Prélèvement de sang chez des sujets normaux et des sujets atteints de la maladie de von Willebrand (MVW)

Objectif : Le but de ce protocole est d'obtenir des échantillons de sang de sujets de recherche normaux et de patients atteints de la maladie de Von Willebrand afin d'isoler les cellules endothéliales d'excroissance sanguine (BOEC) du sang périphérique et de développer un transfert de gène ex vivo pour la maladie de Von Willebrand.

Procédure expérimentale. Ce protocole est conçu pour recueillir environ 90 ml (6 cuillères à soupe) de sang d'individus normaux sans maladie de Von Willebrand et d'individus atteints de la maladie de Von Willebrand connue. Un total de 20 individus normaux et 20 patients atteints de la maladie de von Willebrand seront inscrits à l'étude.

Etudes à réaliser sur les prélèvements sanguins :

Chaque prélèvement sanguin nécessitera 10 grands vacutainers à capuchon bleu/noir (citrate de Na) (16 x 125 mm, BD # 362761, tubes de préparation de cellules (CPT) à remplir par chaque volontaire. Tout le sang sera utilisé pour le traitement cellulaire.

Dans les premières expériences de preuve de concept, des lignées BOEC seront établies à partir du sang périphérique d'individus normaux et de sujets de recherche atteints de la maladie de Von Willebrand. Après culture et caractérisation phénotypique, ils seront transduits avec un vecteur de transfert de gène lentivirus exprimant un gène rapporteur ou facteur Von Willebrand de type sauvage. Après avoir démontré une transduction réussie, la prochaine étape consistera à rédiger un protocole animal qui introduira les cellules modifiées dans des souris immunodéprimées et surveillera les souris pour une implantation stable.