Establecimiento de nuevas técnicas de detección para diversas enfermedades relacionadas con la genética mediante la aplicación de la plataforma DHPLC.

La atrofia muscular espinal proximal es un trastorno autosómico recesivo con una incidencia global de 1 en 10000 nacidos vivos y una frecuencia de portadores de 1 en 50. Esta grave enfermedad neuromuscular se caracteriza por una degeneración y pérdida de las neuronas motoras alfa de las células del asta anterior de la médula espinal, lo que provoca debilidad simétrica progresiva, atrofia de los músculos voluntarios proximales y muerte infantil. Aquí, presentamos un método nuevo, rápido, simple y altamente confiable para detectar la eliminación de SMN1 y determinar el número de copias de SMN1 y SMN2 desnaturalizando la cromatografía líquida de alto rendimiento (DHPLC). Demostramos que este ensayo puede distinguir con precisión 2 copias de genes de 4 copias de genes y puede identificar portadores de AME y poblaciones normales mediante la determinación precisa del número de copias de SMN.

La prueba de ADN fecal es una herramienta prometedora para la detección del cáncer colorrectal. Los investigadores han demostrado que el ADN es un buen marcador ya que es estable en las heces; se derramó continuamente; y, mediante el uso de pruebas de amplificación, puede detectarse en cantidades diminutas. Se han caracterizado muchas mutaciones de ADN asociadas con el proceso de carcinogénesis del cáncer de colon. El oncogén K-ras, la poliposis coli adenomatosa (APC), p53 y los marcadores de microsatélites son ejemplos de genes identificados como marcadores de ADN en las pruebas de heces porque son fundamentales para el control del crecimiento de las células colorrectales. Los primeros estudios clínicos han demostrado que las pruebas de ADN multiobjetivo tienen una sensibilidad del 71 % al 91 % para la detección de cáncer y una sensibilidad del 55 % al 82 % para detectar adenomas de 1 cm o más. Diseñamos este estudio, mediante el uso del análisis DHPLC automatizado y los marcadores de microsatélites establecidos al principio, para configurar paso a paso un método de detección de alto rendimiento pero sensible y específico para la detección del cáncer colorrectal.

La hiperbilirrubinemia neonatal es un problema común y preocupa no solo a los pediatras sino también a los padres de los recién nacidos. Se destacan dos enzimas clave, la UDP-glucuronosil transferasa 1A1 y la hemooxigenasa-1 (HO-1), que involucran el metabolismo de la bilirrubina. Primero, UGT1A1 es la enzima clave para la conjugación de bilirrubina y las mutaciones de UGT1A1 causan las hiperbilirrubinemias no conjugadas conocidas como síndrome de Crigler-Najjar y síndrome de Gilbert. Se encontró que la alta frecuencia de alelos de Gly71Arg y el polimorfismo del promotor en el gen UGT1A1 son responsables de la hiperbilirrubinemia neonatal sin una causa obvia. En segundo lugar, HO-1 es una enzima limitante de la velocidad en el metabolismo del hemo y permite la degradación del hemo a biliverdina. Recientemente, Maruo et al. demostraron que (16/17) los lactantes japoneses amamantados con aparente ictericia prolongada tenían al menos una mutación de la UGT1A1. Estos datos sugirieron que los defectos de UGT1A1 pueden ser una causa subyacente de la hiperbilirrubinemia no conjugada prolongada asociada con la leche materna. Sin embargo, hasta la fecha, la asociación entre los lactantes con hiperbilirrubinemia grave y la mutación del gen UGT1A1 aún no está clara. En este estudio, analizaremos los genes UGT1A1 y HO-1 de bebés con hiperbilirrubinemia no conjugada asociada con la leche materna para determinar si hay factores genéticos involucrados.

Este proyecto contribuirá a aplicar DHPLC en el establecimiento de varias aplicaciones novedosas, rápidas y confiables para el diagnóstico de AME y la detección de portadores de los genes SMN1 y SMN2, método de detección sensible y específico para la detección del cáncer colorrectal, y analizar los genes UGT1A1 y HO-1 de lactantes con hiperbilirrubinemia no conjugada asociada a la leche materna.