Etablering af nye detektionsteknikker for forskellige genetiske relaterede sygdomme ved at anvende DHPLC-platformen.

Proksimal spinal muskelatrofi er en autosomal recessiv lidelse med en samlet forekomst på 1 ud af 10.000 levendefødte og en bærerhyppighed på 1 ud af 50. Denne alvorlige neuromuskulære sygdom er karakteriseret ved en degeneration og tab af alfamotoriske neuroner i rygmarvens forreste hornceller, hvilket resulterer i progressiv symmetrisk svaghed, atrofi af de proksimale frivillige muskler og spædbarnsdød. Her præsenterer vi en ny, hurtig, enkel og høj pålidelig metode til at detektere SMN1-sletningen og bestemme kopiantallet af SMN1 og SMN2 ved denaturerende højtydende væskekromatografi (DHPLC). Vi demonstrerer, at denne analyse er i stand til nøjagtigt at skelne 2 genkopier fra 4 genkopier, og den kan identificere SMA-bærere og normale populationer ved nøjagtig bestemmelse af SMN-kopinummer.

Fækal DNA-test er et lovende værktøj til screening af tyktarmskræft. Forskere har vist, at DNA er en god markør, da det er stabilt i afføringen; den fældede uafbrudt; og ved brug af amplifikationstest kan det påvises i små mængder. Mange DNA-mutationer forbundet med processen med carcinogenese i tyktarmskræft er blevet karakteriseret. K-ras onkogen, adenomatøs polyposis coli (APC), p53 og mikrosatellitmarkører er eksempler på gener, der er målrettet som DNA-markører i afføringstest, fordi de er afgørende for kontrollen af ​​kolorektal cellevækst. Tidlige kliniske undersøgelser har vist, at multitarget DNA-test har en følsomhed på 71 % til 91 % til påvisning af cancer og en følsomhed på 55 % til 82 % til påvisning af adenom 1 cm eller større. Vi designer denne undersøgelse ved at bruge den automatiserede DHPLC-analyse og de mikrosatellitmarkører, der allerede er sat i starten, til trinvist at opsætte en høj gennemløbshastighed, men følsom og specifik screeningsmetode til screening af kolorektal cancer.

Neonatal hyperbilirubinæmi er et almindeligt problem og bekymrer ikke kun børnelæger, men også forældre til nyfødte. To nøgleenzymer, UDP-glucuronosyl-transferase 1A1 og hæm-oxygenase-1 (HO-1), der involverer bilirubinmetabolisme er meget bemærket. For det første er UGT1A1 nøgleenzymet for bilirubinkonjugation og mutationer af UGT1A1 forårsager de ukonjugerede hyperbilirubinæmier kendt som Crigler-Najjar syndrom og Gilberts syndrom. Den høje allel-frekvens af Gly71Arg og promotorpolymorfi i UGT1A1-genet viste sig at være ansvarlig for neonatal hyperbilirubinæmi uden åbenbar årsag. For det andet er HO-1 et hastighedsbegrænsende enzym i hæmmetabolismen og muliggør nedbrydning af hæm til biliverdin. For nylig har Maruo et al. påvist, at (16/17) ammede japanske spædbørn med tilsyneladende langvarig gulsot havde mindst én mutation af UGT1A1. Disse data tydede på, at defekter af UGT1A1 kan være en underliggende årsag til den langvarige ukonjugerede hyperbilirubinæmi forbundet med modermælk. Til dato er sammenhængen mellem ammede spædbørn med svær hyperbilirubinæmi og UGT1A1-genmutation dog stadig uklar. I denne undersøgelse vil vi analysere UGT1A1- og HO-1-generne fra spædbørn med ukonjugeret hyperbilirubinæmi forbundet med modermælk for at fastslå, om genetiske faktorer er involveret.

Dette projekt vil bidrage til at anvende DHPLC på etablering af forskellige romaner, hurtige og pålidelige applikationer til diagnosticering af SMA og bærerdetektion af SMN1- og SMN2-gener, følsom og specifik screeningsmetode til kolorektal cancerscreening og analysere UGT1A1- og HO-1-gener af spædbørn med ukonjugeret hyperbilirubinæmi forbundet med modermælk.