Emberi orr-kihívási modellek fejlesztése mikrobiális összetevőkkel és fű pollennel

TANULMÁNYTERVEZÉS ÉS MÓDSZERTAN

A vizsgálat 3 részből áll, különböző orrspray-kihívásokkal, amelyeket az alanyoknak adnak be:

1. Bakteriális vagy vírusos komponensek, amelyek egy adott betegben a következők egyikét tartalmazzák;

   1. Az MPLA (monofoszforil-lipid A) a bakteriális lipopoliszacharidra hasonlít
   2. PolyIC (poliinozinsav és citidilsav): vírus komponens
   3. PolyICLC (poliLlizinnel stabilizált poliIC): vírus komponens
   4. Resiquimod: vírus utánzó
2. Tuberkulin: részlegesen tisztított fehérjeszármazék (PPD) a Mycobacterium bovis-ból, a tbc-t okozó baktériumból.
3. Allergén: Az orrspray-t kiváltó szer a Timothy fű pollenje.

TOBORZÁS

A cél összesen 174 alany toborzása. Az alanyokat az újságokban megjelenő hirdetések, az egyetemen elhelyezett plakátok, a háziorvosi szolgáltatások, a St. Mary's Kórház járóbeteg-klinikái, beleértve a St. Mary's Kórház TB-klinikáit is azonosítják. Teljes körű tájékoztatáson alapuló beleegyezést kapunk. Minden adatot a GCP és a helyi információs irányítási irányelvek szerint kezelünk.

TÁRGYAK SZÁMA ÉS ADAGOLÁSA

1. RÉSZ: Orrban növekvő dózisú provokáció mikrobiális összetevőkkel MPLA, polyIC, polyICLC és resiquimod alkalmazásával. Ez fel van osztva A és B részre.

1A. RÉSZ (n=32): Inkrementális növekvő dózisú vizsgálat a tolerálhatóság és a SAM alapján. 8 egészséges önkéntesből álló 4 kohorsz (8 közül 4 fű pollenre, házi poratkára allergiás vagy szénanáthás kórtörténetben szenvedett). Minden egyes mikrobiális összetevőhöz egy kohorsz. Minden kohorsz kap egy orr-sóoldat-kontroll-próbát és három növekvő dózist az orr-mikrobiális összetevő-kihívásból:

• 10μg mikrobiális összetevő 100μl sóoldatban
• 100μg mikrobiális összetevő 100μl sóoldatban
• 500μg mikrobiális összetevő 100μl sóoldatban

1B. RÉSZ (n=64): Egyetlen felső adag további speciális mintavételi szondával (SSP) és kürettel, legfeljebb 16 egészséges önkéntesből álló csoport (16-ból 8 fű pollenallergiája, háziporatka, szénanátha a kórtörténetben). Minden alany kapott sóoldat kontrollt és egyetlen felső dózist a tolerálhatóság és a SAM válasz megállapítása után.

RESIQUIMOD:

A B részben 10 μg orrlyukonként 36 önkéntesnek adnak be:

12 allergiás asztmás 12 atópiás önkéntes 12 nem atópiás önkéntes

2. RÉSZ: Az orrban növekvő dózisú provokáció tuberkulinnal. Ez fel van osztva A és B részre.

2A. RÉSZ (n=16): Ez összesen 16 látens TBC-s (LTB) alanyból áll. Ez a csoport 4 alanyból álló 4 csoportra van felosztva a beadott tuberkulin dózisa szerint;

• 0,1 TU 100 μl-ben, n = 4
• 1,0 TU 100 μl-ben, n = 4
• 2,0 TU 100 μl-ben, n = 4
• 5,0 TU 100 μl-ben, n = 4 Minden kohorsznak csak 1 kihívása van. A kezdő adag nagyon alacsony, 0,1 TU. Ha jól tolerálható, az alany a következő magasabb, 1,0 TU dózist kapja. Ha ezt is jól tolerálják, az alany a következő magasabb, 2,0 TU dózisra, majd a csoport legmagasabb, 5,0 TU dózisára lép, biztosítva az alanyok biztonságát mindenkor.

2B. RÉSZ (N=16): Felső dózis további mintavétellel. Ez 16 emberből áll, két csoportban (8 egészséges önkéntes és 8 látens tbc-s alany).

1. csoport: Látens TBC alany, sz. fő = 8 Ez a csoport kapja a legnagyobb adagot (5-10,0 TU) a tuberkulin kihívás. Az egyes csoportok 8 alanyából 2-nek placebót (sóoldattal készült álpermetet), a maradék 6-nak pedig tuberkulin spray-t kap.

2. csoport: Egészséges önkéntesek, sz. fő = 8 Ez a csoport kapja a felső adagot is (5-10,0 TU) a tuberkulinfertőzés, a tolerálhatóság függvényében. A 8 alany közül 2 kap placebót (sóoldatos próbabab spray), a maradék 6 pedig tuberkulin spray-t kap.

3. RÉSZ (n=46): Az orr allergén elleni küzdelem Timothy Grass pollenjével

Kezdetben 30 főt kell vizsgálni: egy 12 fős csoport szénanáthás, egy 12 fős asztmás és fűpollenallergiás, egy 6 fős csoport pedig nem allergiás és nem asztmás. Egy további csoportban 16 szénanáthás személyt kell vizsgálni úgy, hogy a felszíni orrnyálkahártya folyadékából folyamatos mintákat vesznek speciális mintavevő szondával (SSP) az orrspray-próbát követően.

1. 1. csoport: szénanáthás emberek, n ​​= 12
2. 2. csoport: allergiás asztmában szenvedők, n = 12
3. 3. csoport: egészséges, nem atópiás emberek, n ​​= 6
4. További 4. csoport: szénanáthások, n=16

A NAZÁLIS ELJÁRÁSOK A TANULMÁNYBAN

1. Orrmosás (orrmosás): A nap elején az orrban az orrmosást úgy kell elvégezni, hogy kis mennyiségű sós vizet (sóoldatot) engedünk az orrba. Ezt az eljárást az orr tisztítására szolgáló egyéb eljárások előtt kell elvégezni. Az orrmosásból nyert folyadékot eldobják, és nem elemzik.
2. Az orrburkoló folyadék felszívása (nazoszorpció vagy SAM): Egy kis csík nedvszívó anyagból, amely úgy néz ki, mint a puha selyempapír, az orrlyuk belső felületéről való nedvesség felszívására szolgál. A speciális nedvszívó papírt az orrlyukba helyezik, és 2 percig hagyják, hogy felszívja az orrnyálkahártya-folyadékot, mielőtt eltávolítaná, és óvatosan szívja fel a folyadékot, mint az itatópapír. Ha a papírt az orrba helyezi, az csiklandozhat, és kissé könnybe lábadhat a szeme. Az orrfelszívódás azonban nem árt, és módszerünk jól tolerálhatónak bizonyult csecsemőknél, gyerekeknél és felnőtteknél. A papír magába szívja az orrfolyadékot, és az orrsejtek által termelt számos anyag kivonható a papírból, és a laboratóriumban mérhető.
3. Orrkaparás (orrküretázs vagy Rhinoprobe): Egy kis, steril eldobható műanyag szondát helyeznek az orrba, és finoman az orrlyuk belső felületéhez nyomják. A 3 hüvelyk hosszú szondának egy apró gombóc van a végén, amit alig lehet látni. Mindegyik orrlyukból 24 apró mintát vesznek (egy gombostűfej, 2 mm-es szövet) az orr azon részéből, ahol csökkent az idegellátás, hogy csökkentsék a kellemetlen érzéseket. Ennek a mintának a vétele nem okoz vérzést, de enyhe kellemetlenséget okozhat, és enyhén könnyezhet a szem. A szonda összegyűjti az orrsejteket az orrlyuk felszínéről, amelyeket ezután elemzésre küld. Ezt a módszert sok felnőtten, gyermeken és csecsemőn alkalmazták, és nagyon jól tolerálták.
4. Speciális mintavételi szonda (SSP): Az orrfelületet bélelő folyadékot speciális mintavevő szondával vagy SSP-vel is össze lehet gyűjteni, amely elektrospray segítségével veri vissza a cseppeket az orrnyálkahártya folyadékáról. Ez úgy történik, hogy néhány órán keresztül folyamatosan mintát veszünk egyetlen orrlyukból. Ha ezt a speciális mintavevő szondát (SSP) használják az emberek orrában, enyhe csiklandozó érzés tapasztalható a mintavétel közben. Ezt alig lehet észrevenni.

STATISZTIKAI ANALÍZIS

Az adatok eloszlását a ShapiroWilks teszt fogja értékelni, amely meghatározza, hogy az adatok normál (paraméteres) vagy nem normál (nem paraméteres) eloszlásúak-e.

A normál adatok grafikusan jelennek meg:

• számtani átlagok és átlagok standard hibája (SEM)
• vagy SD-kkel való eszközök
• vagy konfidencia intervallumokkal (CI)

A nem normál adatok grafikusan jelennek meg:

Box-whisker: medián, kvartilisek, tartomány

A nem normál adatok esetében a kiindulási értéktől való eltéréseket az aktív provokáló szer (különböző dózisokban) és a placebo esetében minden időpontban megmérjük, és az AUC-t kiszámítjuk. Az AUC különbségeit a placebóhoz (aktív placebo) képest kiszámítjuk, és a szignifikanciát a nem paraméteres Wilcoxon előjeles rang teszttel (egy populáción) teszteljük. A görbe alatti területet (AUC) a nazális provokáló szertől függően különböző meghatározott időn keresztül kell beperelni.