LRP1-methylering og tyktarmskræft

Kolorektal cancer (CRC) er et stort folkesundhedsproblem i Frankrig og på verdensplan. CRC er den tredjehyppigste cancer i incidens og dødelighed i Frankrig. Langt de fleste af disse kræftformer er adenokarcinomer, der opstår sporadisk og udvikler sig fra prækursorlæsioner: adenom. Alle CRC med samme sygdomsstadium har ikke den samme prognose. Forskellige parametre er blevet identificeret som faktorer, der påvirker prognosen og muliggør justering af behandlingen. De dårlige histoprognostiske faktorer er kar- og nerveinvasion af tumoren eller den mucinøse adenokarcinom-subtype. På molekylært niveau forbedrer tilstedeværelsen af ​​mikrosatellit-instabilitet (MSI) prognosen, mens tilstedeværelsen af ​​en BRAF-mutation er en uafhængig dårlig prognostisk faktor.

De forskellige molekylære veje for coloncarcinogenese er den kromosomale ustabilitetsvej, mikrosatellit-ustabilitetsvejen, der inducerer fejl i DNA-mismatch-reparation og CpG Island Methylator Phenotype (CIMP). Hypermethyleringen af ​​CpG-øer af genpromotorer fører til en over- eller oftest under-genekspression. CIMP observeres i næsten 15 % af CRC og er forbundet med specifikke kliniske og patologiske træk: ældre patienter, kvindelig dominans, højre colon involvering, dårligt differentierede eller mucinøse adenokarcinomer. Fra et molekylært synspunkt er den høje CIMP-fænotype stærkt forbundet med tilstedeværelsen af ​​BRAFV600E-mutation, fraværet af RAS-mutation og tilstedeværelsen af ​​mikrosatellit-ustabilitet. Den prognostiske værdi af CIMP er faktisk kontroversiel. En nylig meta-analyse fandt, at CIMP-fænotypen var forbundet med en dårlig prognose. Methylering af nogle gener promotorer som CDKN2A er forbundet med en dårlig prognose.

LRP-1 (low density lipoprotein receptor-relateret protein 1) er en multifunktionel endocytisk receptor, der tilhører familien LDL-receptorer. Det medierer clearance af mange ekstracellulære enzymer involveret i spredningen af ​​cancerceller: metalloproteinaser og serinproteinaser. Fald i LRP-1-aktivitet eller tab af LRP-1-ekspression korrelerer med øget aggressivitet af cancerceller i visse typer cancer. Ekspressionen af ​​LRP-1 er næsten aldrig blevet undersøgt i CRC. Kun én immunhistokemisk undersøgelse af LRP-1-proteinekspression i colonadenokarcinom er blevet offentliggjort til dato. Denne undersøgelse viser, at tumorceller udtrykker LRP-1, men i næsten halvdelen af ​​tilfældene svagere end i normale celler kolik. Mekanismerne involveret i faldet i ekspression er ikke kendte.

En epigenetisk mekanisme kan være involveret som hypermethylering af LRP-1-genpromotoren, især da promotoren af ​​dette gen er rig på CpG-øer (methyleringsmål).

Den kliniske indvirkning af niveauet af LRP-1-ekspression på den samlede overlevelse af cancerpatienter er blevet vurderet i to undersøgelser: en på patienter, der lider af hepatocellulært karcinom, og en på patienter, der lider af primitive lungeadenokarcinomer. I begge undersøgelser korrelerede faldet i immunhistokemisk og genekspression af LRP-1 med et samlet overlevelsesfald. Den kliniske og prognostiske virkning af LRP-1-ekspression i CRC og dens sammenhæng med en bestemt molekylær eller morfologisk profil er ikke blevet undersøgt til dato.

I dette arbejde vil efterforskerne studere methyleringsmønsteret af LRP-1-genpromotoren i en velkarakteriseret serie af CRC.

Hovedformålet med denne undersøgelse er at studere ved methyleringsanalyse rollen LRP-1-promotorgen-methylering i prognosen for CRC.

Det sekundære formål med denne undersøgelse er at evaluere den prognostiske effekt af CIMP.

Denne undersøgelse vil være den første til at udforske LRP-1-genpromotorens methylering i CRC. Denne undersøgelse vil bidrage til at øge viden om den prognostiske rolle af LRP-1-genpromotor-methylering i CRC og dens mulige sammenhæng med kliniske, morfologiske eller molekylære parametre.

Denne undersøgelse er et enkeltcenter retrospektivt kohortestudie.

Efterforskerne vil først designe listen over alle kvalificerede patienter ved at bruge en anmodning i softwaren DIAMIC fra patologiafdelingen med komponentkode "colon", skadekode "adenocarcinoma" og perioden "mellem 2006 og 2012". Patienter, der lider af Lynch syndrom eller andet familiært cancersyndrom, vil blive udelukket fra undersøgelsen. Informeret samtykke vil blive sendt til alle de udvalgte patienter.

Når patientlisten er udfyldt:

• Patienternes journaler vil blive gennemgået for: sociodemografiske og kliniske data colon tumor lokalisering, TNM stadium, MSI, RAS og BRAF status, tilstedeværelse af synkrone metastaser, behandlingstype og varighed, patientopfølgning op til datoen 01/06/2016 punkt (metastaserforekomst, sygdomstilbagefald, patientdød, ...).
• En central gennemgang af alle patologiske objektglas vil blive udført for disse kriterier: adenokarcinom-subtype i henhold til WHO 2010-klassifikation, differentiering, association med polypper og deres typer, pTNM-stadium, invasionsfront og spirende, stromatype, tilstedeværelse og mængde af tumornekrose).

• Methyleringsanalyse:

  • LRP1-genpromotor-methyleringsanalyse ved pyrosequencing.
  • CIMP-statusbestemmelse ved højopløsningssmelteanalyse af MLH1-, MINT1-, MINT2-, MINT31- og CDKN2A-genpromotorer.

Statistisk analyse:

• Databeskrivelse: gennemsnit og standardafvigelse for kvantitative variable; antal og procent for kategoriske variable.
• Sammenligning af tumorer med en høj methylering af LRP-1-genpromotoren og tumorer med ikke eller ringe methylering af LRP-1-genpromotoren ved univariat analyse (Students test og Wilcoxon-testen, Chi2 eller Fishers eksakte) og multivariat (logistisk regression) .
• Søgefaktorer forbundet med patientresultater, herunder methylering af LRP1-promoter og CIMP-status, ved univariat analyse (log-rank test) og multivariat (Cox-model).