a hipótese de que os sinais de perigo derivados do hospedeiro levaram à liberação de mediadores inflamatórios, como IL-1β, ativando uma estrutura do inflamassoma.

O inflamassoma é uma plataforma molecular que controla a expressão e a ativação da IL-1β por meio de diferentes sensores. A citocina pró-inflamatória IL-1β poderia subsequentemente levar ao recrutamento e orientação de linfócitos para um subtipo Th17, criando um ciclo de feedback mantendo a inflamação tecidual excessiva na HS.

Se um processo inflamatório tão complexo estiver presente na HS, bloquear tanto a inflamação induzida por bactérias (IL-1 β) quanto a inflamação associada ao estéril (IL-17) melhoraria amplamente o benefício terapêutico para pacientes com HS.

- Abordagem experimental

Os investigadores procurarão destacar a presença de sensores e efetores do inflamassoma em explantes de pele de HS em comparação com a pele de controle. Para este estudo fisiopatológico original, serão investigadas 10 peles lesionais excisadas de pacientes com HS ou controles (cirurgia plástica) após a assinatura do consentimento informado exigido pelo conselho de ética (CPP aceito em 23-01-2015). A gravidade da doença de HS será baseada no estadiamento de acordo com o estadiamento de Hurley. Punções de pele de seis mm serão colhidas de explantes de controle e de locais in situ e perilesional de explantes de pele HS. As amostras de pele serão manuseadas diretamente (dia 0) ou após um período de cultura de tecidos de 4 dias com ou sem tratamentos.

Todos os experimentos serão conduzidos da seguinte forma:

• Amostras de tecido cutâneo ex vivo serão inseridas em um filtro Transwell® e cultivadas por um período de 4 dias com ou sem antibióticos (Rifampicina, Clindamicina).

• Tanto no dia 0 quanto no dia 4:

  • um conjunto de amostras de pele será incorporado para analisar a presença de sensores e efetores do inflamassoma por imuno-histoquímica (IHC)
  • Outro conjunto será homogeneizado para determinação de citocinas (ELISA) e estimulação celular (ver abaixo)
• Amostras homogeneizadas serão tratadas ou não com anticorpos anti-citocina (Secukinumab vs isotipo) por 4 horas antes da adição à linha celular de queratinócitos ou linhagem celular de monócitos/macrófagos. A influência da IL-17 e da infecção bacteriana na ativação do inflamassoma nessas linhagens celulares será investigada conforme descrito acima e associada à técnica de PCR.