Aktywacja skórnego inflammasomu w skórze pacjentów Hidradenitis Suppurativa

Celem pracy jest zbadanie ex vivo odpowiedzi zapalnej w hidradenitis suppurativa (aktywacja inflammasomu, rola cytokin prozapalnych) w skórze pacjentów leczonych operacyjnie z powodu tej choroby.

Badacze postawili hipotezę, że cytokiny pochodzące z Th17, zwłaszcza IL-17, mogą służyć jako przekaźnik w procesie zapalnym prowadzącym do ciężkości i nawrotów HS. Aby zrealizować tę propozycję, badacze będą dążyć do wykazania i scharakteryzowania obecności inflammasomu związanego z Choroba HS - Hipoteza Powszechnie przyjmuje się, że hiperkeratynizacja i okluzja mieszków włosowych są przyczyną ich infekcji powodującej stany zapalne skóry. Badacze postawili tutaj hipotezę, że sygnały zagrożenia pochodzące od gospodarza doprowadziły do ​​​​uwolnienia mediatorów stanu zapalnego, takich jak IL-1β, poprzez aktywację struktury inflamasomu.

Inflamasom jest platformą molekularną kontrolującą ekspresję i aktywację IL-1β za pośrednictwem różnych czujników. Prozapalna cytokina IL-1β może następnie prowadzić do rekrutacji i orientacji limfocytów w kierunku podtypu Th17, tworząc pętlę sprzężenia zwrotnego utrzymującą nadmierne zapalenie tkanki w HS.

Jeśli taki złożony proces zapalny jest obecny w HS, blokowanie zarówno bakteryjnego (IL-1 β), jak i sterylnego zapalenia (IL-17) znacznie poprawiłoby korzyści terapeutyczne dla pacjentów z HS.

- Podejście eksperymentalne

Badacze będą starali się podkreślić obecność czujników i efektorów inflamasomu w eksplantatach skóry z HS w porównaniu ze skórą kontrolną. W tym oryginalnym badaniu fizjopatologicznym zbadanych zostanie 10 zmian skórnych wyciętych od pacjentów z HS lub z grupy kontrolnej (chirurgia plastyczna) po podpisaniu przez nich świadomej zgody zgodnie z wymaganiami komisji etycznej (CPP zaakceptowane 23-01-2015). Nasilenie choroby HS będzie oparte na stopniowaniu według stopnia zaawansowania Hurleya. Z eksplantatów kontrolnych oraz miejsc in situ i okołozmianowych eksplantatów skórnych HS zostanie pobranych sześć milimetrowych stempli skórnych. Próbki skóry będą przetwarzane od razu (dzień 0) lub po 4-dniowym okresie hodowli tkankowej z zabiegami lub bez.

Wszystkie eksperymenty zostaną przeprowadzone w następujący sposób:

• Próbki tkanek skóry ex vivo zostaną umieszczone w filtrze Transwell® i hodowane przez okres 4 dni z lub bez antybiotyków (ryfampicyna, klindamycyna).

• Zarówno w dniu 0, jak iw dniu 4:

  • jeden zestaw próbek skóry zostanie osadzony w celu analizy obecności czujników i efektorów inflamasomu metodą immunohistochemiczną (IHC)
  • Kolejny zestaw zostanie poddany homogenizacji w celu oznaczenia cytokin (ELISA) i stymulacji komórek (patrz poniżej)
• Zhomogenizowane próbki będą traktowane lub nie przez 4 godziny przed dodaniem do linii komórkowej keratynocytów lub linii komórkowej monocytów/makrofagów przeciwciałami przeciw cytokinom (Secukinumab vs izotyp). Wpływ IL-17 i zakażenia bakteryjnego na aktywację inflamasomu w tych liniach komórkowych będzie badany jak opisano powyżej iw powiązaniu z techniką PCR.