Approcci terapeutici a bocca piena nella parodontite cronica grave.

Popolazione in studio ed esame clinico

Per lo studio sono stati reclutati 60 pazienti con parodontite cronica grave consecutivi.

L'esame parodontale clinico della bocca intera comprendeva la misurazione della profondità di sondaggio, del livello di attacco clinico e dell'indice di placca in 6 siti per dente, ad eccezione dei terzi molari. L'indice di sanguinamento papillare è stato registrato per l'intera cavità orale. I parametri parodontali clinici sono stati registrati al basale e 1 mese, 3 mesi e 6 mesi dopo i trattamenti. La perdita ossea alveolare è stata valutata utilizzando una radiografia panoramica digitale in ciascun partecipante.

La diagnosi di parodontite cronica grave si basava sui criteri diagnostici clinici e radiografici proposti dal Workshop internazionale per la classificazione delle malattie e condizioni parodontali del 1999. Questi individui avevano un minimo di quattro denti non adiacenti con siti con PD ≥6 mm e CAL ≥5 mm. Avevano anche una perdita ossea alveolare ≥50% in almeno due quadranti commisurata alla quantità di accumulo di placca.

Tutte le misurazioni cliniche, il campionamento GCF e della placca e anche tutti i trattamenti sono stati eseguiti dallo stesso investigatore calibrato e addestrato (B.A.) in modo standardizzato (studio in cieco singolo).

Trattamento

Alla visita basale, immediatamente prima del trattamento parodontale non chirurgico, sono stati raccolti campioni di GCF e placca sottogengivale per paziente e sono state registrate misurazioni parodontali cliniche in tutti i gruppi.

Nel gruppo Q-SRP, gli SRP sono stati avviati con il quadrante in alto a destra e continuati in senso orario per quattro visite a intervalli settimanali. La SRP è stata eseguita utilizzando un assortimento di curette parodontali manuali. Le superfici del dente sono state strumentate fino a quando non erano visivamente e tattilmente prive di tutti i depositi. I riesami sono stati eseguiti a 1, 3 e 6 mesi dopo il completamento dell'SRP nel quadrante in basso a destra.

Nel gruppo FMUD, lo sbrigliamento sottogengivale è stato eseguito nella mascella superiore nella sessione mattutina e nella mascella inferiore nella sessione pomeridiana. La procedura è stata completata in due visite (con intervallo di 45 minuti) nella stessa giornata. Tutti i siti parodontali sono stati sbrigliati da uno strumento ultrasonico piezoceramico con inserti non modificati e modificati. Ogni dente è stato strumentato fino a quando la superficie della radice era visivamente e tattilmente pulita e liscia. I riesami sono stati eseguiti a 1, 3 e 6 mesi dopo il completamento del debridman sottogengivale a bocca piena.

Nel gruppo FMD, il debridman subgengivale ultrasonico è stato combinato con un regime antimicrobico intensivo con clorexidina. Il dorso della lingua è stato spazzolato con un gel di clorexidina all'1% per 1 minuto. I pazienti sono stati istruiti a sciacquare due volte per 1 minuto con una soluzione di clorexidina allo 0,2%. Ogni tonsilla è stata spruzzata quattro volte con spray di clorexidina allo 0,2%. Ripetute irrigazioni sottogengivali con gel di clorexidina all'1% di tutte le tasche con un ago smussato. Questa applicazione subgengivale è stata ripetuta al giorno 8. Per 14 giorni dopo il trattamento, i pazienti sono stati istruiti a sciacquarsi due volte al giorno per 1 minuto con una soluzione di clorexidina allo 0,2% e a spruzzare le tonsille due volte al giorno con uno spray di clorexidina allo 0,2%. I riesami sono stati eseguiti a 1, 3 e 6 mesi dopo un periodo di washout di 14 giorni.

Le istruzioni standard di igiene orale sono state fornite a tutti i pazienti immediatamente dopo la prima sessione del gruppo Q-SRP e il completamento del debridement ultrasonico nei gruppi FMD e FMUD.

Campionamento GCF

Il GCF è stato campionato dagli aspetti buccali di due siti interprossimali non adiacenti in denti a radice singola con PD ≥6 mm, CAL ≥5 mm e segni visibili di infiammazione al basale. Il ricampionamento è stato ripetuto a 1 mese, 3 mesi e 6 mesi dopo il trattamento. Per il campionamento GCF sono state utilizzate strisce di carta da filtro standardizzate. Il volume del fluido assorbito è stato misurato con un dispositivo elettronico precalibrato. Le strisce di carta sono state conservate a -40◦C per ulteriori analisi.

Prelievo di placca sottogengivale

Dopo la raccolta GCF, i campioni di placca sottogengivale sono stati prelevati da un sito per quadrante con il PD più profondo (≥5 mm) di denti a radice singola al basale e 1 mese, 3 mesi e 6 mesi dopo il trattamento utilizzando due cartine sterili standardizzate n.30 punti. I campioni raggruppati sono stati conservati a -40◦C per ulteriori analisi.

Misurazione dei livelli di calprotectina, osteocalcina e NTx in GCF.

Due strisce di carta sono state raggruppate, poste in soluzione salina tamponata con fosfato da 300 microlitri contenente lo 0,05% di polisorbato 20 e incubate per 20 minuti a temperatura ambiente su un agitatore orbitale. Il fluido dalle strisce di carta è stato recuperato mediante centrifugazione a 13.000 rpm per 5 minuti a +4◦C. I livelli di calprotectina, osteocalcina e NTx nei campioni GCF sono stati misurati mediante ELISA utilizzando kit commerciali in linea con le linee guida del produttore. Le piastre sono state misurate a 450 nm con 650 nm come lunghezza d'onda di riferimento utilizzando un lettore ELISA. Le concentrazioni di citochine sono state calcolate dalla curva standard. I risultati GCF sono stati espressi come quantità totali in due siti per tempo di campionamento.

Rilevazione molecolare di batteri bersaglio nella placca sottogengivale.

Il metodo PCR quantitativo in tempo reale (qPCR) è stato utilizzato per il rilevamento quantitativo dei patogeni parodontali selezionati nella placca sottogengivale. Il DNA microbico totale sui punti di carta è stato estratto utilizzando il kit di preparazione del modello High Pure PCR secondo le istruzioni del produttore. Il kit LightCycler FastStart DNA Master SYBR Green I è stato utilizzato per il rilevamento degli oligonucleotidi bersaglio secondo le istruzioni del produttore. I protocolli PCR in tempo reale sono stati costruiti considerando specifici set di primer. Sono state costruite curve standard per il calcolo degli oligonucleotidi target nei campioni.

Analisi statistica

L'analisi della varianza per misure ripetute (ANOVA) è stata utilizzata per rilevare le differenze intra e intergruppo nei parametri clinici, microbiologici e biochimici. L'analisi della covarianza è stata utilizzata per confrontare i miglioramenti nei parametri tra i tre gruppi di trattamento aggiustando per la potenziale differenza nei dati di riferimento e il test di Bonferroni è stato eseguito post-hoc. Il livello di significatività è stato fissato a p <0,05.