Behandling af unormalt befrugtede zygoter? InVitro-korrektion af 3PN

Som godkendt af Dyban og Baranov et al., er omkring 15-18% af aborterne forårsaget af triploidy befrugtning. En af kilderne til maternal triploidi er svigt i den første meiotiske division (Jacobs et al., 1978).

En af Digynic triploidy er udviklet af befrugtet kæmpe oocyt (Dyban og Baranov, 1987) {nuklear men ingen cytoplasmatisk deling i et oogonium eller cytoplasmatisk fusion af to oogonier (Austin, 1960)}.

Kæmpe oocyt karakteriseret med større diameter og vil skelne polære legemer ved metafase II.

B. Rosenbusch et. al. 2002, cytogenetisk undersøgelse viste, at ekstra haploid moderkopi er forbundet med MII (46,XX/2N ) kæmpe oocytter samt triploidi med befrugtede kæmpe oocytter (3N med 69,XXX eller 69,XXY).

Første mitotiske divisionsplan med polære akseundersøgelser af Scott, 2001, viser, at Pn udviklet tættere på 2. polært legeme er den maternale oprindelse PN.

Kæmpe-oocytter blev indsamlet fra forskellige IVF-cyklusser for at blive injiceret med normal sæd ved hjælp af Intracytoplasmatisk sæd-injektion (ICSI). 18 timer efter ICSI sørgede for befrugtningsevaluering og PN-fjernelse for befrugtet oocyt før syngami starter.

Video vedhæftet viser processen med zygote manipulation ved at undgå divisionsaksen og fokusere den ekstra maternelle PN, der skal aspireres.

Pronuklear overførsel i menneskelige embryoner til mitokondriel DNA-korrektion startede metoden til pronuklear manipulation, for muligheden for at bruge 3PNs udviklede embryoner forskningsværktøjer kan startes. Vi arrangerede at studere tilgængelige modtagne gigantiske oocytter under IVF-cyklusser. I overensstemmelse hermed sørgede vi for pronuklear fjernelse efterfulgt af FISH-evaluering for at målrette normale mandlige embryoner, der sikrer korrekt ekstra maternel pronucleusfjernelse.

Vellykkede forsøg med maternel PN-fjernelse for kæmpe oocytter indsamlet fra forskellige tilfælde opsummeret i tabel 1. Alle udviklede blastocyster arrangeret for FISH, så alle embryoner blev brugt til cytogenetisk evaluering.

Anbefalinger:

Yderligere evalueringer ved hjælp af STR'er (Short tandem repeat) bør anvendes til moder-fader-genomdifferentiering. NGS-undersøgelse er under evaluering for udviklede embryoner til fuld CCS-rapportering og mere genetisk integritet. Epigenetisk evalueringsundersøgelse anbefales til triploidikorrigerede embryoner for genetiske udtryk og tidlige embryoudviklinger samt differentiering mellem faderlig og maternel genomisk aktivitet.