Aktivierung eines kutanen Inflammasoms in der Haut von Hidradenitis suppurativa-Patienten

Ziel ist es, ex vivo die Entzündungsreaktion bei Hidradenitis suppurativa (Aktivierung eines Inflammasoms, Rolle entzündungsfördernder Zytokine) in der Haut von Patienten zu untersuchen, die wegen dieser Krankheit chirurgisch behandelt wurden.

Die Forscher gehen davon aus, dass von Th17 abgeleitete Zytokine, insbesondere IL-17, als Relais im Entzündungsprozess dienen könnten, der zu Schweregrad und Rezidiven von HS führt HS-Krankheit – Hypothese Es ist allgemein anerkannt, dass Hyperkeratinisierung und follikulärer Verschluss eine Infektion davon hervorrufen, die eine Hautentzündung verursacht. Die Forscher stellten hier die Hypothese auf, dass vom Wirt stammende Gefahrensignale durch Aktivierung einer Inflammasomstruktur zur Freisetzung von Entzündungsmediatoren wie IL-1β führten.

Das Inflammasom ist eine molekulare Plattform, die die Expression und Aktivierung von IL-1β über verschiedene Sensoren steuert. Das proinflammatorische Zytokin IL-1β könnte anschließend zur Rekrutierung und Orientierung von Lymphozyten in Richtung eines Th17-Subtyps führen, wodurch eine Rückkopplungsschleife entsteht, die eine übermäßige Gewebeentzündung bei HS aufrechterhält.

Wenn ein solch komplexer Entzündungsprozess bei HS vorliegt, würde das Blockieren sowohl der bakteriell induzierten (IL-1β) als auch der steril-assoziierten (IL-17) Entzündung den therapeutischen Nutzen für HS-Patienten erheblich verbessern.

- Experimenteller Ansatz

Die Forscher werden versuchen, das Vorhandensein von Inflammasom-Sensoren und -Effektoren in Hautexplantaten von HS im Vergleich zu Kontrollhaut hervorzuheben. Für diese ursprüngliche physiopathologische Studie werden 10 Läsionshäute untersucht, die von HS-Patienten oder Kontrollpersonen (plastische Chirurgie) entfernt wurden, nachdem sie die vom Ethikausschuss (CPP angenommen am 23.01.2015) geforderte Einverständniserklärung unterzeichnet hatten. Der Schweregrad der HS-Erkrankung basiert auf der Stadieneinteilung gemäß der Hurley-Einstufung. 6-mm-Hautstanzen werden von Kontrollexplantaten und von sowohl in situ als auch periläsionalen Stellen von HS-Hautexplantaten geerntet. Hautproben werden entweder direkt (Tag 0) oder nach einer Zeit der Gewebekultur von 4 Tagen mit oder ohne Behandlungen behandelt.

Alle Experimente werden wie folgt durchgeführt:

• Ex-vivo-Hautgewebeproben werden in einen Transwell®-Filter eingebracht und über einen Zeitraum von 4 Tagen mit oder ohne Antibiotika (Rifampicin, Clindamycin) kultiviert.

• Sowohl am Tag 0 als auch am Tag 4:

  • Ein Satz Hautproben wird eingebettet, um das Vorhandensein von Inflammasom-Sensoren und -Effektoren durch Immunhistochemie (IHC) zu analysieren.
  • Ein weiterer Satz wird für die Zytokinbestimmung (ELISA) und die Zellstimulation (siehe unten) homogenisiert.
• Homogenisierte Proben werden vor der Zugabe zur Keratinozyten-Zelllinie oder Monozyten-/Makrophagen-Zelllinie 4 Stunden lang mit Anti-Zytokin-Antikörpern (Secukinumab vs. Isotyp) behandelt oder nicht. Der Einfluss von IL-17 und bakterieller Infektion auf die Inflammasom-Aktivierung in diesen Zelllinien wird wie oben beschrieben untersucht und mit der PCR-Technik in Verbindung gebracht.