Přístupy celoústní léčby u těžké chronické parodontitidy.

Studijní populace a klinické vyšetření

Do studie bylo přijato 60 po sobě jdoucích pacientů s těžkou chronickou parodontitidou.

Klinické parodontální vyšetření celých úst zahrnovalo měření hloubky sondování, úrovně klinického úponu a indexu plaku na 6 místech na zub, kromě třetích molárů. Index papilárního krvácení byl zaznamenáván pro celou dutinu ústní. Klinické periodontální parametry byly zaznamenávány na začátku a 1 měsíc, 3 měsíce a 6 měsíců po léčbě. Alveolární kostní ztráta byla hodnocena pomocí digitálního panoramatického rentgenového snímku u každého účastníka.

Diagnóza těžké chronické parodontitidy byla založena na klinických a radiografických diagnostických kritériích navržených v roce 1999 International Workshop for a Classification of Parodontal Diseases and Conditions. Tito jedinci měli minimálně čtyři nesousedící zuby s místy s PD ≥6 mm a CAL ≥5 mm. Měli také ≥50% ztrátu alveolární kosti v alespoň dvou kvadrantech, která byla úměrná množství akumulace plaku.

Všechna klinická měření, GCF a odběr vzorků plaku a také všechna ošetření byla provedena stejným kalibrovaným a vyškoleným zkoušejícím (B.A.) standardizovaným způsobem (jednoduše zaslepená studie).

Léčba

Při základní návštěvě, bezprostředně před nechirurgickou periodontální léčbou, byly pacientovi odebrány vzorky GCF a subgingiválního plaku a ve všech skupinách byla zaznamenána klinická měření parodontu.

Ve skupině Q-SRP byly SRP zahájeny v pravém horním kvadrantu a pokračovaly ve směru hodinových ručiček po čtyři návštěvy v 1-týdenních intervalech. SRP byla provedena s použitím sortimentu manuálních parodontálních kyret. Povrchy zubů byly instrumentovány, dokud nebyly vizuálně a hmatově zbaveny všech usazenin. Opakovaná vyšetření byla provedena 1, 3 a 6 měsíců po dokončení SRP v pravém dolním kvadrantu.

Ve skupině FMUD byl subgingivální debridement proveden v horní čelisti při dopoledním sezení a v dolní čelisti při odpoledním sezení. Procedura byla dokončena ve dvou návštěvách (s intervalem 45 minut) téhož dne. Všechna periodontální místa byla debrideována piezokeramickým ultrazvukovým přístrojem s neupravenými a upravenými vložkami. Každý zub byl instrumentován, dokud povrch kořene nebyl vizuálně a na dotek čistý a hladký. Opakovaná vyšetření byla provedena 1, 3 a 6 měsíců po dokončení celoústního subgingiválního debridmana.

Ve skupině FMD byl ultrazvukový subgingivální debridman kombinován s intenzivním antimikrobiálním režimem s chlorhexidinem. Hřbet jazyka byl otírán 1% chlorhexidinovým gelem po dobu 1 minuty. Pacienti byli instruováni, aby se dvakrát oplachovali po dobu 1 minuty 0,2% roztokem chlorhexidinu. Každá mandle byla postříkána čtyřikrát sprejem 0,2% chlorhexidinu. Opakované subgingivální výplachy 1% chlorhexidinovým gelem všech kapes tupou jehlou. Tato subgingivální aplikace byla opakována v den 8. Po dobu 14 dnů po léčbě byli pacienti instruováni, aby si dvakrát denně vyplachovali po dobu 1 minuty 0,2% roztokem chlorhexidinu a stříkali mandle dvakrát denně sprejem 0,2% chlorhexidinu. Opakovaná vyšetření byla provedena po 1, 3 a 6 měsících po 14denním vymývacím období.

Bezprostředně po prvním sezení skupiny Q-SRP a dokončení ultrazvukového debridementu ve skupinách FMD a FMUD dostali všichni pacienti standardní pokyny pro ústní hygienu.

Vzorkování GCF

GCF byl odebrán z bukálních aspektů dvou nesousedících interproximálních míst u jednokořenových zubů s PD ≥ 6 mm, CAL ≥ 5 mm a viditelnými známkami zánětu na počátku. Opakovaný odběr vzorků byl opakován 1 měsíc, 3 měsíce a 6 měsíců po léčbě. Pro odběr vzorků GCF byly použity standardizované proužky filtračního papíru. Absorbovaný objem tekutiny byl měřen předem kalibrovaným elektronickým zařízením. Papírové proužky byly skladovány při -40 °C pro další analýzu.

Odběr subgingiválního plaku

Po odběru GCF byly vzorky subgingiválního plaku odebrány z jednoho místa na kvadrant s nejhlubší PD (≥5 mm) jednokořenových zubů na začátku a 1 měsíc, 3 měsíce a 6 měsíců po léčbě pomocí dvou standardizovaných sterilních papírů č. 30 body. Spojené vzorky byly skladovány při -40°C pro další analýzu.

Měření hladin kalprotektinu, osteokalcinu a NTx v GCF.

Dva papírové proužky byly spojeny, umístěny do 300 mikrolitrů fosfátem pufrovaného fyziologického roztoku obsahujícího 0,05% polysorbát 20 a inkubovány po dobu 20 minut při teplotě místnosti na orbitální třepačce. Tekutina z papírových proužků byla získána centrifugací při 13 000 otáčkách za minutu po dobu 5 minut při +4 °C. Hladiny kalprotektinu, osteokalcinu a NTx ve vzorcích GCF byly měřeny pomocí ELISA za použití komerčních souprav v souladu s pokyny výrobce. Destičky byly měřeny při 450 nm s 650 nm jako referenční vlnovou délkou pomocí čtečky ELISA. Koncentrace cytokinů byly vypočteny ze standardní křivky. Výsledky GCF byly vyjádřeny jako celková množství na dvou místech za dobu vzorkování.

Molekulární detekce cílových bakterií v subgingiválním plaku.

Ke kvantitativní detekci vybraných parodontálních patogenů v subgingiválním plaku byla použita metoda kvantitativní real-time PCR (qPCR). Celková mikrobiální DNA na papírových bodech byla extrahována pomocí sady High Pure PCR Template Preparation Kit podle pokynů výrobce. Pro detekci cílových oligonukleotidů byla použita souprava LightCycler FastStart DNA Master SYBR Green I Kit podle pokynů výrobce. Protokoly PCR v reálném čase byly konstruovány s ohledem na specifické sady primerů. Pro výpočet cílových oligonukleotidů ve vzorcích byly sestrojeny standardní křivky.

Statistická analýza

K detekci intra- a meziskupinových rozdílů v klinických, mikrobiologických a biochemických parametrech byla použita analýza rozptylu opakovaných měření (ANOVA). Analýza kovariance byla použita pro srovnání zlepšení parametrů mezi třemi léčebnými skupinami s úpravou na potenciální rozdíl ve výchozích datech a Bonferroniho test byl proveden post-hoc. Hladina významnosti byla stanovena na p <0,05.